柞蚕核型多角体病毒载体表达系统基因工程研究进展

柞蚕是一种野外饲养的经济昆虫，它以蛹滞育越冬，主要分布在我国东北部山区。我国柞蚕年产茧量６万ｔ左右，占世界柞蚕产量的９０％以上。柞蚕核型多角体病毒（ＡｐＮＰＶ）属杆状病毒科Ａ亚组，是柞蚕脓病的病原体，对柞蚕蛹十分敏感。建立柞蚕核型多角体病毒载体表达系统，以柞蚕蛹为宿主昆虫进行外源基因的大量表达生产，具有成本低、安全、易管理，可工业化生产等特点。本文概述作蚕核型多角体病毒载体基因工程研究的进展，其中     

柞蚕免疫系统相关基因ApTOLL1的克隆及两种蚕微孢子虫感染下的诱导表达

[目的]鉴定柞蚕的免疫相关TOLL样受体家族基因,以期为进一步探讨柞蚕的免疫机制奠定基础。[方法]克隆了柞蚕免疫系统相关TOLL样受体家族基因,并进行序列和系统进化分析,同时,利用两种蚕微孢子虫侵染柞蚕,检测TOLL样受体相关基因的表达差异,分析不同病原微孢子虫感染柞蚕后所引起的免疫应激差异。[结果]通过cDNA克隆测序获得一个可能与柞蚕免疫相关的基因片段,序列及系统进化分析显示它与家蚕Toll信号通路中的Toll1基因最为同源,将其命名ApTOLL1基因。进一步对柞蚕蛹分别注射家蚕微孢子虫和柞蚕微孢子虫后,通过实时荧光定量PCR技术分析显示,注射家蚕微孢子虫2 h后蚕蛹内ApTOLL1大量表达,而注射柞蚕微孢子虫11 h后蛹内该基因才开始表达,这表明柞蚕Toll信号通路针对不同病原微孢子所诱导产生的免疫响应时间有所差异。[结论]该研究结果首次克隆了柞蚕ApTOLL1基因,并为进一步研究柞蚕的免疫机制提供了帮助。     

抗菌肽及柞蚕蛹血淋巴粗提液对蔬菜病原细菌的抑制效果

通过人工合成的抗菌肽D基因转化酵母表达产物和自然诱导的柞蚕蛹血淋巴粗提液对枯草杆菌等几种细菌及蔬菜黑腐病菌，软腐病菌抑制作用的试验，结果表明人工合成的抗菌肽D基因转化酵母表达产物对敏感菌大肠杆菌Escherichia coliK12D31及枯草杆菌Bacillus subtilis等多种细菌有较好的抑制效果。自然诱导的柞蚕蛹血淋巴粗提液对敏感菌E.coliK12D31有明显抑制效果，说明经诱导的血淋巴含有抗菌肽，但其对蔬菜病原菌抑制效果较差，其中对黑腐病菌有一定抗性，对软腐病菌没有观察到抗性。     

凤城市柞蚕产业发展分析

凤城市是全国闻名的柞蚕茧主产区，柞蚕放养规模与柞蚕茧产量在全国名列前茅。凤城市具有发展柞蚕生产的诸多有利因素，也有延长柞蚕产业链条的基础；只有挖掘柞蚕生产潜力，广延柞蚕茧深加工链条，柞蚕产业才会有更好的前景。     

利用柞蚕幼虫繁殖rApNPV的研究初报

利用重组柞蚕核型多角体病毒(RecombinantAntheraeapernyiNuclearPolyhedrosisVirus,rApNPV) ,研究了无包涵体重组病毒(含β-半乳糖苷酶基因)在柞蚕幼虫体内的繁殖情况。结果表明 :无包涵体的重组病毒能够在柞蚕幼虫体内正常繁殖并引起继发感染 ,经柞蚕幼虫繁殖的重组病毒粒子能够完成对柞蚕幼虫的再次创伤感染。重组病毒所携带的β-半乳糖苷酶基因经柞蚕幼虫繁殖后仍能在柞蚕幼虫体内获得高效表达 ,表达量达到经培养细胞繁殖的重组病毒在柞蚕幼虫体内的表达水平 ,说明在利用杆状病毒批量表达外源蛋白时 ,可采用昆虫幼虫体内繁殖方法繁殖重组病毒     

柞蚕性信息素合成相关基因的表达研究

[目的]明确与性信息素合成相关基因的组织分布及其在性腺中的发育表达。[方法]利用荧光定量PCR方法,对柞蚕乙酰辅酶A羧化酶、超长链脂肪酸、醇脱氢酶、酯酶、脂肪酶基因在不同组织分布及性腺中的发育表达进行分析。[结果]乙酰辅酶A羧化酶、超长链脂肪酸2个基因在性腺中的表达量显著高于其他组织;醇脱氢酶、酯酶和脂肪酶3个基因在中肠或脂肪体等组织中表达量高于性腺。乙酰辅酶A羧化酶、超长链脂肪酸、醇脱氢酶、脂肪酶4个基因在羽化后2 d性腺中的表达量显著高于羽化前2 d。酯酶基因在羽化后2 d性腺中的表达量显著低于于羽化前2 d。[结论]明确了柞蚕性信息素合成相关的5个基因的组织分布和发育表达,为进一步研究这些性信息素合成相关基因的功能奠定基础。     

柞蚕的放养技术

<正>柞蚕是中国特有的一种生物资源,柞蚕生产是农业生产的重要组成部分,柞蚕茧及其副产物是发展当地经济的重要资源。因此,柞蚕生产对增加国民经济收入和提高人民生活水平具有重要意义。中国是最早利用柞蚕和放养柞蚕的国家。现在中国的柞蚕产分布于10多个省区,以辽宁、河南、山东等省为主。     

柞蚕卵的保存方式对松毛虫赤眼蜂繁殖的影响

试验研究了柞蚕卵的不同保存方式对松毛虫赤眼蜂繁蜂的影响,为松毛虫赤眼蜂繁蜂生产中柞蚕卵合理保存提供科学依据。结果表明:应用新鲜的柞蚕雌蛾取卵粒来繁殖松毛虫赤眼蜂,其寄生率、羽化率、单卵出蜂数等各项主要繁殖指标均最高,其次是冷藏柞蚕雌蛾的保存方式,而保存干的柞蚕卵粒的方式繁殖的松毛虫赤眼蜂,各项主要繁殖指标均明显下降,保存湿的柞蚕卵粒的方式最低。因此,赤眼蜂生产上尽量保证应用新鲜的柞蚕雌蛾卵粒,此外可以采用冷藏柞蚕雌蛾的保存方式,并辅助少量的保存干柞蚕卵粒的方式。     

柞蚕核型多角体病毒基因组编码的VmiRNA筛选及功能分析

[目的]VmiRNA不仅可以控制自身基因,还可调节宿主的稳定表达,研究VmiRNA的功能有助于从分子水平说明核型多角体病毒与柞蚕的寄生关系,从而改进对病毒的防控措施。[方法]利用生物信息学及实时定量PCR等分子生物学相关技术,对柞蚕核型多角体病毒编码的miRNA及其作用的靶标基因进行研究。[结果]经预测和筛选得到了Ap NPV编码的miRNA MD217,与其有关的宿主靶基因14种,主要参与细胞组成、生化过程以及分子功能等途径,涉及到生物体细胞内一些催化、免疫反应等过程;实时定量PCR结果表明,MD217在病毒感染后上调表达,脂肪体组织内的靶基因MAPKK7表达水平与MD217的表达呈正相关。[结论]miRNA MD217在病毒感染后诱导表达,推测很可能降低了宿主免疫系统的防御能力,并同时影响靶基因MAPKK7的功能表达,从而避免了在免疫应答过程中的免疫清除。     

抗菌肽基因异源表达系统研究进展

抗菌肽是机体天然免疫系统的重要组成部分,因具有抗菌谱广、活性稳定、不易产生耐药性等优点而在食品、饲料、农业、医药领域具有重要的应用价值.由于化学合成的成本较高,利用基因工程技术构建高效的生物表达系统成为一个新的途径.综述了抗菌肽在细菌、酵母、植物、动物等表达系统中异源表达的研究进展,为抗菌肽的研究应用提供理论依据.     

抗菌肽基因异源表达系统研究进展

抗菌肽是机体天然免疫系统的重要组成部分,因具有抗菌谱广、活性稳定、不易产生耐药性等优点而在食品、饲料、农业、医药领域具有重要的应用价值。由于化学合成的成本较高,利用基因工程技术构建高效的生物表达系统成为一个新的途径。综述了抗菌肽在细菌、酵母、植物、动物等表达系统中异源表达的研究进展,为抗菌肽的研究应用提供理论依据。     

A stem cell molecular signature

Mechanisms regulating self-renewal and cell fate decisions in mammalian stem cells are poorly understood. We determined global gene expression profiles for mouse and human hematopoietic stem cells and other stages of the hematopoietic hierarchy. Murine and human hematopoietic stem cells share a number of expressed gene products, which define key conserved regulatory pathways in this developmental system. Moreover, in the mouse, a portion of the genetic program of hematopoietic stem cells is shared with embryonic and neural stem cells. This overlapping set of gene products represents a molecular signature of stem cells.     

人源性TAT-Fab抗体的表达优化及生物活性测定

为了提高抗体的表达水平,获得有保护作用的人源性破伤风抗毒素Fab(TAT-Fab)抗体,对人源性TAT-Fab抗体在大肠杆菌中的表达条件进行优化并测定其体内外生物学活性.ELISA显示所表达的TAT-Fab抗体可特异性结合破伤风外毒素,且优化后的表达水平较优化前提高近5倍;表达产物经超滤分离浓缩后,Western-blot显示在分子量约50 kDa处有一TAT-Fab抗体的特异性表达条带;小鼠保护实验显示其可特异性中和破伤风外毒素,明显延长小鼠的生存时间.以上结果表明所制备的人源性TAT-Fab抗体在体内外均具有中和破伤风外毒素的效应,为人源性破伤风抗毒素的研制和生产提供了实验依据.     

川西高原黑唇鼠兔乳酸脱氢酶C基因的原核表达

[目的]研究黑唇鼠兔乳酸脱氢酶C（LDH-C）基因的原核表达及重组蛋白的纯化。[方法]采用RT-PCR方法克隆鼠兔LDH-C基因,并将其连接到表达载体pET-32a上,构建鼠兔LDH-C基因的大肠杆菌BL21（DE3）工程菌,通过IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE进行分析,使用亲和层析方法进行蛋白纯化。[结果]RT-PCR扩增出1条约1.0 kbp的条带,与预期结果相符;重组表达载体经PCR和双酶切鉴定,产生1个约1.0 kbp的目的片段,表明表达载体构建成功;表达产物经SDS-PAGE分析,得到了分子量略大于45.0kDa以包涵体形式存在的融合蛋白;通过镍亲和层析柱进行纯化,得到了较纯的融合蛋白。[结论]黑唇鼠兔LDH-C基因被成功克隆和表达。 更多还原     

Identification of critical staphylococcal genes using conditional phenotypes generated by antisense RNA

Comprehensive genomic analysis of the important human pathogen Staphylococcus aureus was achieved by a strategy involving antisense technology in a regulatable gene expression system. In addition to known essential genes, many genes of unknown or poorly defined biological function were identified. This methodology allowed gene function to be characterized in a comprehensive, defined set of conditionally growth-defective/lethal isogenic strains. Quantitative titration of the conditional growth effect was performed either in bacterial culture or in an animal model of infection. This genomic strategy offers an approach to the identification of staphylococcal gene products that could serve as targets for antibiotic discovery.     

基于Web的农产品追溯系统的设计与开发

[目的]针对目前农产品质量安全管理方面存在的问题,从农产品供应链的角度出发,开发农产品质量安全追溯系统.[方法]运用已有农产品生产质量安全追溯体系的研究成果,基于信息技术、数据库技术、网络技术和国际通用编码技术等信息技术进行农产品质量安全追溯系统的构建与开发.[结果]针对我国农产品生产空间分散、规模化经营程度低、规范化生产条件差的实际情况,在分析我国农产品生产现状和存在问题的基础上,设计和开发了农产品质量安全追溯系统,包括系统设计、运行思路及系统应用等模块.[结论]该系统在充分研究农产品生产、加工、销售跟踪和控制等方面关键技术的基础上,依据网络信息系统设计出农产品质量安全追溯系统,实现了农产品生产流通中的质量跟踪和信息资源共享与协同决策,有效地加强了对农产品的监管,增强了消费者对农产品消费的信心,同时也为企业与政府的监督管理提供了便利.     

我国农产品市场准入法律规制探析

在界定农产品市场准入的概念的基础上,分析了建立我国农产品市场准入制度的必要性。提出了构建我国农产品市场准入制度的构想,设置农产品市场准入制度框架,分析农产品市场准入制度框架合理性,提出了农产品市场准入标准设置的经济法思考。并提出了农产品市场准入制度构建的立法建议：建立以质量准入为核心的农产品市场准入制度框架;建立完善保障生产经营者利益的补偿制度与救济制度;建立有层次结构的农产品市场准入标准制度;梳理现行法并形成完善的农产品市场准入法律框架。     

我国奶制品冷链系统模式研究

奶制品在“后冷链”中所涉及的范围比较广泛,为了进一步保障奶制品的质量安全,就必须构建完善的并且适合的奶制品后冷链系统.如果要想奶制品始终处于低温状态下,就必然离不开完善的冷链系统.本文主要研究了奶制品冷链系统及奶制品冷链模式.     

基于UCC/EAN-128条码的农产品追溯编码研究

基于对国内一些省市农产品质量安全追溯系统的调研,并通过UCC/EAN-128条码对农产品质量安全追溯应用进行深入研究,设计出符合国际物品编码协会（EAN）和美国统一代码委员会（UCC）共同制定的《UCC/EAN应用标示规范》的农产品追溯编码,为农产品追溯系统开发者提供参考。