苎麻纤维素合成酶基因BnCesA4 cDNA序列的克隆与表达分析

利用本地BLAST工具,从先期获得的苎麻转录组数据中发掘出与多种植物纤维素合成酶基因有较高同源性的序列CL6473.以苎麻（Boehmeria nivea）栽培种湘苎3号为材料,根据CL6473设计引物,先采用PCR扩增克隆了苎麻一个纤维素合成酶基因cDNA的核心片段,再运用5′及3′RACE获得该基因全长cDNA,序列分析表明该cDNA为一个新的苎麻纤维素合成酶基因cDNA,命名为BnCesA4.BnCesA4cDNA序列全长4008bp,其中编码区全长3270bp,编码一个含1090aa的多肽,具有植物纤维素酶的保守结构域及特征氨基酸序列.根据该cDNA高可变区序列设计其特异性引物,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对BnCesA4基因在几个代表性苎麻品种：湘苎3号、湘苎1号、湘潭大叶白及城步青麻的木质部和韧皮部两种组织中的表达情况进行了定量分析.qRT-PCR显示BnCesA4基因在不同品种苎麻的木质部及韧皮部均有表达,表达量差异不大.     

青稞B组醇溶蛋白基因5''上游调控区的TAIL-PCR克隆及序列分析

为了阐明青稞种子中B组醇溶蛋白合成的遗传调控机制,为分子改良大麦和小麦籽粒品质奠定基础,以青稞品种Z09和Z26的基因组DNA为模板,根据已克隆的青稞B组醇溶蛋白(B-hordein)基因的5'端序列设计三个基因特异的反向引物,分别与随机简并引物配对,进行热不对称嵌套PCR(Thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)扩增,从两份西藏青稞材料中分离克隆出2个B-hordein基因的上游调控序列.序列测定结果表明,两个扩增片段长度分别为395和396 bp,加上已知B-hordein基因中的GSP2引物序列与翻译起始密码子之间198 bp的长度,则可得到约600 bp的B-hordein基因5'上游调控序列.将所得序列与Genbank中的三个贮藏蛋白基因的对应区段进行序列比对,所得序列与来自野生智利大麦(H.chilense)的B3-hordein基因(Genbank登录号:AY998010)、普通小麦(T.aestivum)的低分子量麦谷蛋白亚基基因(Genbank登录号:X07747)和栽培大麦(H.vulgare)的B-hordein基因(Genbank登录号:X03103)具有81%～95%的序列相似性.推测其TATA box位于-80 bp,CAAT-like box位于-140 bp处.另外,在-300 bp处存在一个胚乳盒(Endosperm Box,EB),包含EM基序和GCN4基序.EM基序高度保守,GCN4基序有一个核苷酸位点的突变.此外,在约-560 bp处存在一个胚乳盒类似结构.     

巴西橡胶树蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和表达分析

分析橡胶树EST数据库,得到一个注释为SPS(蔗糖磷酸合成酶)的EST序列重叠群(contig).通过PCR扩增和测序技术获得该基因的全长cDNA和基因组序列,命名为HbSPS1.序列分析显示,HbSPS1基因长度为5 298 bp,包含13个外显子和12个内含子.对应的cDNA编码序列(CDS)为3 156 bp,推测编码1 050个氨基酸,分子量大小为118.1 ku,等电点为6.05.采用荧光定量PCR技术分析该基因的表达模式,结果表明,HbSPS1基因主要在胶乳中表达,在乙烯利和机械伤害处理的胶乳中呈下调表达,在割胶影响下略有上调表达趋势,同时该基因在叶片发育过程中呈上调表达.说明HbSPS1基因可能参与胶乳蔗糖代谢和叶片发育调控.     

龙眼14-3-3基因及其启动子的克隆以及在体胚发生过程中的表达分析

分离克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织14-3-3基因,并分析该基因在龙眼体胚发生过程中的表达情况。采用RT-PCR结合RACE法,获得龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因的cDNA全长序列和DNA序列,采用TAIL-PCR法,获得龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因的启动子DNA序列,运用生物信息学方法对序列进行分析,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)研究该基因在龙眼体胚发生过程中的表达。结果表明:经克隆得到龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因786 bp的cDNA全长序列(GenBank检索号为GU573765),该cDNA开放阅读框推定的氨基酸序列(含261个氨基酸)与其它植物14-3-3具有较高同源性;该基因的DNA序列(GenBank检索号为GU573766)长为1 859 bp,包含3个内含子,内含子的剪切位点均符合真核生物"GT-AG"规则;该基因的启动子DNA序列(GenBank检索号为GU573766)长为910 bp;该基因在龙眼体胚各阶段均有表达,其中在松散型胚性愈伤组织阶段和心形胚及鱼雷形胚阶段呈现高表达,整个变化趋势呈"倒S"状。     

花生CAX相互作用蛋白4(CXIP4)基因克隆表达分析及载体构建

钙离子是细胞信号传导中重要的第二信使。CAX interacting protein(CXIP)是一类能够激活Cation exchanger(CAX)的钙离子转运活性蛋白,在离子转运体系中起重要作用。本研究利用RACE方法获得花生CAX相互作用蛋白4(CXIP4)基因的cDNA和DNA全长序列。该基因cDNA序列的全长包括966bp的开放阅读框,编码321个氨基酸。DNA全长为966bp,不含有内含子序列。推测的蛋白质分子量为36706.24Da,等电点为9.62。使用荧光定量技术(qRT-PCR)分析了该基因在花生品种日花1号植株中的组织表达和青枯菌胁迫条件下的表达变化规律,并构建了该基因的过表达载体、反义表达载体以及原核表达载体,为进一步研究花生中该基因的功能及其在花生抗青枯病中的作用奠定基础。     

龙眼胚性愈伤组织ACC合成酶基因（DL-ACS1）的克隆及表达分析

以龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织为材料,采用同源克隆和RACE方法分离得到龙眼胚性愈伤组织乙烯合成限速酶DL-ACS1(1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase)基因的cDNA全长序列(GenBank,FJ617537),共1 817 bp,包含了5’非编码区(73 bp),开放阅读框(1 437 bp),3’非编码区(307 bp)。该cDNA开放阅读框的氨基酸序列(含478个氨基酸)与其它植物ACS具有77%～63%同源性,属于ACC Synthase家族。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在龙眼体细胞胚胎(以下简称龙眼体胚)各阶段的表达量存在较大的时期差异,其中,球形胚(Stage 5)的表达量最高,鱼雷形胚(Stage 7)的表达量最低。     

番茄SlAGO7基因的克隆及表达分析

根据番茄基因组数据库中AG07的EST序列信息,利用RACE和PCR技术从番茄花cDNA和叶基因组DNA中分别克隆S/A G07的cDNA全长序列和基因组序列,用生物信息学方法对其基因序列特征进行分析;利用Real-time PCR分析S/AG07在整个生长与发育过程中的时空表达模式.结果表明,SlAG07的cNDA全长片段为3 238 bp(GenBank登录号:JX467714),含有3 003 bp的完整开放阅读框,编码1 000个氨基酸,共包含3个外显子和2个内含子.所编码的氨基酸序列含有两个高度保守的PAZ和PIWI结构域,具有典型的AGO类蛋白的结构特征;与已报道的AGO7蛋白序列有较高的同源性;SlAG07基因属于AGO蛋白家族中ZIPPY/AG07亚族.SlAG07在营养组织叶中微弱表达,主要集中在根和茎表达；而在生殖器官花中强烈表达,表达丰度从花蕾到盛开的花呈递增趋势,但在果实不同发育时期中表达都非常微弱甚至不表达.由此推测,SlAG07蛋白可能与番茄花器官的发育相关.这为进一步研究该基因通过ta-siRNA干扰途径来调控番茄花器官发育形成的分子机制奠定了基础.     

普通小麦花发育基因 TriFVE 的克隆与染色体定位

植物自主开花途径花发育基因FVE对植物营养生长向生殖生长的转变起重要的调控作用。为了进一步研究该基因在小麦中的调控功能,利用小麦基因组数据和二穗短柄草基因组数据,通过RT-PCR和PCR技术对小麦花发育基因FVE的DNA序列和cDNA序列进行了克隆和序列分析,分别获得了7 034bp(TriFVE1,Gene Bank JQ317687)和6 910bp(TriFVE2,Gene Bank JQ317688)的两个FVE基因序列。基因结构分析表明,FVE基因由15个外显子和14个内含子组成,TriFVE1和TriFVE2基因的内含子序列存在大片段的插入/缺失,同源性仅为79.87%。TriFVE1和TriFVE2的cDNA编码区序列均为1 368bp,存在4个SNP位点,编码455个氨基酸的FVE蛋白序列完全一致。利用"中国春"和21个缺四体将TriFVE1和TriFVE2分别定位于小麦3A和3D染色体上。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析了FVE基因在单棱期、二棱期和穗分化时期的小麦茎尖组织表达模式,发现二棱期和穗分化期TriFVE的转录水平显著高于单棱期,表明FVE在小麦花发育由营养生长到生殖生长过程中起重要作用。基于FVE蛋白序列的系统进化树分析表明,苔藓植物、单子叶和双子叶植物被明显分为不同类群,该基因随着物种的进化而进化,可以为研究植物分子进化关系提供参考。     

TaMBD2基因cDNA全长克隆及其在小麦叶片和种子中的表达

为探讨甲基结合蛋白(MBD)在小麦生长发育过程中的生物学功能,通过RACE技术克隆了小麦TaMBD2基因的cDNA全长,并分析了该基因在小麦叶片、种子发育及萌发过程中的表达特性。RACE克隆及序列分析表明,TaMBD2基因cDNA全长为1 511 bp,其中5 UTR 164 bp,3 UTR 405 bp,ORF 942 bp。对该基因编码氨基酸序列的分析发现,TaMBD2编码蛋白中包含有1个典型的甲基结合域和1个CW型锌指结构域;通过RT-PCR分析发现,TaMBD2基因在叶片中的表达随着小麦的生长发育而逐渐增强;在种子发育过程中,该基因在花后20和30 d时的表达量最高;在种子萌发过程的胚和胚乳中,该基因的表达水平变化不大。     

甘蓝型油菜KCS13基因克隆与组织表达特异性分析

通过巢式PCR和基因组步移方法,从油菜的基因组中获得一段长度为3 356bp的序列。分析显示,该序列包含了KCS13基因的编码序列和启动子,命名为甘蓝型油菜KCS13基因,其转录区全长为1 587bp,编码区长1 389bp,无内含子,编码一条长462个氨基酸的多肽链。在甘蓝型油菜A、C基因组中都有KCS13基因存在。该基因主要在花蕾中表达,茎、叶和种子中表达稍弱,根中未检测到该基因表达。     

Male sterility and 2n pollen in 4x progenies derived from 4x×2x and 4x×4x crosses in potatoes

Summary The objectives of these experiments were to evaluate male sterility (MS) and 2n pollen frequency in 77 4x×2x families and 26 4x×4x families. The 2x parents were haploid-species hybrids and the 4x parents mainly clones withS. tuberosum ssp.tuberosum (tbr) andS. tuberosum ssp.andigena (adg) in their genetic background. The female parents had different cytoplasms: adg, tbr,S. demissum (dms), andS. stoloniferum (sto). Families from female parents with adg or dms cytoplasm did not have MS plants. However, families derived from crosses of many tbr females with 2x hybrids and a 4x adg clone had a high percentage of MS plants; all the progenies from cv. Serrana (sto cytoplasm) possessed tetrad sterility. These results can be explained as due to an interaction between a dominant male sterility (Ms) gene with tbr and sto cytoplasms. Some MS 4x hybrids (tbr×adg) used as females had the Ms gene, but male fertility was restored in some plants of their progenies when they were crossed with 4x tbr clones. This indicates that some tbr clones have a fertility restorer gene (Rt). The results from both 4x×2x and 4x×4x families fit the expected ratios assuming chromatid segregation for both the Ms and Rt loci. The gene frequency of parallel spindles was estimated in the 4x population as 0.74.     

4x-4x和4x-2x杂种后代高世代选系比重的比较

马铃薯的比重是加工企业要考虑的一个重要性状。本研究的目的是比较4x-4x和4x-2x杂种后代高世代选系的比重,试图利用单向有性多倍化(Unilateral sexual polyploidization,USP)的方法从二倍体栽培种向四倍体普通栽培种转育高比重基因。四倍体亲本为品种或高世代选系,二倍体亲本是普通马铃薯栽培种(Solanum tuberosum)双单倍体与二倍体栽培种富利亚(S.phureja)杂种的互交后代,或经轮回选择适应长日照的S.phureja-S.stenotomum杂种后代。从4x-4x和4x-2x组合各选出17个高世代无性系,以‘克新18号’(鲜食)和‘夏坡地’(薯条加工)为对照,采用随机区组设计,2011～2012年在黑龙江省的加格达奇评价了4x-4x和4x-2x高世代选系比重的表现。4x-2x和4x-4x后代高世代选系比重平均为1.0727和1.0659,二者差异极显著。但是,4x-2x内和4x-4x内无性系的差异仍达极显著水平。4x-2x四倍体后代HJ04-18-17,HJ04-27-41,HJ04-22-19以及HJ04-15-36比重高于对照品种‘夏坡地’,并和其有显著差异。结果表明,和4x-4x组合相比,4x-2x组合后代含有较高的比重。     

马铃薯新品种-川凉薯4号

川凉薯4号新品种是1997年以Sehwalbe作母本,56-2作父本,有性杂交获得实生籽,经过各代鉴定筛选而育成。该品种2006-2007年在四川省两年区试中平均667m2产鲜薯1514．44kg,较米拉（CK）增产10．19％,大中薯率达73．11％;干物质21．10％、淀粉15．11％、还原糖0．097％、维生素c27-5mg,100g鲜薯、粗蛋白2．02％;抗晚疫病、高抗轻花叶病毒病和卷叶病毒病,感青枯病。2009年5月13日通过四川省农作物品种审定委员会审定。     

MULTI-FLORET SPIKELET 4(MFS4) Regulates Spikelet Development and Grain Size in Rice

In rice, the spikelet is the basic unit of inflorescence, and its development is important for determining the grain yield and quality. We reported a rice spikelet mutant multi-floret spikelet 4(mfs4) which resulted in the production of extra floral organs or a whole extra floret, and elongated sterile lemmas. The results suggested that the mutation of the MFS4 gene interfered with spikelet meristem determinacy and floral organ identity. In addition, the plant height and the grain length and width in the mfs4 mutant were all less than those in the wild type. Using the bulked segregant analysis method, the MFS4 gene was localized in a 557-kb region on the long arm of chromosome 1. Sequence analysis showed that there was a C-base deletion at the open reading frame of LOC_Os01 g67430. Further tests indicated that a wild type copy of LOC_Os01 g67430 was able to reverse the mfs4 defects, which indicated that LOC_Os01 g67430 was the MFS4 gene. The MFS4 gene encodes a lipase located in the mitochondria and is expressed strongly in the young inflorescence. qRT-PCR results showed that the expression of some genes that were known to regulate spikelet meristem determinacy and grain size were decreased in the mfs4 mutant, which indicated that the MFS4 gene regulates spikelet meristem determinacy and grain size by modulating the expression of these genes.     

Fabrication of PVA-BaSO4 hybrid nanofibers and dispersion of BaSO4 particles via ultrasonic electrospinning

We reported the preparation and characterization of the poly(vinyl alcohol) (PVA)/BaSO₄ hybrid nanofibers prepared by normal and ultrasonic electrospinning, respectively. Compared to normal electrospinning, BaSO₄ particles in the resultant PVA/BaSO₄ hybrid nanofibers prepared by ultrasonic electrospinning were well-dispersed without severe agglomerations, as confirmed by scanning electron microscopy (SEM) analysis. X-ray diffraction (XRD) analysis indicated that typical crystalline peaks of PVA and BaSO₄ particles were dramatically decreased by ultrasonication during electrospinning. Moreover, the size of BaSO₄ aggregates became smaller.     

浙江茶情（4）

1 首次龙井茶证明商标使用专项检查启动 为加强对龙井茶地理标志证明商标的监管，进一步规范龙井茶市场，省农业厅和省工商行政管理局日前联合发出通知，对龙井茶证明商标使用专项检查行动进行了具体部署。这次检查将生产加工企业、市场、超市、商场、茶叶经销商店以及商标印制企业被列为重点检查单位，重点检查三个方面内容：     

4个黄瓜品种比较试验

对新津研4号、揭阳翠绿、绿冠胡瓜、津春4号等4个黄瓜品种进行品种比较试验。结果表明：揭阳翠绿大吊瓜茎粗、蔓长、叶面积、叶绿素都优于对照津春4号；但单瓜重、单株产量以绿冠胡瓜较大，揭阳翠绿大吊瓜较小；绿冠胡瓜可溶性固溶物少，含水量高，硬度较小，揭阳翠绿大吊瓜可溶性固溶物多，含水量低，总酸度、硬度大。     

浙江茶情（4）

龙井茶2008年底被核准注册地理标志证明商标后，省政府召开了龙井茶证明商标使用管理专题会议，对相关工作进行研究部署，并成立了以省政府陈龙副秘书长为主任的省龙井茶证明商标管理和保护委员会，建立了使用、管理、保护的工作机制。