CTAB法高效提取苹果叶片DNA的研究

为研究CTAB法在正常条件和逆境条件下,从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的苹果树叶片中分离出高质量的基因组DNA,以抗旱能力较强的八棱海棠(Malus micromalusRehd. )和抗旱性较弱的平邑甜茶(Malus hupehensis pamp Reld.)幼苗为试验材料.用20%聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG6000)模拟干旱,采取CTAB提取缓冲液,按一定比例加入PVP和β-巯基乙醇,用Tris平衡酚-氯仿-异戊醇除去蛋白质及杂质,在粗提时用异丙醇沉淀DNA,并用DNA洗液(10 mmol/L醋酸铵,75%乙醇)洗涤DNA,在纯化时用乙醇沉淀DNA,且没有加入RNase去除RNA的方法,分别提取2个品种正常和干旱胁迫的苹果属叶片总DNA,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测.结果表明:此方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,得到高质量、特征带形清晰的大量DNA.并就提取过程中遇到的问题,提出了相应的解决办法.     

改良CTAB法提取冷季型草坪草基因组DNA的研究

为获得高质量的冷季型草坪草基因组DNA,用改良和优化常规CTAB提取方法,提取冷季型草坪草基因组DNA,并对所得DNA的质量和浓度进行了检测.结果表明:改良CTAB-B法要好于常规CTAB法和改良CTAB-A法,提取的基因组DNA的OD260/OD280在1.8～1.9之间,电泳条带清晰,RNA消化彻底,DNA无明显降解,其含量和纯度均能满足基因工程操作的要求,且酶切效果理想.     

改良CTAB法提取草莓基因组DNA

草莓中多糖多酚含量丰富,同DNA结合生成凝胶状物,使其无法用于后期研究,恰当的草莓DNA提取方法一直未能找到。在前人工作基础上,改进了提取植物DNA的CTAB法,得到的草莓基因组DNA纯度较高,可用于后期实验所需。     

改良CTAB法提取番石榴总DNA的初步研究

以番石榴为试材,采用CTAB、SDS和改良的CTAB法分别从新鲜的番石榴叶片中提取DNA,并对其进行琼脂糖凝胶电泳检测和SCoT-PCR分析.结果表明:3种方法均可以从番石榴的叶片中提取DNA,但改良的CTAB方法通过加入漂洗液2次洗涤,能够较好的去除样品中的多酚、多糖和蛋白质等物质,可以较好的从新鲜的叶片中提取较高质量的DNA,并可以用于SCoT-PCR标记分析.     

四种改良CTAB法提取大叶朴基因组DNA比较研究

以大叶朴成熟叶片为试材,采用4种改良CTAB法提取大叶朴基因组DNA,并比较其提取效果。结果表明:用这4种方法均可获得没有发生褐变、完整性好的DNA。其中方法2(用了低浓度乙醇和高盐去多糖)和方法4(用了低浓度乙醇去多糖)去多糖的效果更好一些,但获得的DNA浓度较低;ISSR扩增结果表明,4种方法提取的DNA均可用于ISSR扩增,但方法2和3扩增的效果稍好一些。     

一种从果树成熟叶片提取DNA的方法

针对果树成熟叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,以8个果树树种的秋季成熟叶片为材料,采用改进的CTAB法对其基因组总DNA进行了提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和AFLP分析。结果表明,该方法从8种果树的成熟叶片中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均在1.8～2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物组合为EcoRI-TA/MseI-CTT,EcoRI-TT/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的果树成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

不同保存方法对石榴成熟叶片基因组DNA提取效果的影响

以石榴(Punica granatum L.)成熟叶片为试材,设置6种保存方法,采用改良的CTAB法提取石榴基因组DNA,研究了不同保存方法对石榴叶片基因组DNA提取效果的影响。结果表明:采用改良的CTAB法,新鲜叶片、-70℃保存6个月、4℃保存5d的样品均能得到浓度较高的DNA;-20℃保存7d和14d的样品均能得到完整DNA,但浓度略低;硅胶干燥常温保存5个月的样品用同样的方法未能提取到DNA,在对提取方法进行优化后,可提取纯度较高的基因组DNA,但其浓度仅约为鲜叶的50%。上述方法保存的样品提取的基因组DNA均能得到清晰、稳定的SRAP-PCR扩增图谱。     

适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法

以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

不夜城芦荟基因组DNA提取方法的比较研究

以不夜城芦荟的幼嫩叶片为试材,分别采用SDS法和CTAB法以及简化的CTAB法对基因组DNA进行提取,并利用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳法检测其DNA的浓度、纯度及质量,以期筛选不夜城芦荟基因组DNA提取的最合适方法.结果表明:对比不夜城芦荟基因组DNA提取的3种方法,无论从提取浓度还是纯度上来看,SDS法均明显优于其它方法.     

高质量枣基因组DNA提取方法

主要针对枣组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,比较了常规CTAB法、TE3D法和改良CTAB法3种方法的处理效果。结果表明:常规CTAB法提取DNA难以除去多糖类杂质;TE3D法提取的DNA多糖杂质少,但产率低,易降解,褐化严重;改良CTAB法提取DNA产率高,无明显降解,杂质少,D260nm/D280nm比值1.80左右,通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析,完全满足实验要求。并对改良CTAB法的关键步骤作了具体分析讨论。     

不同方法提取青藏高原蕨麻总DNA的比较研究

以改良CTAB法、改良SDS法、试剂盒法提取青藏高原蕨麻总DNA;用紫外分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA浓度和质量;用琼脂糖凝胶电泳法、分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA质量,以期筛选出青藏高原蕨麻总DNA提取的最佳方法。结果表明:用改良SDS法提取的蛋白质含量最高,OD260/OD2801.61左右,用改良CTAB法提取的DNA的OD260/OD2801.76左右;用试剂盒法提取的DNA的OD260/OD2801.70左右;用改良CTAB法提取DNA的浓度在100μg/mL。     

食用菌DNA提取方法研究

DNA是最重要的遗传物质，因此，DNA的提取方法和技术是生物化学及分子生物学最基本的技术，也是生物工程最常用的技术，为了得到足够纯的食用菌DNA进行基因和遗传操作，已经报导了各种样的提取DNA的方法，但是都比较复杂。本论文通过对多种提取方法对多种食用菌的研究，得出一种操作简便，不需要昂贵仪器设备，用时短，产品纯度高，即适合大规模生产，又能体现食用菌生物学特性的食用菌DNA提取技术。     

山葡萄基因组DNA提取及RAPD鉴定

以雌花山葡萄（７３０６４）冷藏幼叶,香妃葡萄新鲜幼叶为试材,分别采用修改的ＣＴＡＢ法,高盐法、ＳＤＳ法提取基因组ＤＮＡ。结果表明,三种方法所提的ＤＮＡ纯度及产率有差别,从综合结果看,以ＣＴＡＢ法为好,所得ＤＮＡ不需经氯化铯梯度离心或柱层析,可直接用于ＲＡＰＤ分析。     

使用改良的SDS法提取银杏不同器官DNA的研究

使用改良的SDS法提取银杏老枝、半木质化嫩枝韧皮部及叶子的基因组DNA,结果表明:从嫩技韧皮部和嫩叶提取DNA可获得较好的效果,但老叶提取DNA因杂质较多,需要多次纯化。     

蒿种子基因组DNA提取方法的比较研究

以籽蒿(Artemisia sphaerocephala Krasch)种子为试验材料,采用SDS法、CTAB法及SDS-CTAB法进行基因组DNA提取.结果表明:SDS-CTAB法适于籽蒿(A sphaerocephala)种子基因组DNA提取,SDS法次之,CTAB法不适合.     

南瓜发芽种子DNA提取方法

实验采用改良的CTAB法成功提取南瓜发芽根尖细胞DNA,其质量和纯度达到与试剂盒提取DNA相当水平,产率高于试剂盒提取DNA的产率。实验证明该方法提取的DNA能够满足分子生物学研究需要,在南瓜杂交种子纯度快速检测应用中具有应用价值。     

不同方法提取牛心朴子基因组DNA效果的比较研究

以牛心朴子的叶片、茎段、根为试材,采用改良的CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和SDS法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析.结果表明.CTAB法Ⅰ从3个部位都能提出较高浓度的DNA,电泳条带完整清晰;CTAB法Ⅱ从3个部位都能提出DNA,条带明亮,但有明显拖尾现象;SDS法从叶片中能提出较高的DNA,但从茎和根中所提的DNA含量较小,电泳条带暗;3种方法所提的DNA其RAPD扩增效果以CTAB法Ⅰ最好,CTAB法Ⅱ次之,SDS法最差.叶片提取的DNA平均纯度、浓度和得率为最高,RAPD扩增效果最好,茎次之,根最低.说明CTAB法工是牛心朴子DNA的高效提取方法,不同部位以牛心朴子叶子提取的DNA得率高,扩增效果最好.     

绿绒蒿属植物不同DNA提取方式的比较

以绿绒蒿属(Meconpsis Vig.)3种植物叶片为试材,采用研钵手动研磨和电动匀浆马达研磨器2种研磨方式处理叶片,采用改良的CTAB法、国产天根试剂盒、德国Qiagen试剂盒法3种提取方式从绿绒蒿属植物叶片中提取DNA,研究了不同提取方式对绿绒蒿属植物DNA提取效果的影响,以期为绿绒蒿属植物的分子遗传学研究奠定基础。结果表明:几种不同提取方法均能获得较为完整的DNA,研钵手动研磨的植物叶片提取的DNA无论是从质量、纯度还是得率均好于电动匀浆马达研磨器研磨。3种提取方式提取的DNA均可直接用于下游PCR反应,改良的CTAB法提取的DNA纯度和得率均很高;天根试剂盒法和Qiagen试剂盒法提取的DNA得率不高;Qiagen提取的DNA纯度和质量均比较好,但成本较高。     

不同方法提取野生荔枝基因组DNA效果的比较

以广东、广西地区的3个野生龙眼的幼嫩叶片为试材,采用SDS法、常规CTAB法和改良2× CTAB法提取荔枝叶片基因组DNA,比较研究从富含多酚、多糖和色素等次生代谢物质的野生荔枝叶片中获得高质量DNA的提取方法.结果表明:采用改良的2×CTAB法提取的荔枝叶片基因组DNA纯度最高、质量最佳,可直接用于荔枝叶绿体DNA trnL-F基因的PCR扩增分析,且扩增后条带清晰.表明改良的2×CTAB方法获得的DNA纯度和产率较高,符合进行野生分子标记的实验要求.