猪繁殖与呼吸障碍综合症的防治(下)

(接上期)5.1.3血清学检查可用四种方法检测血清中的PRRS病毒抗体。免疫过氧化物酶试验(IPMA):本方法特异性和敏感性较好,但操作复杂、费用高;间接荧光抗体试验(免疫荧光染色法-IFA):本方法可最早于感染后6d,一般于感染后两周检出抗体,抗体效价于感染后5～6周达到峰值(1∶40000);血清中和试验(SN):因SN抗体比IFA出现得晚,所以本法对急性感染的检出率较低。Yoon氏等于1994年对本法进行了改进,加入了20%的新鲜猪血清,从而提高了本法的敏感性,可于感染后10d左右检出抗体;酶联免疫吸附试验(ELISA):本法的特异性比IPMA法更敏感,且操作…     

产蛋下降综合症病毒血清学比较研究

试验用血凝抑制(HI)试验,酶联免疫吸附(ELISA)试验,血清中和(SN)试验,荧光抗体(FA)试验和琼胶免疫扩散(AGID)试验分别对接种产蛋下降综合症(EDS)病毒后的实验感染鸡血清中的抗体进行检测,以比较5种血清学试验的敏感性。比较结果表明,前四种血清学试验分别于接种后5天首次测出抗EDS病毒抗体,其中SN和FA试验检查所有5只接种鸡全部为阳性,     

Ⅱ型犬腺病毒自然弱毒YCA18株的实验免疫研究

应用YCA18株第8代细胞培养物（YCA18－8）经口鼻和静脉接种犬腺(CAV)SN本＜1：2的易感犬作安全试验，结果未见任何CAV临床症状与病理解剖学改变；用不同剂量的YCA18－8分组免疫CAV易感犬，经SN抗体测定与用CAV强毒攻击试验，结果SN抗体达1：16以上的犬95％以上可获得免疫保护，最低免疫量为10^4TCID50；应用YCA18－8分别免疫母源抗体达1：4和1：8的两组试验犬，第一次免疫14d后SN抗体均未有升高，追加2－3次免疫后SN抗体才逐渐上升至1：16以上的免疫保护水平；用CAV易感犬和MDCK分别将YCA18连续传8代和20代，结果对犬仍然安全，对犬的免疫原性未见下降，最低免疫量仍为10^4TCID50；与CDV和CPV弱毒作免疫互扰试验，结果与各弱毒的单独免疫结果未见差异；将YCA18－8冰冻保存于一30℃，6个月内TCID50仍不低于10^-4/0.1ml，经加明胶－蔗糖低温真空冻干后，4℃和－30℃保存1年，TCID50均仍维持在10^-4/0.1ml以上，经YCA18－20 3次免疫的试验犬，1年后SN抗体仍在最低抗体保护值1：16以上。     

应用几种血清学诊断方法检测猪伪狂犬病血清抗体的比较试验

我们分别应用乳胶凝集试验(LAT)、琼脂免疫扩散试验(AGID)、血清中和试验(SN)3种诊断方法，对45份猪血清样品进行了猪伪狂犬病血清抗体检测，以进口试剂盒ELISA诊断方法为标准，对这3种血清学检测结果进行了比较分析。结果表明：LAT、AGID的可重复性均为100％；SN的准确性、敏感性、特异性均最为理想；LAT的敏感性较好，准确性和特异性稍差；AGID的准确性、敏感性、特异性均较差。     

犬瘟热病毒中国分离株囊膜糖蛋白基因免疫小鼠诱发的抗体应答

将CDV中国分离株(YZ0101)的两囊膜糖蛋白基因F和H与pGEM—rreasy载体构建的重组质粒分别采用EcoRI和Kprd、BamHI和Kpnl双酶切后定向克隆进真核表达载体pcDNA3．1(-)中，DNA测序和限制性酶切分析筛选阳性克隆pcDNA-H和pcDNA-F，以重组质粒DNA和脂质体共转染COS-7细胞，用间接免疫荧光试验验证转染的COS-7细胞胞浆中分别表达了CDV的H和F蛋白。以聚乙烯胺(PEI)为佐剂，将犬瘟热病毒F和H基因重组质粒pcDNA-H和pcDNA-F的DNA分别或混合肌注6周龄BABI／c小鼠，同时设pcDNA原载体DNA对照。以2周为间隔共免疫4次。最后一次免疫后3周，采血分离血清，酶联免疫吸附试验(ELISA)和病毒中和试验(SN)分析基因免疫在小鼠体内诱导的免疫应答。结果显示：pcDNA-H和pcDNA-F试验组免疫4次后分别激发了10^2.99 0.134、10^2.93 0.164滴度的ELISA抗体；两种质粒DNA混合免疫后产生了1：32～1：128的抗CDV的中和抗体；而原载体DNA免疫后，用ELISA和SN未检测出特异的CDV抗体。表明犬瘟热病毒囊膜糖蛋白F和H基因免疫小鼠可诱发产生特异性的体液免疫。     

间接血凝抑制试验检测血清和卵黄中鸡毒支原体抗体的研究

将13只正处于产蛋期的试验鸡在接种疫苗前后分别采血、分离血清；收集鸡蛋，分离蛋黄，并分别用16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理后，检测鸡毒支原体(MG)间接血凝抑制(HI)抗体。结果表明：接种疫苗前的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为4.7，4．4，4．1和4.2 log2；第一次接种疫苗后的血清和16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．4、6．7、7．1、6．9log2；第二次接种疫苗后第1次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为10．4、9．6、10．1、9．710g2，第2次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．9、7.1、7．6和7．4log2。8％柠檬酸钠处理后的卵黄抗体效价最高，与血清抗体效价最接近。血清HI抗体效价与卵黄HI抗体效价具有良好的一致性和相关性，用卵黄可以代替血清进行HI试验。     

禽流感灭活疫苗(H5N2,N28株)和重组禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫鸡和鸭后抗体消长规律的比较研究

禽流感灭活疫苗（H5N2，N28株）和重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re-1株）各3批，以重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re．1株）推荐的免疫程序和剂量分组免疫5周龄SPF鸡和5周龄非免疫鸭。免疫后定期采集血样，测定血清HI抗体效价，分别计算各免疫组鸡和鸭HI抗体效价的几何平均数，绘制各批疫苗免疫鸡和鸭后HI效价消长曲线，并分别对两种疫苗免疫鸡和鸭后各时期的HI抗体效价进行t检验。结果为：①免疫后1周，各免疫组均未测到HI抗体；②鸡免疫后4～5周，HI抗体效价达到峰值1：2^6.0～1：2^7.0，随后2周下降相对较快，平均每周下降0．3—0．7个滴度，之后HI抗体效价缓慢下降，直到试验结束，平均每周下降0．04～0．17个滴度；③鸭首次免疫后第3周各免疫组HI抗体效价达到1：2^4.0～1：2^5.3，加强免疫（首次免疫后第3周）后，HI抗体效价迅速升高。加强免疫后第3周（首次免疫后第6周）HI抗体效价达到最高值1：2^10.6-1：2^11.7，且在峰值水平维持3周，之后1周下降相对较快，平均下降1．2～2．7个滴度，然后缓慢下降，到首免后24周平均每周下降0．28～0．39个滴度，24周除049H5N2批疫苗免疫组外，其他各批免疫鸡HI抗体效价均小于1：2^4.0；④免疫后3周内，两种疫苗刺激鸡产生的HI抗体效价均高于相应批次疫苗免疫鸭产生的HI抗体效价，免疫后第2周相差1．9—2．3个滴度，免疫后第3周相差1．6～2．0个滴度；⑤两种疫苗免疫鸡和鸭后，各时期HI抗体效价t检验差异均不显著（P〉0．05）。以上结果表明，两种疫苗免疫SPF鸡和非免疫鸭后，HI抗体效价消长规律一致，两种疫苗免疫后各个时期的HI抗体效价在统计学上差异均不显著（P〉0．05）。     

检测马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区抗体间接ELISA诊断方法的建立

本试验以纯化的重组马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区蛋白作为诊断抗原建立了间接ELISA诊断方法，确定其最佳工作条件为每孔包被重组抗原2仙g，兔抗马IgG酶标抗体以1：4000，血清以1：40倍稀释，底物作用时间为10 min；判定标准为P／N值大于2，且OD值大于0．2的血清为阳性，否则判为阴性。本试验所建立的诊断方法与琼扩试验以及以琼扩抗原作为包被抗原的ELISA试验进行了比较，表明该诊断方法敏感性更高。特异性和重复性试验表明该诊断方法具有良好的特异性和重复性。通过对4匹马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马血清抗体的检测，发现均在接种2周后可产生抗马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区相应抗体。此抗体一直持续存在到本试验检测的免疫后17个月，且效价较高。，用此方法检测203份马血清样品，其中161份呈抗体阳性，还检测了马传贫自然感染马血清93份，结果全部为阳性。     

应用HerdChek PRRS2XR抗体检测试剂盒控制阳性猪群

HerdChek PRRS2XR抗体检测试剂盒，曾被一些养猪公司用于检测那些曾接种过疫苗或受过感染的阳性个体的抗体水平。应用旧的HerdChek PRRS抗体检测试剂盒进行检测发现，在接种疫苗后4～6周出现了血清转换的高峰，其高峰值(S／P值)在1．5和2．5之间。     

血吸虫病抗体检测试纸条对实验感染水牛的抗体检测

为明确牛血吸虫病抗体检测试纸条(以下简称试纸条)的检出时限,用试纸条对实验感染血吸虫的10头水牛的抗体消长情况进行了检测。结果显示,6头试验水牛(编号为1号、2号、4号、6号、7和9号)在接种后第4周检测到血吸虫抗体,4头试验水牛(编号为3号、5号、8号和10号)在接种第5周检测到血吸虫抗体。经过吡喹酮治疗后,3头试验水牛(1号、3号和8号)在第16周抗体转阴,4头试验水牛(2号、5号、6号和10号)在第20周抗体转阴,3头试验水牛(4号、7号和9号)在第24周抗体转阴。结果表明,该试纸条最早可检测到水牛血吸虫抗体的时间在感染后第4周,要保证全部检出的时间须在感染后第5周;经治疗后,试验水牛血液中抗体转阴的最早时间是治疗后16周,全部转阴的时间在治疗后24周。说明该试纸条用于水牛血吸虫病早期诊断时间应在感染后4周~5周,用于治疗药物的疗效评价应在患血吸虫病水牛治疗6个月后进行。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5抗体检测ELISA在中和抗体评估中潜在应用的研究

为评估猪群血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体水平,本研究以原核表达的重组HP-PRRSV GP5蛋白为包被抗原,通过对反应条件进行优化,建立了检测GP5抗体的间接ELISA(r GP5-ELISA)。结果显示该方法与猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、细小病毒、日本乙型脑炎病毒阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。重复性试验结果显示,组内组间变异系数均小于5.3%。应用建立的r GP5-ELISA方法和IDEXX-ELISA对288份临床血清样品进行检测,结果显示两种方法具有较低的相关性(R=0.831)。中和试验(SN)结果显示,r GP5-ELISA检出阳性血清的中和效价显著高于IDEXX-ELISA(p0.01)。Western blot复检r GP5-ELISA检测呈阴性的65份猪血清样品,其中58份呈阴性、7份为阳性;而IDEXX-ELISA检测则该65份血清全部呈阳性。对比SN和western blot试验,r GP5-ELISA比商品化IDEXX-ELISA具有更高的SN抗体符合率,因而其检测结果能够更好地反映猪群血清中和抗体水平。本研究建立的方法可以用于大规模猪群PRRSV中和抗体水平评估,并为PRRS流行病学调查提供了技术支持。     

SPA-ELISA监测猪传染性胃肠炎病毒血清抗体水平的研究

建立了SPA—ELISA监测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)血清抗体水平的方法，与免疫荧光试验(IFA)符合率高达90．9％。试验表明：病毒抗原最适包被浓度为4μg／ml；血清工作浓度为1：200；最佳包被液采用0．05m pH9．6的碳酸缓冲液；封闭液选用2％的脱脂奶；并确定了抗原抗体最佳反应时间和最适反应温度及底物溶液的显色时间。特异性试验表明所组装的SAP—ELISA试剂盒特异性较好，可用于TGE的流行病学调查。     

实验感染肝片吸虫山羊的病理生理学Ⅰ．血液生理生化指标及抗体动态

给山羊分别实验感染肝片吸虫囊蚴200、500个／只，感染后每周颈静脉采血1次，测定血液生理生化指标和抗体动态的变化。结果表明，山羊实验感染肝片吸虫后，血液中RBC、Hb明显下降；WBC和嗜酸性粒细胞数显著增加；血清中谷－草转氨酶（AST）从第2周开始上升，第8周和第9周达到峰值；γ-谷氨酰转肽酶（GGT）于感染后第7周和第8周开始升高，第10周和第11周达高峰；以ELISA检测抗体表明，2个试验组山羊感染后血清中IgG分别在第9周和第6周达峰值，随后均稍有下降，一直呈波动趋势，但在整个试验期内，一直高于对照组（P＜0．05或P＜0．01）。分析认为，山羊感染肝片吸虫后表现的贫血是正细胞正色素型，伴有低白蛋白性，肝脏损伤明显，体液免疫反应增强。     

鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研制

采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原，用提纯的IBV抗原包被微量板，建立了检测鸡传染性支气管炎(IB)抗体的ELISA试剂盒。抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug／ml、1：200和1：3200。与IDEXX试剂盒相比，其敏感性、重复性、特异性均接近国外同类产品水平。对SPF鸡血清、实验免疫与攻毒的SPF鸡血清进行检测，结果表明所建立的ELISA特异性为95．6％，与IDEXX试剂盒符合率为95．6％。用于检测抗IBV特异性IgG抗体发现在免疫接种IB弱毒苗后，第4天即可检测到IgG抗体，峰值在第3周。试验鸡在通过滴鼻、点眼途径人工感染IBV强毒后，第5天抗体滴度明显上升。我们认为，该法是目前我国SPF鸡质量监测、养鸡生产中进行IB监测较好的方法。     

副鸡嗜血杆菌人工感染鸡血清凝集抗体动态观察

在检测鸡传染性鼻炎 ( IC)抗体的血清学方法中 ,血清平板凝集试验 ( SPA) ,不但操作简便快速 ,还具有较高的敏感性和特异性 ,因此是生产中较为常用的鸡传染性鼻炎抗体检测手段之一。为给本方法在疾病诊断中的应用提供进一步的参考 ,作者对A、C型副鸡嗜血杆菌人工感染鸡感染后 0～ 1 1周的血清 SPA抗体的动态变化进行了测定 ,现将试验情况报告如下。1　材料与方法1 .1　菌株与参考血清　标准株 0 0 83( A型 )、Modesto( C型 )来自美国菌种保藏中心。地方分离株 Hp8、H1 8为本实验室保存。阴、阳性对照血清 :本实验室保存 ,阴性血清采自…     

三种抗原对家畜日本血吸虫病诊断价值的比较

以日本血吸虫基因重组抗原LHD-Sj23／pGEX、可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen，SEA）及SEA经Sephadex G-200柱层析分离后得到的第一峰SEAl作为诊断抗原，应用ELISA检测人工感染日本血吸虫绵羊血清及自然感染日本血吸虫水牛血清。结果显示，三种抗原用于检测人工感染日本血吸虫绵羊血清的阳性符合率分剐为88．79％、98．15％、100％，阴性符合率均为100％；自然感染日本血吸虫水牛血清的阳性符合率分别为80％、80％、84％，阴性符合率分别为88．9％、93．3％、91．1％；三种抗原与伊氏锥虫病牛血清无交叉反应；检测感染日本血吸虫不同时间绵羊血清，发现感染6周后均被检出针对这三种抗原的特异性抗体，且SEA及SEAl在感染4周后即可检出特异性抗体。三种抗原的诊断效果差异不显著。     

云南省鸡减蛋综合征的血清学调查

从云南省10个养鸡场采集不同日龄、品种、性别和不同用途鸡的血清样品103份，以血凝抑制（HI）试验检测鸡群的减蛋综合征（EDS）血清抗水平，结果，10周龄以下鸡的EDS血清抗体阳性率为16．7％，其阳性率随着日龄的增加而增高；不同品种鸡群中，迪高鸡和地方土鸡的EDS血清抗体阳性率较低，而伊萨褐鸡阳性率高达100％；公鸡EDS血清抗体阳性率为55．6％，母鸡为73．4％；商品鸡EDS血清抗体阳性率为68．95，种鸡阳性率为62．5％；全部检测各的平均阳性率为67．9％，多数血清EDS HI效价为1：32－1：1024之间，最高的达1：4096。     

囊虫病猪血清CA效价与虫负荷的相关性及CA与Ab的动态观察

应用ELISA双抗体夹心法检测囊虫病猪血清中的循环抗原(CA),对CA效价与虫负荷的相关性作了初步观察,发现两者密切相关.轻度感染猪血清CA效价≤000,中度为1000～10000,重度为10000～100000.人工感染病猪血清一般在感染后1周检出CA,于感染后4～5周达高峰;抗体一般于感染后2周检出.这种方法可检出的最小虫负荷约为20个/猪     

检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法，结合HI试验，为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原，使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)+3.709,R²=0.917 6,S/P临界值为0.32,临界滴度是1 200。经验证，rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性，最低能检出1∶2 000稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测，IDEXX-MG方法作为对照，借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致；rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示，本研究建立的rVlhA-E...     

禽流感血清抗体与卵黄抗体消长规律比较研究

应用禽流感病毒二价（H5、H9）油乳剂灭活疫苗免疫160日龄非免疫蛋鸡，免疫接种后分别于第0、7、14、21、28、35 d采集相应的鸡蛋和血清，采用血凝抑制(HI)试验监测血清及卵黄中H5、H9抗体的消长规律，结果表明：H5、H9血清抗体于免疫后7 d时开始产生，14 d时到中等水平，21 d时达到最高值，一直维持到35 d之后；而H5、H9卵黄抗体与血清抗体水平相比相对滞后7 d左右；卵黄抗体与血清抗体在28 d时均达到高峰值并一直维持到35 d之后，28 d后血清和卵黄抗体达到相同水平。本研究为临床上以禽流感卵黄抗体检测替代血清抗体检测及以后禽流感高免卵黄抗体的研究提供了依据和数据。