黄皮LEAFY同源基因的克隆与序列分析

LEAFY(简写为LFY)同源基因是控制花分生组织形成的基因之一,并调控植物开花的时间(Weigel et al.,1992),是开花启动所必需的,处于成花相关基因网络中比较关键的位置,为转入生殖发育的中心调节剂,LFY基因不仅参与花分生组织属性的决定,还对抑制成花的EMF基因和TFLl基因起负调作用(王利琳等,2004).     

银杏LEAFY同源基因的分离与克隆

银杏 (ＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａＬ .) ,又名白果 ,公孙树 ,著名的孑遗植物 ,是珍贵的药用、材用、观赏用树种。但银杏的童期很长 ,实生树开花需要 2 0ａ以上。为缩短银杏童期 ,果树工作者从栽培方式、传统育种进行了大量的研究 ,但成效不大。近年来应用分子生物学研究植物上的     

油桐LEC1基因的cDNA克隆与序列分析

为了解LEC1(Leafy Cotyledon 1)基因对油桐油脂合成过程的调控机理,以油桐种仁转录组数据库中基因的部分c DNA序列为基础,采用RT-PCR技术从油桐种子中克隆LEC1基因的全长c DNA,并对其进行序列分析。油桐LEC1基因全长c DNA为1 152 bp,编码区为729 bp(142~870),编码243个氨基酸,5′端非编码区和3′端非编码区分别为141 bp和263 bp。该基因编码蛋白质的相对分子质量为27 025.4 Da,理论等电点为6.97;蛋白二级结构以不规则卷曲和α螺旋为主,是不具有跨膜结构的膜外蛋白。经对比发现,油桐LEC1具有典型的HAP3结构特点,在不保守的N端和C端中间有1个十分保守的结构域,与拟南芥、玉米、麻风树、黄连木等的LEC1氨基酸序列高度同源。     

油桐油体蛋白基因的克隆及序列分析

油桐油体蛋白与油桐脂肪酸储藏密切相关。通过构建油桐cDNA文库和EST文库,用分子生物学手段分离克隆出两个油桐油体蛋白基因的全长cDNA序列。通过分析表明,两个油体蛋白基因的全长cDNA分别为738 bp、838 bp,各包含1个完整的CDS,分别编码137个、154个氨基酸。分别命名为VF_oleⅠ,VF_oleⅡ。通过与其它物种的19条油体蛋白氨基酸序列比对,油桐油体蛋白基因分别与麻疯树oleosin 3和麻疯树oleosin 2的相似性最高,分别为84%、82%。通过软件预测表明,油桐油体蛋白等电点分别为10.315、10.335,都存在跨膜结构域,且存在信号肽剪切位点,中部都存在一个较长的疏水区,C末端都是以α-螺旋为主。     

慈竹β-tubulin基因片段的克隆及序列分析

利用Trizol一步法提取慈竹幼笋总RNA,运用RT-PCR方法首次在慈竹中克隆到3条β-tubulin基因部分序列,命名为Na-βtub1、Naβ-tub2、Naβ-tub3,长度分别为958bp、958bp和959bp,分别编码318、318和319个氨基酸。核酸和氨基酸的序列比对分析结果表明,慈竹中3条β-tubulin基因核酸和推测的氨基酸序列之间相似性分别为92.46%和98.22%,与禾本科植物水稻、玉米、小麦的β-tubulin基因核酸和氨基酸序列相似性分别在89%和95%以上。     

版纳龙竹CONSTANS同源基因的克隆与序列分析

以版纳龙竹基因组DNA为模板,采用前人基于水稻CO同源基因Hd1序列的保守区所设计的特异引物COS1和COA1,运用PCR方法扩增出一条1 520 bp的DNA片段,并克隆到pGEM-T载体。测序和序列分析结果显示:该片段含有1个590 bp的内含子,编码区930 bp共编码310个氨基酸;该基因被命名为DxCO1,其DNA序列在G enB ank中的注册号为GQ358925。在G enB ank中进行同源性检索的结果显示:其核苷酸序列与其它禾本科植物CO同源基因的氨基酸序列同源性高达81%~91%;推测的DxCO1蛋白质序列与其它种子植物CO同源基因蛋白质序列的系统发育分析结果显示:DxCO1与小麦Hd1-like等5个基因聚成了一个强烈支持的分支;另外,在该片段推测的蛋白质序列的氨基端含有一个类似锌指蛋白的B-box(Cx2Cx8Cx7Cx2Cx4Hx8H)结构域,羧基端含有一个CCT(CO,CO-like,TOC1)结构域。序列和结构的高度同源性表明:DxCO1是版纳龙竹的1个CO-like基因,可能对其开花调控有着重要作用。     

油桐ALDH22A1和ALDH2C4基因克隆及其序列分析

为给油桐ALDH基因的结构与功能研究提供理论依据,以葡萄桐的近成熟种子为材料,根据油桐转录组测序结果设计引物,采用RT-PCR技术克隆了油桐ALDH22A1基因和ALDH2C4基因的全长cDNA序列。ALDH22A1的cDNA序列全长1 782 bp,编码593个氨基酸,该基因编码蛋白质的相对分子质量为65.60 kDa,理论等电点为6.62,蛋白二级结构以α螺旋为主,具有1个明显的跨膜结构,是稳定的非分泌蛋白。ALDH2C4的cDNA序列全长1 506 bp,编码501个氨基酸,该基因编码蛋白质的相对分子质量为54.82 kDa,理论等电点为6.58,蛋白二级结构以α螺旋为主,是不具有跨膜结构的膜外蛋白。BLASTp分析结果表明,这2个基因所编码序列与麻疯树、蓖麻的乙醛脱氢酶一致性最高,高达80%以上,含有醛脱氢酶基因家族的保守结构域。     

杉木CCoAOMT基因部分cDNA克隆与序列分析

利用CODEHOP设汁CCoAOMT基因的简并引物,通过RT-PCR的方法,从杉木茎段中克隆到1个长度为614 bp的PCR产物,产物经pMD18-T载体克隆转化至DH5α大肠杆菌中,序列通过同源性比对后显示该片段与其它植物的CCoAOMT基因具有较高的同源性.利用生物信息学方法分析发现,该序列在112～651 bp片段上有一个开放性阅读框,该序列编码的是一个酸性蛋白,亲水性较弱.疏水性较强;信号肽序列为第23位至第45位,二级结构以α-螺旋(40.62%)与不规则盘绕(45.31%)为主,没有发现β转角区域.     

油桐生物素羧基载体蛋白编码基因VfBCCP的克隆与表达分析

油桐(Vernicia fordii)属于大戟科(Euphorbiaceae)油桐属植物,原产于我国,是世界上著名的木本工业油料树种.其种子榨出的桐油是品质最好的天然干性油之一.桐油具有干燥快、抗酸碱、耐冷热、防腐蚀等特性,作为重要的工业用油广泛应用于制造涂料、高级油墨、增塑剂、医药以及化学试剂等行业(黄挺,2001;Brown et al.,2005).同时油桐作为生物柴油原料树种具有良好的应用前景(钱能志等,2007;Shang et al.,2010;Chen et al.,2010).在油桐种子生长发育过程中,7月为桐油的缓慢形成期,7月底到9月初为桐油的迅速累积期,而9月初至10月中旬为桐油累积完成期(王汉涛等,1985).     

杨树木质素合成酶hct基因的克隆及核苷酸序列分析

根据毛果杨全序列（AC185363.2）中唯一具有转移酶功能的保守区设计引物,以正在分化的2年生欧美杨107次生木质部总RNA为模板经RT-PCR扩增出hct基因片段,与pMD20-T载体连接,重组质粒经特异引物扩增、限制性内切酶酶切和测序鉴定。结果表明,扩增片段长度为709bp,包含一个708bp的开放阅读框,与毛果杨全序列及HCT2（EU603314）的同源性均为98%,编码的氨基酸序列与毛果杨HCT2氨基酸（ACC63883.1）的同源性为98%,断定我们克隆的cDNA为hct,属于转移酶超家族,GenBank登录号为FM202091,该重组质粒命名为pMD20-T-hct。     

Cloning and RNAi Construction of a LEAFY Homologous Gene from Populus tomentosa and Preliminary Study in Tobacco

PtLFY, a LEAFY （LFY） gene, was cloned from Populus tomentosa （LM50） by PCR. Sequencing analysis indicated that PtLFY was 2629 bp long, composed of three exons and two introns and encoded 378 amino acids. The splice donor sites and the splice acceptor sites were in identical positions to the LFY and its homologues. The amino acid sequence inferred was 68%-99% homologous to those of LFY and its homologues by blast analysis in GenBank. The Southern blot analysis indicated that there was a single copy of the PtLFY gene in genomic DNA of male and female P. tomentosa （LM50 and 5082）. The pBI121-Ptalfy （reverse）-intron-Ptlfy-GUS-nos was constructed using RNA interference （RNAi） technique and verified by PCR and digestion identification and transformed into tobacco. Some transgenic tobacco plants were obtained by PCR and PCR-Southern identification. The growth was generally repressed in transgenic tobacco plants compared with wild-type ones and some phenotypic differences were observed.     

湖北"金丝油桐"和贵桐2号的核型分析

"金丝桐油"是由湖北恩施地方品种"金丝油桐"果实加工而成的品质特优的传统出口产品,分析"金丝油桐"的核型有利于该地方品种的鉴定、保护与开发利用。以全国推广品种"贵桐2号"和湖北恩施地方品种"金丝油桐"为试验材料,对其核型进行了分析,结果表明:"金丝油桐"与"贵桐2号"的核型存在较大的差异,其中3、6、8、9、11号染色体的差异明显;"金丝油桐"的核型公式为2 n=22=14 m 6 sm 2 M,其中1、2、4、5、6、7、10号染色体为m型,11号染色体为M型,3、8、9号染色体为sm型,核型对称性为1B型;"贵桐2号"的核型公式为2 n=22=16 m 4 sm 2 M,其中1、2、3、4、5、7、10、11号染色体为m型,8号染色体为M型,6、9号染色体为sm型,核型对称性为1B型。核型分析结果显示,"金丝油桐"是一个不同于"贵桐2号"的地方品种。     

“金丝油桐”与贵桐2号的过氧化氢酶同工酶谱

为了从生化水平上鉴别"金丝油桐"的品种,利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了湖北省来凤县"金丝油桐"与贵桐2号叶的过氧化氢酶同工酶谱,结果显示:"金丝油桐"有11条酶带,其中a、b、f、i、l这5条酶带颜色较深,很清晰,而c、e、g、h、j、k这6条酶带颜色较浅;贵桐2号共有13条酶带,其中a、b、f、i这4条酶带颜色很深,而c、d、e、g、h、j、k、l、m这9条酶带颜色较浅;贵桐2号的酶带比"金丝油桐"多出d、m这2条;"金丝油桐"11条酶带的Rf值依次为0.20、0.36、0.37、0.43、0.46、0.50、0.52、0.59、0.68、0.76、0.90;贵桐2号13条酶带的Rf值依次为0.20、0.36、0.37、0.39、0.43、0.46、0.51、0.52、0.60、0.69、0.77、0.88、0.95。分析结果表明:"金丝油桐"与贵桐2号这2个品种间存在着亲属关系,但其差别较大。     

油桐花粉配合力测定及产量遗传效益分析

对已选出的优良家系和无性系,根据其树体结构、结果枝比例、丛生果比例、产量性状、经济性状等指标,进行双亲优势互补配置,人工授粉236个组合,应用综合评判方法评选出20个优良组合,再运用MINQUE法对20个组合进行分析讨论,无偏估计了产量的遗传方差和效应值,并且有较高的精度.     

油桐DGAT2基因克隆及其RNAi双元表达载体构建

To identify the physiological function of Diacylglycerol Acyltransferase 2 (DGAT2) coding gene in the process of tung oil biosynthesis, DGAT2 was cloned from cDNA of tung tree kernel and then linked with pMD18-T vector for sequencing. The 969bp fragment containing Open Reading Frame was acquired. Subsequently, RNAi binary expression vector pD35-DGAT2 was constructed, which expressed DGAT2 in two opposite ways. The studies provide the possibilities to further identify the function of DGAT2 in tung oil biosynthesis by RNAi technology and hold promise for genetic engineering of Venicia fordii.     

油桐良种推广试验研究

利用引种省内外油桐主产区优良光桐品种杂交选育的优良单株后代14个F_2代单株家系和省内选优获得的41个优株家系及立枝桐品种进行推广栽培试验。在200多亩林地上结合生产测定良种的增产效果,增产达39～248％。在推广试验中继续进行选择提高。利用F_2代和F_3代的相关估计单株产果量的遗传力h~2=0.455。进一步选择的5个最优家系的遗传增益(相对值)凸G′_I=31.7％;其下一代的育种植(?)_A=11.5kg(4～6龄单株产果)。为今后的良种推广,为保存和进一步提高油桐优良种质提供了依据和物质基础。     

杉木三年桐混交林分结构研究

对5年生杉木三年桐混交林的林分结构进行调查研究,结果表明:杉木与三年桐混交能加快林分郁闭,有效地利用林地空间,从而大大地提高林分的光能利用率,5年生混交林总生物量是杉木纯林的1 92倍,混交林中杉木的干材生物量比杉木纯林增加72 6%,有效地提高木材产量和经济效益。     

中国油桐栽培利用与应用基础研究进展

从中国油桐栽培与利用的历史入手,分析了中国油桐栽培利用的现状及其花和生长规律的研究进展,为中国油桐的丰产、高产、稳产、优质提供了科学的理论依据;着重介绍了中国油桐有关生理生化方面的研究进展,不仅为提高中国油桐产量的提高,也为现代生物技术应用于中国油桐的生产提供了理论基础．