致仔猪水肿病大肠埃希氏菌F107菌毛抗原的提取及鉴定

将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌107／86菌株在TSB、TSA培养基上传代，使之表达F107菌毛，大量收集菌毛化的细菌，利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约15ku的条带，以染色凝胶为对照，将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下，进行提纯。经免疫印迹反应，证实其条带为F107菌毛蛋白。     

F107(F18ab)菌毛的提取、提纯及鉴定

将致仔猪水肿病菌株107/86在TSB、TSA培养基上传代,使之表达F107菌毛,大量收集菌毛化的细菌,利用热洗脱法提取菌毛.粗提菌毛经1 5%的聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约15ku的条带,以染色的凝胶为对照,将未染色凝胶上的菌毛条带切下,捣碎,加生理盐水,37℃,2h后离心,吸出上清再次电泳,可见提纯的菌毛条带.用针对F107菌毛的单抗做免疫印迹反应,证实此条带为F107菌毛蛋白.     

乳清蛋白凝胶条件的研究

以乳清蛋白为研究对象，研究了乳清蛋白浓度、温度、加热时间、pH值、金属离子等因素对乳清蛋白凝胶形成的作用。结果显示，乳清蛋白形成凝胶的基本条件是乳清液浓度大于0．133g／mL，温度高于85℃，当温度在85—90℃之间，凝胶形成时间随乳清蛋白浓度变大而减少，在沸水中乳清蛋白浓度对凝胶形成时间影响不大；酸性条件下乳清蛋白形成凝胶的最适pH为5.3，pH小于1．2在沸水中加热30min，乳清蛋白形成碎块状凝胶，碱性条件下形成凝胶的最适pH为83，pH大于12．8在沸水中加热30min，乳清蛋白变为红色；钙离子的添加可使乳清蛋白形成凝胶所需时间减少到6min。     

乳清蛋白凝胶条件的研究

以乳清蛋白为研究对象,研究了乳清蛋白浓度、温度、加热时间、pH值及金属离子等因素对乳清蛋白凝胶形成的作用。结果显示,乳清蛋白形成凝胶的基本条件是乳清水溶液浓度大于0．133g/mL；温度高于(85±2)℃。当温度在(85±2)～(90±2)℃之间,凝胶形成时间随乳清蛋白浓度变大而减少,在沸水中乳清蛋白浓度对凝胶形成时间影响不大,在19min左右；酸性条件下乳清蛋白形成凝胶的最适pH为5．3,pH小于1．2时,在沸水中加热30min,乳清蛋白形成碎块状凝胶；碱性条件下形成凝胶的最适pH为8．3,pH大于12．8时,在沸水中加热30min,乳清蛋白变为红色；钙离子的添加可使乳清蛋白形成凝胶所需时间减少到6min。     

猪抗凝全血样品检测非洲猪瘟时凝胶产生原因及避免措施探讨

在非洲猪瘟检测时,猪抗凝全血样品在经过水浴灭活后有时会产生凝胶,影响实验的开展。从保存时间及保存温度两个方面对380份猪抗凝全血样品的检测过程进行分析,发现样品保存于零度及以下环境和水浴灭活过程会对凝胶的产生有显著影响。经初步分析,原因可能是样品保存于零度及以下环境时,红细胞因凝固而细胞膜破裂,释放出血红蛋白并在随后的60℃30min水浴灭活过程中产生变性,导致凝胶产生。在工作中,采集全血样品后应尽快进行血清分离,在未分离血清前应避免把样品放置于零度及以下环境保存,避免凝胶产生。     

PAGE凝胶电泳银染方法的改进

为改良DNA聚丙烯凝胶电泳（PAGE）银染方法,采用PCR方法扩增鸡基因组微卫星DNA序列后,经PAGE分离扩增产物和pBR322 DNA/BsuRI标准分子质量,利用2种银染法对微卫星位点进行检测,分析其灵敏度和可行性。结果表明,2种方法都能染出Marker的所有条带,灵敏度均为25 ng,但在染色所需时间和可操作性方面,改进的染色方法优于Sanguinetti等所建立的方法。改进的银染方法染色过程较快,仅需25 min左右,且染色液和显影液可回收利用。该方法能显著提高检测分辨率,在实际应用中提高了染色效率。     

桑树SSR实验技术要点分析

本文分析了桑树SSR的实验过程:基因组DNA提取、引物筛选、PCR反应体系优化、引物退火温度选择、凝胶配制、电泳和凝胶染色、显色,并指出了这些步骤中需要注意的问题,为SSR技术在桑树研究中的应用提供基础。     

用H·E染色显示肠系膜铺片脂肪细胞简法

大多数脂肪组织的染色需作冰冻切片,实验室常用的是苏丹或油红以及硫酸耐尔蓝等染色方法。用石腊切片,苏木精-伊红染色(H.E 染色)法显示脂肪组织,所需时间和步骤较多。笔者在工作中发现,用 H.E 染色法制石腊切片和肠系膜铺片所显示的脂肪组织效果相同,但肠系膜铺片较石腊切片简单易行,便于操作,现介绍如下:     

微卫星PCR产物PAGE与银染改良方法

对湘西黄牛的2个微卫星座位IDVGA44、IDVGA27 PCR,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染。结果表明,在凝胶制备时,采用3%和8%两层凝胶结合的方法,能使电泳条带更加清晰,容易判读。按本文的方法配置试剂和染色,条带清晰,背景着色浅,染色效果理想。     

Masson-Fontana银染色法改良研究

为简化常规Masson-Fontana染色法显示嗜银细胞的染色流程、缩短染色时间,并获得良好染色效果,通过研究对改变影响染色效果最为关键的氨银溶液浓度、浸染温度和时间等因素对该方法进行了改进,经过反复实验,探索出在60℃水浴中用2.5%氨银溶液浸染石蜡切片1 h能得到较好的染色效果,嗜银细胞着色深浅适宜,背景较浅,嗜银颗粒清晰可辨,细胞核明显。说明改良后的Masson-Fontana银染法更为便捷,可以用于嗜银细胞的染色。     

新疆南疆地区乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及对氟苯尼考纳米凝胶的药物敏感性研究

为了研究氟苯尼考纳米凝胶对新疆南疆地区乳源金黄色葡萄球菌的抑菌效果,试验从新疆南疆地区某奶牛场的乳房炎患病奶牛乳样中分离纯化金黄色葡萄球菌,采用生化试验、PCR扩增及测序等方法进行细菌鉴定,并通过比较氟苯尼考原料药、氟苯尼考纳米凝胶和氟苯尼考注射液对金黄色葡萄球菌分离株的抑菌圈直径(DIZ)、最小抑菌浓度(MIC)和抑菌曲线分析氟苯尼考纳米凝胶对金黄色葡萄球菌分离株的抑菌效果。结果表明：从乳样中分离到一株细菌,该分离株革兰氏染色、镜检后呈蓝紫色并排列成葡萄串状,触酶、血浆凝固酶和甘露醇发酵试验结果均为阳性,其基因组DNA中能扩增出金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因,16S rDNA基因序列与金黄色葡萄球菌的相似性为99.7%,判断该分离菌为金黄色葡萄球菌。氟苯尼考原料药、氟苯尼考纳米凝胶和氟苯尼考注射液对金黄色葡萄球菌分离株和金黄色葡萄球菌ATCC 29213株均产生抑菌作用,DIZ大小为氟苯尼考纳米凝胶>氟苯尼考注射液>氟苯尼考原料药,均表现为高度敏感,其中氟苯尼考纳米凝胶对金黄色葡萄球菌分离株和金黄色葡萄球菌ATCC 29213株的DIZ均显著高于氟苯尼考原料药和氟...     

马血凝胶现象浅析

采集动物血液,使其自然凝固析出血清,进行动物疫病血清学诊断,是动物疫病监测的常用方法。笔者在具体操作实践中,常发现有的马的血液分层凝固,上层为乳白色凝胶,紧附血瓶壁,下层为黑红色凝血,有时有血清析出。这样的血液,因不能析出合格的血清而无法利用。针对这一现象,笔者经反复操作实践,认真仃细观察,现对血液凝胶现象浅析如下,供同仁参考。     

东北林蛙皮肤分泌物中特定范围内蛋白和多肽凝胶层析分析

利用凝胶色谱法对东北林蛙皮肤分泌物中蛋白质及多肽组分分子量的分布进行分析。应用葡聚糖凝胶Sephadex G-100、G-50、G-25,利用已知分子量的牛血清蛋白（Mr 66000）、卵清蛋白（Mr 45000）、细胞色素C（Mr 11700）、胰岛素（Mr 5700）、胰高血糖素（Mr 3550）等作为标准品,对流动相、洗脱速度、色谱条件等进行反复试验,用0．5％甲醇洗脱液（含0．14mol／L NaCl）、0．4ml／min流速,筛选东北林蛙皮肤分泌物中分子量Mr 4000左右的蛋白质及多肽,分离获得了大量相应分子量范围的蛋白及多肽组分。该实验方法简便,结果重现性好,适合作为生物工程产品的质控方法。     

凝固型枸杞酸奶的工艺研究

以鲜牛乳、枸杞粉为主要原料,保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌为发酵菌种通过实验研制凝固型枸杞酸奶。实验结果表明：凝固型枸杞酸奶的最佳工艺条件为：接种量4%、白砂糖用量8%、发酵时间9 h、枸杞粉用量10%。在此条件制得色泽粉红均一、质地细腻柔滑、口味酸甜适中,且兼有纯乳酸发酵特有滋味和枸杞特有香味的凝固型酸奶。     

命新城疫浓缩抗原的制备及稳定性测定

采用聚乙二醇浓缩法，制备命新城疫血凝抑制试验浓缩抗原，在不同温度、地点和环境下，测定浓缩怕的稳定性。结果表明，在浓砀血凝固型清晰、稳定、洗脱时间由４０ｍｉｎ延长到４ｈ；加入甘油保护剂的浓缩剂的浓缩抗原在０和４℃条件下，保存半年以上，血凝滴度无明显变化。     

脉冲场凝胶电泳技术的应用及其发展趋势

<正>基因分型方法即分子分型方法,是用现代分子生物学技术分析菌株间基因组的相似程度,进而弥补表型分型在分型能力、重复性及分辨力上的欠缺〔1〕。脉冲场凝胶电泳(PFGE)是一种重要的分子分型技术,其工作原理是:大小不同的DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间不同,一般较小的分子重新定向较快,在凝胶中移动快,大的DNA分子比小的DNA分子定向慢,在凝胶中     

血液涂片染色架的研制与创新

为了有效解决血液涂片制作过程中染色前后的载玻片、染色必用药品和物品侵占实验平台空间及涂片染色后染色废液对环境的污染等问题,研制了一种血液涂片染色架。该血液涂片染色架主要由支撑架、若干隔板和由下至上依次设置在支撑架上的废液槽、染色平台以及放置平台组成。使用时将涂有血膜的载玻片均匀摆放在染色平台上染色,涂片染色后将隔板移动至上面的放置平台,使得染色和晾干等步骤可以同时进行;而涂片晾干时的残余液体能够顺利流动至废液槽中,不会直接滴落。通过使用该血液涂片染色架提高了血液涂片制作的质量,节省了在制作过程中等待晾干的时间,染色废液集中收集处理利于生物安全,节约了实验平台空间。     

垂直平板PAGE检测牛血清碱性磷酸酶同工酶方法的改进

在参考有关资料基础上,对用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测牛血清碱性磷酸酶同工酶过程中凝胶配制、加样量及染色反应等条件进行了改进,探索出一套适用于牛及其它物种血清碱性磷酸酶同工酶分析的方法。     

脊髓等柔软组织石蜡组织切片制作技术探讨

以家兔脊髓组织为实验材料,探讨制作大批量脊髓组织教学标本简便、可行的方法。结果表明,用常规方法制作优质的脊髓组织切片时,在10%的中性福尔马林固定液中固定7 d,进行H.E染色时,苏木精染色的时间为30 min,伊红染色时间6 min,制作的切片细胞核嗜碱性、呈蓝紫色,细胞质和细胞间质嗜酸性、呈粉红色,胞质内尼氏体为蓝紫色颗粒,两者间颜色对比度好,容易区分,是制作大批量教学标本的可选方法。     

2种检测阿勒泰羊Fec~B基因酶切产物方法的比较

为了比较3%琼脂糖凝胶和12%非变性聚丙烯酰胺凝胶的溴化乙锭(EB)染色法检测阿勒泰羊FecB基因酶切产物的准确性,试验采用通用引物对阿勒泰羊的FecB基因序列进行PCR扩增,通过限制性内切酶AvaⅡ对扩增产物进行酶切消化,用EB染色的琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶检测相同条件下酶切的FecB基因产物,通过紫外凝胶成像仪(型号为Gel Doc 2000)进行比较,分析结果。结果表明:EB染色的12%非变性聚丙烯酰胺凝胶所得的酶切结果明显优于3%琼脂糖凝胶所得的酶切结果,因此可采用EB染色的12%非变性聚丙烯酰胺凝胶检测FecB基因。