几个绵羊品种染色体Ag-NORs的研究

利用外周血淋巴细胞培养法研究了 4个绵羊品种的 Ag- NORs,结果表明 ,绵羊 Ag- NORs定位于 1 ,2 ,3,4和未判定的 2对小型染色体上。同羊、汉中绵羊、兰州大尾羊及罗姆尼羊的 Ag- NORs均数分别为 5.41± 1 .1 9,4.50± 1 .2 9,5.2 9± 1 .2 1和 5.60±1 .2 4 ,并且在品种间有显著或极显著差异 (P<0 .0 5,P<0 .0 1 )     

国内主要绵羊品种基于染色体核型进化距离的聚类分析

收集国内10个主要绵羊品种包括藏系绵羊、乌珠穆沁羊、青海细毛羊、河南小尾寒羊、蒙古羊、东北细毛羊、同羊、兰州大尾羊、湖羊、滩羊(贺兰山及盐池)等的染色体核型数据,进行核型进化距离的计算,并采用最短距离聚类分析法进行聚类分析.结果表明:10个绵羊品种可分为2大类群,即蒙古羊系和藏羊系,两大类群在最短距离为1.131 2处相聚.归人蒙古羊系的有8个品种.蒙古羊与兰州大尾羊在最短距离为0.095 2处首先聚为一类;贺兰山滩羊、盐池滩羊、河南小尾寒羊在最短距离为0.120 0处相聚;湖羊在最短距离为0.242 4处与前述品种相聚而成为一小类,东北细毛羊、同羊、乌珠穆沁羊分别在最短距离为0.339 8、0.339 8、0.568 7处与前述品种聚为一大类.归入藏羊系的有青海细毛羊和藏系绵羊,青海细毛羊在最短距离为0.967 5处与藏系绵羊聚为一大类.所得结果与品种起源进化、产地分布大致相同,为国内主要绵羊品种的分类和演化提供了细胞学依据.     

玛丽鱼染色体核型及Ag-NORs研究

为获得玛丽鱼Poecilia latipinna细胞遗传学数据,以玛丽鱼的鳃丝和鳍条为试验材料,采用秋水仙素浸泡、低渗处理和热滴片法制备染色体标本,分析其染色体的核型和银染(Ag-NORs)。结果表明:玛丽鱼具有23对染色体,核型2n=46t,NF=46;Ag-NORs出现在t2和t9的染色体末端,其数目具有多态性,未发现性染色体。本研究结果可为研究玛丽鱼的遗传方式提供基础资料。     

绵羊Y染色体特异性引物及SNPs的筛选

【目的】哺乳动物Y染色体雄性特异区在减数分裂过程中不与X染色体发生重组,遵循严格的父系遗传,是研究父系遗传多样性的重要遗传资源;此外绝大多数Y染色体基因主要或者特异性的在睾丸组织中表达,并在精子发生和雄性繁殖力方面扮演着至关重要的作用。由于Y染色体测序极其困难,造成很多物种Y染色体序列很少。因此本文基于目前现有牛科动物Y染色体引物信息,旨在鉴定绵羊Y染色体特异性引物,比较绵羊Y染色体基因片段与岩羊、牛、山羊和牦牛Y染色体的差异,同时筛选不同绵羊品种在Y染色体基因片段内的SNPs,将找到的Y-SNPs和绵羊的睾丸大小进行相关性分析,为鉴定绵羊Y染色体基因片段奠定基础,并为今后绵羊Y染色体单倍型的构建、绵羊胚胎性别早期鉴定和公绵羊繁殖力相关分子标记的筛选提供科学依据。【方法】根据目前文献公布的29对牛科动物Y染色体特异性引物序列,以母绵羊和水分别作阴性和空白对照,以公绵羊DNA为模板验证引物的雄性特异性;确定绵羊Y染色体特异引物后,利用DNA混合池测序结合限制性长度片段多态性等技术在萨福克羊(n=146)、白萨福克羊(n=91)、东弗里升羊(n=6)、特克塞尔羊(n=72)、南非肉用美利奴羊(n=17)、杜泊羊(n=32)、湖羊(n=55)、藏羊(n=34)、滩羊(n=43)和岩羊(n=14)公羊群体中进行Y-SNPs扫描。用Chromas和DNASTAR等软件分析混合池测序的结果,利用DNAman软件将绵羊Y染色体基因片段与牦牛、山羊、黄牛和岩羊进行同源性分析。同时,测量萨福克羊、白萨福克羊、东弗里升羊、特克塞尔羊、南非肉用美利奴羊、杜泊羊周岁的阴囊围,利用SPSS19.0软件分析SNPs位点与公羊阴囊围的相关性。【结果】在分析的29对引物中,6对引物为绵羊Y染色体特异性引物,分别能扩增出ZFY3、SRY6、USP9Y、UTY、SRY11和ZFY6片段。17对引物未能出现扩增条带,6对引物在母羊DNA中出现扩增条带。通过比对发现绵羊6个基因片段与岩羊、牛、山羊、牦牛的同源性在81.51%—98.84%。此外,首次在萨福克和白萨福克羊群体的SRY11片段中鉴定得到一个GA的突变,通过Hpy188I酶切分析发现在萨福克羊、白萨福克羊中有2种基因型(AA、GG),在其他7个绵羊品种中只有GG基因型。在白萨福克羊群体中,GG基因型的频率为0.747,AA基因型的频率为0.253;在萨福克羊群体中GG基因型的频率为0.986,AA基因型的频率为0.014;说明在萨福克羊和白萨福克羊群体中,GG基因型为优势基因型。关联分析显示在白萨福克羊群体中,GG基因型个体周岁的阴囊围显著的高于AA基因型(P=0.029)。【结论】鉴定得到6个绵羊Y染色体基因片段,它们与牛、山羊、牦牛和岩羊具有较高的同源性,表明Y染色体基因在进化过程中具有一定的保守性。首次在萨福克和白萨福克羊群体SRY11片段中找到一个Y-SNP(GA),其与白萨福克羊周岁的睾丸大小紧密相关。     

玛丽鱼染色体核型及Ag-NORs研究

为获得玛丽鱼Poecilia latipinna细胞遗传学数据,以玛丽鱼的鳃丝和鳍条为试验材料,采用秋水仙素浸泡、低渗处理和热滴片法制备染色体标本,分析其染色体的核型和银染(Ag-NORs)。结果表明:玛丽鱼具有23对染色体,核型2n=46t,NF=46;Ag-NORs出现在t2和t9的染色体末端,其数目具有多态性,未发现性染色体。本研究结果可为研究玛丽鱼的遗传方式提供基础资料。     

凉山半细毛羊与山谷型藏绵羊染色体核型的比较

以微量全血培养法制备染色体标本,对凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊的染色体核型进行了比较。结果表明,凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊二倍体细胞核型均为公羊2N=54,XY;母羊2N=54,XX。2品种羊6号、24号染色体相对长度差异显著(P<0.05),1号、15号、23号、25号染色体相对长度在P<0.10水平上存在差异,其余染色体相对长度差异均不显著(P>0.10)。第1号、2号、3号染色体的臂比指数差异不显著(P>0.10)。同源染色体不等长现象在凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊中均存在,凉山半细毛羊条比值较山谷型藏绵羊高,其中1号染色体在P<0.10水平上显著高于山谷型藏绵羊。     

凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊染色体G-带、C-带核型研究

以凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊为研究对象,以微量全血培养法制备染色体标本,采用GTG法和CBG法获得染色体G-带和C-带,并对其核型进行分析。结果表明,两品种羊的G-带核型基本一致;以凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊G-带核型为基础所作的G-带核型模式图共有275条带,其中阳性带129条;两品种羊C-带核型在分布上无明显差异。     

阿勒泰羊的染色体分析

应用外周血淋巴细胞培养及染色体制备技术对阿勒泰大尾羊染色体核型进行了研究,并测量了各染色体所相对长度和着丝点指数;并进行了G一分带分析,为准确配对和分组提供了依据;对四倍体和非整倍体的出现进行了讨论。     

5个绵羊群体微卫星标记的遗传多态性分析

为评估5个绵羊群体(160只个体)的遗传多态性,对5个微卫星座位(BM2113,ILSTS0004,GC101,Bulge5,471U)进行研究.结果表明,共发现了82个等位基因,其中在471 U座位的等位基因数最多(23个),ILSTS0004座位的等位基因数最少(13个).多态信息含量、期望杂合度和观察杂合度分析表明,5个绵羊群体均存在遗传多态性,各座位等位基因均较丰富.德国美利奴羊和滩羊的遗传多样性比较丰富,蒙古羊的遗传多样性较低.以Nei氏遗传距离(DA)构建NJ系统发育树,蒙古羊和滩羊、德国美利奴羊和德美寒杂交一代分别先聚为一类,最后才与小尾寒羊聚为一类.     

合作猪染色体的研究

采用微量外周血淋巴细胞培养以及Ag-NORs染色、C-分带技术,对合作猪染色体的核型、核仁组成区以及结构异染色质进行了研究。结果表明,合作猪染色体阳性银染核仁组成为1,2,3和4的频率分别为0.00,0.22,0.47和0.31,平均有3.02条染色体的核仁组成区被正染,Ag-NORs联会的频率为1.29％;合作猪染色体C-带类型趋于稳定。     

甘肃滩羊转铁蛋白及白蛋白基因座多态性研究

运用PAGE水平板电泳法对甘肃省3个滩羊产区293份血清样品转铁蛋白(Tf)、白蛋白(Alb)基因座多态性进行了检测。结果表明,甘肃滩羊Tf基因座共存在21种基因型,TfAA、TfAB、TfAC、TfAD、TfAM、TfAP、TfBB、TfBC、TfBD、TfBE、TfBM、TfBP、TfCC、TfCD、Tf CM、TfCP、TfDD、TfDE、TfGG、TfGB、TfGC,它们分别受TfA、TfB、TfC、TfD、TfE、TfG、TfM和TfP 8个共显性复等位基因控制,TfBC和TfCC基因型、TfB和TfC基因为各群体中的优势基因型和优势基因;未在血清Alb基因座检测到多态性,它呈现单态。     

绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养的研究

研究了绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养,并就影响体外成熟的因素进行了探讨。试验表明:添加10%和15%的胎牛血清(FCS)绵羊卵巢卵母细胞的体外成熟率(81.25%和83.75%)明显高于不添加FCS的对照组的卵母细胞成熟率(65.00%);在基础培养基中10%的FCS存在的条件下,添加一定质量分数的促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)时,卵母细胞的体外成熟率明显高于不添加FSH和LH的对照组的绵羊卵母细胞的体外成熟率;培养24 h和26h卵母细胞体外成熟率(75.00%和80.00%)明显高于培养20 h的卵母细胞体外成熟率(63.30%);从3~6 mm卵泡中抽取的卵母细胞体外成熟率(81.50%)明显高于从1~3 mm卵泡中抽取的卵母细胞的体外成熟率(53.30%)。