华东地区清洁级大、小鼠中ECTV、MHV和SV的检测

为了研究华东地区清洁级实验鼠中鼠痘病毒(ECTV)、小鼠肝炎病毒(MHV)和仙台病毒(SV)感染症的流行情况,从华东地区4个主要实验动物供应基地分别购入ICR和(或)C57BL/6小鼠各30只,SD或Wistar大鼠各15只。采用摘眼球法采集血样和分离血清后,用进口商品化ELISA试剂盒分别检测小鼠的ECTV、MHV和SV的血清抗体。大鼠因为一般不易感染MHV和SV,因此只检测ECTV血清抗体。调查结果显示,在华东地区4个主要实验动物供应基地中,有3个基地的清洁级实验大、小鼠的检测结果均为阴性,但在另1个基地的清洁级ICR小鼠中,MHV和SV的血清抗体阳性率分别为56.7%和100%,C57BL/6小鼠的MHV血清抗体阳性率为100%。研究结果表明,华东地区实验动物供应基地大部分商品化的实验大、小鼠中,上述3种疫病的检测质量合格,但在个别基地中MHV和SV依然存在,且感染情况比较严重,应该积极采取措施加强管理,净化鼠群,同时认真开展鼠病的监测工作,保证实验用鼠的质量,以免对实验用鼠的繁育和使用带来不利影响。     

福建省2007-2008年清洁级以上实验动物寄生虫检测结果分析

按实验动物寄生虫学检测方法国家标准,检测福建省清洁级以上动物的寄生虫感染情况。2007-2008年共检测福建省3家单位饲育的清洁动物4批次,SPF动物11批次。发现清洁级KM小鼠1批次有肠道蠕虫(10/10)和ICR小鼠1批次有肠道蠕虫(6/6),SPF级C57BL/6小鼠2批次有肠道鞭毛虫(1/8、3/8)和C57BL/6×SU129小鼠1批次有肠道鞭毛虫(2/8)。表明影响福建省清洁动物达标的主要是蠕虫,影响SPF动物达标的主要是鞭毛虫。为确保实验动物质量,应规范屏障环境的运行和管理,并定期对动物进行寄生虫学检测,针对发现的问题寻找影响因素并纠正。     

肺炎支原体感染大鼠实验模型的建立

本试验旨在建立肺炎支原体感染的Wistar大鼠模型 ,为研究肺炎支原体的发病机制及药物治疗理论提供基础。采用滴鼻法对实验大鼠进行肺炎支原体感染 ,利用PCR法进行咽拭子检测 ,并以透射电镜和光学显微镜进行肺部病理组织学检查。结果发现 ,实验大鼠在感染肺炎支原体 1 0d时 ,咽拭子PCR检测结果为阳性 ;透射电镜观察到肺脏细胞膜破裂 ,线粒体变性 ,嵴断裂 ;光镜下可见到支气管及肺血管周围有明显的淋巴细胞浸润 ,形成斑片状间质性支气管肺炎。结果表明了Wistar大鼠对肺炎支原体较易感 ,并产生以间质性肺炎为主要特征的肺部和呼吸道感染 ,也说明本次造模试验成功     

流行性乙型脑炎病毒GI型毒株SD12在C57BL/6小鼠体内的动态分布研究

为了解流行性乙型脑炎病毒基因I型毒株SD12在感染C57BL/6小鼠体内的病毒分布,应用qRT-PCR 方法检测该毒株在小鼠体内各组织的动态分布情况。结果显示腹腔感染组中2 dpi仅能在心脏和脾脏检测出病毒核酸,5～7 dpi能够在心脏、肝脏、脑部、盲肠和扁桃体检测到病毒核酸。血脑屏障受损的腹腔感染组中最早2 dpi在肠系膜淋巴结中检测到病毒核酸,3 dpi基本能在各组织中检测到病毒核酸,5～7 dpi在大脑中检测到大量病毒核酸。所有对照组没有检测到病毒阳性核酸。本研究表明基因I型流行性乙型脑炎病毒感染血脑屏障受损的C57BL/6小鼠后能迅速入侵各组织脏器,主要浸染肝脏、肺脏、肾脏、盲肠和大脑。拥有完整血脑屏障的小鼠对病毒具有一定抵抗能力,病毒在各组织中的含量相对比较低。     

使用超净工作台实施子宫摘除术净化ICR小鼠的研究

为了建立SPF级远交系ICR小鼠种群。使用超净工作台实施子宫摘除术净化小鼠,结果:使用上述方法成功剖腹孕鼠20只,得到净化小鼠140只,育成小鼠120只,检测各项指标符合SPF级标准。结论:在普通环境中使用超净工作台实施子宫摘除术净化ICR小鼠,是建立SPF级种群唯一经济有效的方法。     

温氏支原体感染动物模型的建立

为促进温氏支原体的深入研究,本试验建立了温氏支原体感染动物模型。选择6～8周龄健康雄性昆明种小鼠60只,随机分为A、B、C、D 4组,试验组(A、B、C)分别以不同方式感染温氏支原体,D组为对照组。结果表明,腹腔注射一定剂量高感染强度的牛红细胞悬液,同时注射免疫抑制剂地塞米松组(C组)表现为首现期出现早,且高峰期红细胞感染率高。应用悬滴镜检法和PCR诊断方法对感染小鼠血样进行鉴定,均符合温氏支原体特征。选择对照组小鼠和感染率高、临床症状较为明显的C组小鼠各10只,进行血液生理生化指标测定(RBC、WBC、Hb、TP、G、ALT、AST),结果呈现出与牛感染温氏支原体相同的规律。     

SPF级小鼠肺支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为了建立及应用SPF级小鼠肺支原体实时荧光定量PCR检测方法,试验根据GenBank中肺支原体16S rRNA基因序列的高度保守区域设计引物,建立了可快速、准确检测肺支原体的实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并对该方法进行特异性、敏感性、重复性以及疑似支原体感染样本检测,并评论其可行性。结果表明:所建立的qPCR方法具有良好的线性关系,标准曲线的相关系数R~2=0.999;5种相关的细菌检测结果均为阴性,特异性好;其检测灵敏度为10 copies/μL;组间样本的变异系数均小于3%,重复性好;对60份疑似支原体感染的小鼠咽拭子样本检测结果比采用ELISA方法以及常规PCR更灵敏。说明SPF级小鼠肺支原体的qPCR方法较之于ELISA方法及常规PCR具有快速、灵敏性高、特异性强、稳定性好等特点,能更好地进行小鼠肺支原体的快速检测和诊断。     

SPF级BALB/cC57BL/6小鼠繁殖性能及生长发育的比较研究

为提高SPF级实验动物的质量,选择10周龄BALB/c C57BL/6小鼠各50只（雌雄各半）,采取雌雄1？1近亲交配繁殖,并统计其生长发育和繁殖性能指标。BALB/c小鼠1～3周龄的平均窝重及离乳后的体重增长明显大于C57BL/6小鼠（p〈0.01）。第1胎交配分娩间隔,第1和第3胎离乳育成率品系间差异均有显著性（P〈0.05及P〈0.01）。BALB/c小鼠的体格比C57BL/6小鼠大,带乳能力比C57BL/6小鼠强但产仔能力比C57BL/6小鼠弱。     

芩百清肺浓缩丸对支原体肺炎模型鼠肺组织影响的研究

采用滴鼻法建立大鼠肺炎支原体感染模型,并给予芩百清肺浓缩丸以观察其对鼠肺部组织的影响.光镜观察结果显示,感染鼠肺部病理变化为支气管及肺血管周围有明显的淋巴细胞浸润,形成斑片状间质性支气管肺炎.病变程度以模型组最重,芩百高剂量组与正常对照组相近;电镜扫描显示,模型组大鼠气管上皮表面被粘液和纤维蛋白等覆盖,纤毛粘连、倒伏,部分脱落,表现为明显的支气管慢性炎症,粘膜水肿,细支气管变厚而管腔变窄.严迪组和芩百高、中剂量组细胞界限较清晰,粘膜处于上皮修复和纤毛再生状态;咽拭子PCR检测结果为模型组阳性,芩百组和严迪组为阴性.以上结果表明,芩百清肺浓缩丸能有效地减轻支原体对肺部组织的炎性病变,促进气管上皮细胞的恢复.     

肺炎支原体感染对大鼠免疫功能和一些生化指标的影响

采用滴鼻法建立大鼠肺炎支原体感染模型 ,并对其体液免疫和细胞免疫功能进行了检测。与正常对照组相比 ,感染组大鼠血清中IgG、IgM明显降低 ,C3补体增加 ;血清中IL 2、IL 6降低 ,TNF α增高 ;全血中CD+ 8增加 ,CD+ 4/CD+ 8比值降低 ;血浆中NO、MDA含量增加 ,GSH Px活性增加。结果表明 ,细胞因子和免疫球蛋白的紊乱导致机体体液免疫和细胞免疫功能的低下 ,并诱发肺部广泛的炎症反应 ,提示它们在肺炎支原体感染的发病机制及肺外并发症的发生中起重要作用。     

绵羊肺炎支原体标准株Y98与丝状支原体丝标准株PG3、绵羊肺炎支原体分离株HD-1、标准株FH抗原的差异性研究

试验采用SDS—PAGE和免疫印迹分析技术研究了绵羊肺炎支原体标准株Y98与绵羊肺炎支原体分离株HD-1、丝状支原体丝状亚种PG3以及肺炎支原体标准株FH间细胞膜蛋白免疫原性的异同。结果表明：绵羊肺炎支原体标准株Y98同绵羊肺炎支原体分离株HD-1间细胞膜蛋白免疫印迹结果基本一致,而绵羊肺炎支原体标准株Y98与丝状支原体丝状亚种PG3和肺炎支原体标准株FH抗原差异较大,缺乏共同抗原成分。     

Biochemical Characterization of Mycoplasma bovirhinis,Mycoplasma dispar and Recent Bovine Isolates of Mycoplasma canis

The pattern and kinetics of substrate utilization by the type strains of Mycoplasma canis, M. bovirhinis and M. dispar and ten recent M. canis isolates from cattle were determined. Metabolism of a range of sugars and organic acids by M. dispar was detectable by measurement of oxygen uptake. Organic acids were not utilized by M. bovirhinis or M. canis, and there was no oxygen uptake during metabolism of glucose or other sugars, as monitored by a pH-change method. The M. canis strains varied in their ability to metabolize sugars; seven of the isolates from cattle had the distinctive ability to metabolize sucrose, and one isolate, plus the type strain (from a dog), metabolized N-acetylglucosamine. The M. bovirhinis strain metabolized maltose. However, all the test strains oxidized glycerol at high rates and with a high affinity. Oxidation of glycerol has been reported for other mycoplasmas from the bovine respiratory tract and leads to the production of hydrogen peroxide, a potential virulence factor.     

监测支原体

肥育期后期的健康问题可以反映出母猪场内青年母猪的健康状况,肥育猪后期控制支原体非常重要。     

Utilisation of glucose by Mycoplasma suipneumoniae and Mycoplasma flocculare.

The utilisation of glucose by Mycoplasma suipneumoniae and Mycoplasma flocculare was examined by chemical determination of glucose disappearance during growth, and by examination for hexokinase activity in cell preparations. Both species degraded glucose during growth and possessed hexokinase activity as evidence of the presence of a glycolytic pathway. The glucose utilisation capacity was found to be greater for M. flocculare than for M. suipneumoniae.     

Species-specific polymerase chain reactions for the detection of Mycoplasma buteonis, Mycoplasma falconis, Mycoplasma gypis, and Mycoplasma corogypsi in captive birds of prey

Mycoplasmas are pathogens of different avian species, but the role of Mycoplasma in raptors is not yet completely determined. As Mycoplasma isolation and identification present several difficulties, species-specific polymerase chain reactions (PCRs) for the detection of mycoplasmas found in birds of prey (Mycoplasma buteonis, Mycoplasma corogypsi, Mycoplasma falconis, and Mycoplasma gypis) were established. The specificity of the PCR methods were investigated using known avian Mycoplasma reference strains and isolates as well as related bacteria and was found to be specific. Amplificons obtained with these PCRs from field samples showed no false-positive results in restriction enzyme analysis and sequencing. The sensitivities of the different PCR assays varied between 50 fg and 1 pg DNA. Twenty-five tracheal swabs from healthy captive birds of prey were investigated by culture and immunobinding assay as comparison to the PCRs. Mycoplasmal DNA was detected in 88% of the samples, with negative results only from vultures. Mycoplasma falconis and M. buteonis were regularly found in falcons, and M. gypis was found in a common buzzard. Mycoplasma corogypsi was not demonstrated. Several isolates could not be differentiated using an immunobinding assay as well as the described PCR methods.