肉鸡肠道NHE2 mRNA表达的组织特异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre（AA）肉雏鸡120羽,随机分为4个重复,采用相对定量RT-PCR方法,以30日龄AA肉鸡肠道RNA为模板,研究肉鸡肠道钠/氢交换载体2（Sodium hydrogen exchanger 2,NHE2）mRNA表达的组织特异性;以AA肉鸡十二指肠和空肠RNA为模板,研究肉鸡肠道NHE2mRNA表达的发育性变化。结果显示：①AA肉鸡十二指肠和空肠NHE2 mRNA的表达丰度显著高于回肠和结直肠（P〈0.05）,而十二指肠和空肠之间、回肠和结直肠之间无显著差异（P〉0.05）;②AA肉鸡NHE2 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,2～16日龄升高,30～44日龄下降,55日龄略微回升;在16和30日龄时的表达丰度显著高于2、44和58日龄（P〈0.05）。以上结果说明：AA肉鸡肠道近端NHE2 mRNA的表达丰度显著高于远端（P〈0.05）。AA肉鸡十二指肠及空肠NHE2 mRNA的表达具有相同的发育模式,表明NHE2mRNA表达受到发育阶段的调控,且在十二指肠和空肠间具有稳定性。     

肉鸡肠道PepT1 mRNA表达的肠段差异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre(AA)鸡和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各120羽,采用相对定量RT-PCR方法,以30 d时岭南黄鸡肠道样品为模板,研究肉鸡肠道寡肽转运载体1(Peptide transporter 1,PepT1)mRNA表达的肠段差异性;以AA肉鸡和岭南黄鸡十二指肠和空肠样品为模板,研究不同品种肉鸡肠道PepT1 mRNA表达的发育性变化。结果显示:(1)岭南黄肉鸡肠道PepT1 mRNA的表达丰度从十二指肠、空肠、回肠到结直肠依次降低,其中十二指肠显著高于结直肠(P<0.05);(2)AA鸡和岭南黄肉鸡PepT1 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,16 d表达丰度最高,16~44 d逐渐下降,58 d略微回升;不同基因型之间PepT1 mRNA丰度比较,AA鸡和岭南黄肉鸡两品种间PepT1 mRNA的表达没有显著差异(P>0.05)。以上结果说明:(1)随着肠道空间位置的后移,岭南黄肉鸡肠道PepT1 mRNA的表达丰度逐渐降低,其中十二指肠的表达丰度显著高于结直肠(P<0.05);(2)不同品种肉鸡十二指肠及空肠PepT1 mRNA的表达具有相同的发育模式,且同日龄两品种间的表达丰度未见明显差异,表明PepT1 mRNA表达受到发育阶段的调控,但品种间具有稳定性。     

猪肠道碱性氨基酸转运载体(CAT1)mRNA表达的组织特异性和发育性变化

本研究旨在探讨不同品种猪肠道碱性氨基酸转运载体（CAT1）mRNA表达的组织特异性和发育规律。试验选取1、7、26、30、60、90和150日龄长白和蓝塘公猪各5头（同一品种同一日龄且体重接近）,共70头,测体重后屠宰,采集十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品。以18S基因为内标,用实时荧光定量RT-PCR法（SYBR Green Ⅰ试剂盒）检测CAT mRNA在60日龄长白猪十二指肠、空肠、回肠和结肠表达的组织特异性,以及在长白和蓝塘猪不同日龄其十二指肠、空肠、回肠表达的发育性变化。结果显示：60日龄长白猪CAT1 mRNA的表达丰度从十二指肠到回肠呈逐渐升高的趋势,到结肠开始下降,回肠极显著高于其他3个肠段（P〈0．01）,十二指肠最低;十二指肠和空肠CAT mRNA的表达在1～26d（即哺乳期）都呈上升的趋势,随后都开始有所下降;蓝塘猪十二指肠CAT1 mRNA的表达丰度在150d时显著低于其他各个阶段（P〈0．05）,而长白猪90和150d都显著低于其他各阶段（P〈0．05）;空肠CAT1 mRNA的表达在26～150d各阶段都差异不显著,而26d显著高于1和7d（P〈0．05）;1～60d长白和蓝塘猪回肠CAT1 mRNA的表达都呈逐渐上升的趋势,60d后都显著下降（P〈0．05）。两品种猪不同日龄时十二指肠和空肠CAT1 mRNA的表达量都没有显著差异（P〉0．05）;长白猪回肠CAT mRNA表达在26d时显著高于蓝塘猪（P〈0．05）;在90和150d时,长白猪都显著低于蓝塘猪（P〈0．05）,其他各阶段没有显著差异。结果说明,CAT mRNA在不同肠段及不同发育阶段的表达存在明显的差异,这可能与肠腔中氨基酸的浓度和氨基酸的需要水平及相关激素水平有关。     

鸡肠道SGLT1和GLUT2 mRNA表达的组织特异性研究

运用相对定量RT-PCR方法，研究不同肠段Arbor Acre（AA）肉鸡肠道葡萄糖吸收转运主要载体SGLT1和GLUT2mRNA表达的组织特异性。结果发现。随着肠道空间位置的后移，SGLT1 mRNA的表达量逐步降低。十二指肠SGLT1 mRNA的丰度比结直肠高76．19Vo，差异极显著（P〈0．01）；而空肠和回肠SGLT1 mRNA的表达量分别比结直肠高42．86％和38．10％，差异不显著（P〉0．05），但有提高的趋势（P值分别为0．06和0．07）。十二指肠与空肠和回肠相比，SGLTlmRNA的表达量虽然分别高23．33％和27．59％，但差异不显著（P值分别为0．18和0．10）。相对定量分析表明，十二指肠和空肠GLUT2 mRNA丰度非常接近，差异不显著（P〉0．05）。定性研究显示，十二指肠与空肠GLUT2 mRNA丰度高于回肠和结直肠。鸡肠道SGLT1和GLUT2 mRNA表达的组织特异性之生理功能，有待于进一步研究。     

脂肪酸合成酶基因mRNA在马身猪和大白猪3种组织中的发育性表达研究

为探究脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)基因在猪不同组织中的发育性表达规律,本研究采用实时荧光定量PCR技术检测马身猪和大白猪7个阶段(初生、30、60、90、120、150和180日龄)肝脏、背最长肌和背部皮下脂肪3种组织中FAS基因mRNA的相对表达量。结果表明,品种间比较,FAS基因mRNA在马身猪和大白猪肝脏、背最长肌和背部皮下脂肪组织各生长发育阶段中的表达差异均达到显著或极显著(除肝脏组织初生阶段和背部皮下脂肪组织120日龄阶段)(P<0.05;P<0.01)。FAS基因mRNA在大白猪组织间的表达差异与生长发育相关,150和180日龄阶段,背部皮下脂肪组织中表达量极显著高于肝脏和背最长肌组织(P<0.01),初生、30日龄和90日龄阶段,背最长肌中的表达量极显著高于肝脏和背部皮下脂肪组织(初生阶段无脂肪组织样)(P<0.01);而马身猪整个发育过程中,背最长肌组织表现为优势组织,极显著高于其他2种组织(除120日龄阶段外)(P<0.01),脂肪组织表达量次之,肝脏组织中表达量较少。品种、日龄、组织及品种与日龄、组织与日龄的互作效应对FAS基因mRNA的相对表达量均有极显著影响(P<0.01)。FAS基因直接参与脂肪酸的合成,对猪肉质性状的遗传改良具有重要意义。     

不同品种肉鸡肠道rBAT和y+LAT2 mRNA表达的发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre（AA）和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各160羽,采用相对定量RT-PCR方法,以AA肉鸡和岭南黄肉鸡十二指肠、空肠和回肠样品为模板,研究不同品种肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体rBAT和y^＋LAT2 mRNA表达的发育性变化。结果显示：十二指肠和空肠rBAT和y^＋LAT2 mRNA表达的发育性变化与回肠有着较大的差异。不同品种肉鸡rBAT和y^＋LAT2 mRNA在十二指肠和空肠的表达具有相同的发育模式,从2-30d不断升高,44d下降,55d回升;岭南黄肉鸡rBAT和y^＋LAT2 mRNA表达丰度的变化幅度小于AA肉鸡,AA肉鸡rBAT和y^＋LAT2 mRNA表达丰度在2-30d时均高于岭南黄肉鸡。回肠rBAT和y^＋LAT2 mRNA表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和AA肉鸡间有显著差别,岭南黄肉鸡回肠rBAT和y^＋LAT2 mRNA表达在后期（30-58d）高于前期（2-16d）;而AA肉鸡回肠rBAT和y^＋LAT2 mRNA表达在58d显著高于其它时间点,在16d时最低。以上结果说明：（1）十二指肠和空肠rBAT、y^＋LAT2 mRNA表达的发育性变化与回肠有着较大的差异,这表明肠道近端和远端在碱性氨基酸吸收的功能上可能有差异;（2）不同品种肉鸡十二指肠和空肠rBAT、y^＋LAT2 mRNA的表达具有相同的发育模式,但在时间点上有一定的差异,而与回肠的表达模式不同,表明rBAT和y^＋LAT2 mRNA的表达受到发育阶段、品种和肠段的影响;（3）回肠rBAT和y^＋LAT2 mRNA表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和AA肉鸡间有显著差别。     

丁酸钠对体外培养猪肠黏膜上皮细胞寡肽转运载体及钠氢交换载体mRNA表达的影响

为探讨丁酸钠对肠道寡肽转运载体(PepT1)及钠氢交换载体(NHE2、NHE3)mRNA表达丰度的调控,取刚出生未吮乳的仔猪小肠黏膜组织,建立猪小肠上皮细胞(IEC)分离及原代培养方法。分别用0,2,4,8 mmol/L的丁酸钠处理体外培养的猪小肠黏膜上皮细胞96 h后,提取细胞总RNA,以18S rRNA为内标基因,用实时荧光定量RT-PCR法(SYBR GreenⅠ试剂盒)检测PepT1、NHE2及NHE3 mRNA在不同浓度丁酸钠处理细胞中的表达丰度。结果表明,体外培养的猪小肠黏膜上皮细胞用丁酸钠处理96 h后,PepT1和NHE2 mRNA的表达丰度均显著增加(P0.05),且呈现剂量依赖效应;NHE3 mRNA表达丰度的剂量效应不明显,只有在高浓度丁酸钠(8 mmol/L)组时才显著高于对照组(P0.05)。     

战略性使用饲料原料和饲料添加剂以促进幼龄猪的肠道健康及发育

人们对刺激断奶仔猪的肠道发育和健康方面的饲养管理和饲喂策略有广泛的兴趣,目的是为了提高仔猪的生长性能,同时尽量减少抗生素和较昂贵饲料成分(如乳制品类)的使用。本文的重点是阐述养分、饲料成分及添加剂的选择对促进肠道健康和发育的重要性。虽然研究重点是断奶仔猪,但同时也适用于其他阶段的猪。     

天然植物饲料添加剂对合作猪消化能力和肠道发育的影响

试验旨在研究天然植物饲料添加剂对合作猪断奶仔猪生长性能、养分消化率和肠道发育的影响。选择60头体重6.10±0.32kg的合作仔猪随机分为A、B、C组,每组4个重复,每个重复5头仔猪,试验期为40d。A、B和C组饲喂日粮分别为基础日粮、添加0.3%和0.5%天然植物饲料添加剂的基础日粮。结果表明:与A组相比,B组、C组的日增重分别提高了3.69%(P0.05)、5.52%(P0.05);C组的料肉比显著低于A组(P0.05);B组、C组的腹泻率显著低于A组(P0.05);C组粗蛋白表观消化率、总能表观消化率显著高于A组(P0.05);B、C组十二指肠和空肠的绒毛高度显著高于A组(P0.05)。B、C组肠道各阶段的绒毛高度/隐窝深度(C/V)均显著高于A组(P0.05)。本试验条件下,天然植物饲料添加剂能提高合作猪生长性能和饲料消化率,促进肠道发育;添加0.5%的天然植物饲料添加剂效果相对优于0.3%的水平。     

猪TLR3 mRNA的表达特征与调控分析及其与感染蓝耳病的关系

克隆了猪Toll样受体3(toll-like receptor 3,TLR3)的部分编码区,分析了其在物种间的同源性;检测了不同组织及感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)前后不同品种猪肺组织TLR3基因mRNA水平的表达变化,分析了猪TLR3基因5′调控区对转录的影响。结果显示:猪与牛、绵羊等哺乳动物TLR3的同源性较高,与鸡、斑马鱼的同源性较低;TLR3mRNA在猪肝脏、肾脏和小肠组织中的表达较高,而在心脏、子宫、淋巴结、大脑、肌肉、大肠和肺组织中的表达较低,在小脑和扁桃体中几乎检测不到其表达;TLR3基因在抗蓝耳病的大蒲莲猪和对蓝耳病易感的杜大长杂交猪肺组织中的表达存在显著差异,大蒲莲猪中的表达量均显著高于杜大长杂交猪(未攻毒,P0.05;攻毒,P0.01);攻毒大蒲莲猪肺组织TLR3mRNA表达量升高,杜大长杂交猪的表达量下降;荧光素酶分析表明,5′调控区-2 952bp至-2 603bp、-1 632bp至-1 079bp区段有增强TLR3表达的顺式元件。结果表明:TLR3的高表达可能与猪对蓝耳病的抗性有关。     

日粮类型对猪肌肉组织HSL mRNA和Obese mRNA基因表达的影响

选用20 kg左右的"杜×长×大"外三元杂交仔猪20头,随机分为2组,分别饲喂豆粕型和杂粕(双低菜籽粕+豆粕)型2种不同类型的日粮,饲养猪至体重达到100 kg左右时屠宰测定瘦肉率,取背最长肌肌肉组织,采用RT-PCR技术检测分析HSL mRNA和Obese mRNA表达情况,以探索出日粮类型与基因表达的关系。结果显示,杂粕日粮较豆粕日粮可显著增加HSL mRNA表达量、减少Obese mRNA表达量(P<0.05),2种日粮类型虽对猪瘦肉率无显著性影响,但是从实际值来看,杂粕日粮表现出提高趋势,较豆粕日粮提高3.5%(P>0.05)。     

不同品种猪在不同生理阶段骨骼肌葡萄糖转运体和胰岛素受体表达的发育性变化

本试验旨在研究不同品种猪在不同生理阶段骨骼肌葡萄糖转运载体(GLUT)1、GLUT4和胰岛素受体(IR)mRNA表达的发育规律.试验以1、7、30、60、90和150日龄蓝塘和长白两品种猪背最长肌、半膜肌和半腱肌组织样品cDNA为模板,采用实时荧光半定量PCR的方法,检测猪GLUT1和GLUT4 mRNA在不同骨骼肌中的表达模式.结果显示:1)1～ 150日龄蓝塘和长白猪背最长肌、半膜肌和半腱肌GLUT1 mRNA表达存在相似的发育变化规律,在1日龄时相对表达丰度最高.2)1 ～ 150日龄蓝塘和长白猪半膜肌和半腱肌GLUT4 mRNA相对表达丰度随日龄呈波形式变化,变化速度和程度存在品种差异.1日龄和150日龄时蓝塘猪背最长肌GLUT4mRNA相对表达丰度低于同日龄长白猪(P>0.05),而在其余日龄时高于同日龄长白猪(P>0.05).3)蓝塘和长白猪背最长肌、半膜肌和半腱肌IR mRNA相对表达丰度在1和30日龄时表现出较高水平,而在7、60、90和150日龄时无显著差异(P>0.05);同日龄蓝塘和长白猪之间IR mRNA相对表达丰度无显著性差异(P>0.05).结果表明:猪骨骼肌GLUT1 mRNA的表达在不同生理阶段存在差异,猪骨骼肌GLUT4 mRNA的表达在不同品种和生理阶段存在显著差异,且其与IR mRNA的表达相关性较弱,无明显规律.     

爱拔益加肉仔鸡肠道PepT1、B0 AT和EAAT3 mRNA的表达差异与发育规律

本试验旨在研究爱拔益加(AA)肉仔鸡肠道小肽转运载体1(PepT1)、B0系统中性氨基酸转运载体(B0AT)、兴奋性氨基酸转运载体3(EAA T3)mRNA的表达差异与发育规律.试验选取1日龄雄性AA肉仔鸡120只,随机分为8个组,于1、7、14、21、28、35、42日龄,每个组选取1只肉仔鸡,采用实时荧光定量PCR技术检测不同肠段Pep T1、B0AT、EAAT3 mRNA的相对表达量.结果显示:1)肉仔鸡不同肠段PepT1、B0AT、EAAT3 mRNA的相对表达量差异显著(P＜0.05).其中,PepT1 mRNA的相对表达量在十二指肠最高,空肠次之,回肠最低,B0AT、EAA T3mRNA的相对表达量在回肠最高,空肠次之,十二指肠最低.2)肉仔鸡不同日龄Pep T1、B0AT、EAAT3 mRNA的相对表达量存在极差异显著(P＜0.01);在不同肠段上,PepT1、B0AT、EAA T3mRNA的相对表达量随日龄的变化均表现为前期升高,后期平稳的趋势.由此可见,肉仔鸡肠道参与小肽及氨基酸吸收的转运载体PepT1、B0AT、EAAT3 mRNA表达具有肠段及日龄的差异性.     

斑马鱼E3泛素连接酶基因的生物信息学分析和mRNA表达

目的对斑马鱼E3泛素连接酶基因进行生物信息学分析,并研究其mRNA表达情况。方法利用生物信息学方法分析斑马鱼E3泛素连接酶基因的cDNA序列、蛋白质二级结构、结构域、氨基酸序列同源性,并构建进化树;利用整胚原位杂交技术研究目的基因在斑马鱼体内的mRNA表达模式。结果在NCBI基因库中找出TRIM54、TRIM55a、TRIM55b、TRIM63a、TRIM63b和TRIM101 6个斑马鱼E3泛素连接酶基因。这些基因之间有较高的同源性,二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,编码的蛋白质均含有3个保守结构域：环锌指、B-box锌指和卷曲螺旋。进化树分析显示,所有基因聚为4组：各物种TRIM54基因聚为一组;各物种TRIM55基因聚为一组,但靠近于斑马鱼TRIM101基因分支;TRIM63基因分为一组。整胚原位杂交结果显示,这些TRIM基因的mRNA均在受精后24 h的斑马鱼的肌节中表达,且TRIM55a、TRIM63a和TRIM101基因表达量较高。这些TRIM基因在肌肉发育和肌肉功能中可能发挥作用。结论斑马鱼的6个E3泛素连接酶基因有较高的保守性,其mRNA特异性表达于肌节部位。结果对深入研究这些基因在鱼类肌肉中的作用和指导鱼类生产具有一定的意义。     

维生素E缺乏对雏鸡脾脏淋巴细胞Caspase-3活性及Caspase-3mRNA表达的影响

用低维生素E(VE)和添加不饱和脂肪酸的日粮饲喂雏鸡建立VE缺乏雏鸡模型,采用比色法和半定量RT-PCR法分别检测脾脏淋巴细胞Caspase-3活性及Caspase-3 mRNA的表达水平。结果显示,VE缺乏组雏鸡脾脏淋巴细胞Caspase-3活性和Caspase-3 mRNA丰度高于对照组,组间差异均极显著(P<0.01)。结果表明,Caspase-3活性及Caspase-3 mRNA丰度的改变,是VE缺乏雏鸡脾脏淋巴细胞凋亡的调控机制之一。