福建省大豆疫病病原鉴定及其核糖体DNA-ITS序列分析

 从福建省龙海大豆根腐病株上分离的疫霉菌株中,选取6个代表菌株,对病原菌进行了形态特征、致病性、寄主范围鉴定及核糖体DNA-ITS序列分析,结果表明,该菌为疫霉属真菌,在黑麦琼脂培养基上生长缓慢,菌丝致密、无隔,形成菌丝膨大体,近直角分支,分支处稍缢缩。水培后产生大量椭圆形孢子囊,不形成乳突,通过内层出方式产生新孢子囊,游动孢子在孢子囊内形成,同宗配合,藏卵器球形,雄器侧生;接种后可出现典型的大豆疫病症状;人工接种只侵染大豆、豇豆和菜豆等少数豆科植物。其核糖体DNA-ITS序列分析表明,分离菌株与GenBank中大豆疫霉的ITS序列的同源性均为99.8%,仅有2个碱基的差异,结合形态特征和致病性测定,将这些病原菌鉴定为Phytophthora sojae. 这是首次报道大豆疫霉菌在福建省存在。     

沈阳地区丝瓜疫病病原菌研究

从沈阳地区丝瓜疫病的病组织及土壤中分离18株疫霉菌,从中选取2个代表菌株进行分类鉴定。根据病原菌形态特征、生理特性、寄主范围和核糖体DNA-ITS序列分析等,确定引起丝瓜疫病的病原菌为烟草疫霉(Phytophthora nicotianae Bredade Hann)。该病原菌寄主范围较广,生长温度大于35℃,异宗配合,自然条件下不能产生卵孢子,但在低温等不良环境下形成大量厚垣孢子。     

非洲菊疫霉根腐病的快速分子诊断

 隐地疫霉引起的根腐病是非洲菊生产上的主要病害,为发展该病的快速诊断技术,本文比较了卵菌核糖体基因ITS的序列,在此基础上设计了2条针对隐地疫霉的特异性PCR引物PC1和PC2。供试的23种不同真菌和疫霉菌的46个菌株中,利用这对引物能从隐地疫霉基因组DNA中扩增出一条分子量为620bp的特异性条带,该引物的检测灵敏度可达10pg。采用快速组织碱裂解法提取发病植物组织的DNA,结合PCR检测技术,4h内可从发病的非洲菊根部组织中特异性地检测到隐地疫霉菌。结果表明,建立的非洲菊疫霉根腐病菌分子检测方法可用于该病害的快速分子诊断。     

安徽省大豆疫霉根腐病菌的鉴定及rDNA-ITS序列分析

为明确安徽省夏大豆疫霉根腐病的病原菌种类,对采集自涡阳、怀远、固镇3个县的夏大豆病株及土样分离纯化后获得28株菌株,选取6株代表性菌株,通过形态学观察及核糖体DNA-ITS序列分析对其进行鉴定,并测定了其致病型。结果表明,6株菌株在利马豆培养基上菌落白色,质地均匀;菌丝无隔,致密,具近直角分枝;在10%V8C培养液中,游动孢子囊顶生,不脱落,卵形至椭圆形,无明显乳突,有内层出现象,长宽比大于1.6∶1;同宗配合,在利马豆培养基上单株培养产生大量卵孢子,藏卵器球形,雄器大多侧生;接种合丰35大豆品种后出现典型的大豆疫霉根腐病症状。r DNA-ITS序列分析表明,6株菌株与Gen Bank中大豆疫霉Phytophthora sojae的ITS序列同源性高达100%;菌株GY4、GY8、HY11、HY16、GZ10、GZ21的毒力公式分别为1b,2,3a,3b,4,5,6,7;1b,1d,3a,3b;1d,3a,3b,3c,4,5,6,7;2,3c,4,5,6,7;1b,3a,3c,5,8;3a,3b,5,6,7,8;属于6个不同的致病型。研究表明,这6株菌株均为大豆疫霉。     

一株疫病拮抗青霉P.st10菌株的抗菌活性及其对辣椒疫病的盆栽防效

筛选得到一株疫霉菌的拮抗青霉Penicillium striatisporumP.st10。该菌株强烈抑制疫霉菌及核盘菌的菌丝生长。无菌滤液抑制辣椒疫霉孢子囊的形成及孢子囊、游动孢子的萌发,且能杀死菌丝细胞。该菌株在辣椒根际有很强的定殖能力,有机肥对其定殖有增强作用,接种后40d在根际的青霉菌数量,青霉处理为0.76×104cfu/g,而青霉菌肥处理为2.55×104cfu/g。盆栽试验显示:处理7d后,土壤只接种辣椒疫霉对照发病率为93%;同时接种青霉培养滤液和辣椒疫霉处理为16%;接种青霉培养滤液、新鲜菌丝和辣椒疫霉处理为15%。     

链霉菌Sa-21对烟草黑胫病的防效及抑菌作用研究

烟草疫霉引起的烟草黑胫病,是烟草生产上的重要病害之一。为了明确链霉菌Sa-21防治烟草黑胫病的应用潜力,用盆栽试验测定了链霉菌Sa-21的生防效果,并用生长速率法等手段探讨了链霉菌Sa-21对烟草疫霉的抑菌作用。盆栽试验表明,链霉菌Sa-21菌株发酵液对苗期和成株期烟草黑胫病有较好的控制效果,最高防效可达98.39%。菌株Sa-21粗浸膏对烟草疫霉菌丝生长的抑菌中浓度为56.1 μg/mL,50 μg/mL的粗浸膏处理后可以降低50%的菌丝生物量。菌株Sa-21粗浸膏对烟草疫霉孢子囊的产生、游动孢子释放、休止孢萌发以及细胞膜透性均有抑制作用,100 μg/mL的粗浸膏基本能够完全抑制孢子囊的产生,并且对游动孢子释放的抑制率达50%以上;粗浸膏浓度为150 μg/mL时,对休止孢萌发的抑制率达94.35%;随着粗浸膏浓度增加,菌丝细胞膜的透性也会加大。研究结果表明,链霉菌Sa-21代谢物对烟草疫霉的生长繁殖产生抑制作用,并为链霉菌Sa-21生防菌剂的开发及其对烟草黑胫病的防治提供了理论依据。     

百合疫病病原菌的鉴定及培养基的筛选

从具典型症状的新鲜百合疫病植株茎基部病组织中分离到百合疫霉菌,根据其病原菌菌丝的形态、菌落特征,厚垣孢子、游动孢子囊和卵孢子的形态和大小,以及病原菌致病性测定,该病原菌鉴定为烟草疫霉Phytophthora nicotianae van Brede de Haan.供试的16种培养基中,病原菌在胡萝卜琼脂培养基(CaA)和辣椒琼脂培养基(PeA)上生长最好,生长速率分别为1.771和1.770mm/h.在常规培养条件下,病原菌不易产生厚垣孢子、游动孢子囊和卵孢子,在低温、皮氏溶液和土壤浸出液中分别诱导产生出大量厚垣孢子、游动孢子囊和卵孢子.     

白术疫霉拮抗链霉菌的筛选、鉴定及其抑菌效果

本文从河北省安国市白术疫病发生地块的健康白术植株的根际土壤中,分离筛选对白术疫霉Phytophthora sansomeana有拮抗作用的链霉菌菌株,旨在为白术疫霉病害的绿色防控提供有效的生防资源。采用稀释涂布法和平板对峙法,分离、筛选得到3株对白术疫霉拮抗效果较好的链霉菌菌株BZX-23、BZX-31、BZX-104。经16S rDNA序列分析,结合菌落形态特征、生理生化特征,将这3株拮抗链霉菌菌株分别鉴定为加利利链霉菌Streptomyces galilaeus、包比链霉菌S. bobili、苜蓿链霉菌S. alfalfae,其对白术疫霉的抑制作用均在60%以上。     

抗甲霜灵辣椒疫霉菌株的生物学特性

为了明确抗甲霜灵辣椒疫霉菌株的适生性,以田间自然产生及室内诱变获得的抗甲霜灵辣椒疫霉菌株为材料,测定了抗甲霜灵辣椒疫霉菌株的主要生物学性状。各菌株的游动孢子囊产生量为9.6×103～13.0×103个/mL,孢子囊释放率为61.3%～68.4%,游动孢子萌发率为35.3%～42.1%,适温条件下的菌丝平均生长速率约为10.28～11.55 mm/天;各菌株在含100μg/mL孔雀石绿的CA培养基上均不能生长,淀粉水解指数为0.18～0.95;接种辣椒、番茄、南瓜、西葫芦和茄子等果实所致病斑平均直径分别为34.11、18.47、30.19、37.78和32.73 mm。经方差分析,抗甲霜灵辣椒疫霉菌株的生物学性状与敏感菌株无显著差异,表明甲霜灵并未改变其生物学性状,辣椒疫霉对甲霜灵具有较高的抗性风险。     

寡雄腐霉GAQ1对辣椒疫病的防效及对辣椒的促生作用

为明确自主分离的生防菌株寡雄腐霉Pythium oligandrum GAQ1对辣椒疫病的生防效果及其防御机制,通过平板拮抗和盆栽防效试验测定寡雄腐霉菌株GAQ1对辣椒疫霉Phytophthora capsici菌丝的拮抗作用、对辣椒疫病的防效和对辣椒的促生效果,同时应用实时荧光定量PCR技术检测菌株GAQ1处理后辣椒抗性基因表达的变化。结果表明,寡雄腐霉菌株GAQ1的菌丝可以缠绕并吸附寄生在辣椒疫霉菌丝表面或穿入菌丝体内,使辣椒疫霉菌丝细胞死亡;菌株GAQ1发酵液处理辣椒离体叶片再接种辣椒疫霉后产生的病斑直径较对照组显著减少,离体防效为30.79%;接种菌株GAQ1菌丝球后,辣椒疫病的病情指数较对照组显著降低,盆栽防效达69.16%;经菌株GAQ1处理辣椒后可诱导相关抗性基因PR1、WRKY40、WRKY53、ACCO和GST的相对表达量出现不同程度的升高,说明菌株GAQ1可诱导辣椒植株产生不同程度的防御系统应答。菌株GAQ1对辣椒具有良好的促生效果,处理后第5周其株高、株重及根重分别较对照组提高10.11%、33.23%和24.72%,其叶片中叶绿素a、叶绿素b及类胡萝卜素的含量分...     

海南省胡椒瘟病病原鉴定及发生规律

采用形态特征观察、致病性测定及rDNA-ITS序列分析等方法,对海南省主产区胡椒瘟病病原进行鉴定,通过田间实地调查对胡椒瘟病的发生规律进行了研究。结果表明,该病病原为辣椒疫霉(Phytophthora capsici),月平均降雨量对该病的发生有着显著的影响。降雨量越大,持续降雨天数越多,发病率越高。     

津黑两地大白菜褐腐病病原菌鉴定及生物学特性的比较

采用形态特征观察、致病性测定及rDNA-ITS序列分析等方法对天津、黑龙江两地大白菜褐腐病的病原菌进行鉴定。结果表明,天津、黑龙江两地大白菜褐腐病的病原菌为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn),分离鉴定出TJ和DB两个菌株,分属立枯丝核菌AG-2融合群和AG-1融合群;DB菌株为一新菌株。两菌株菌丝生长最适温度均为25℃,最适pH为7,最适光照为12h。DB菌株菌丝生长速率快于TJ菌株;但TJ菌株先于DB菌株形成菌核,且形成量多。两菌株在碳源、氮源利用和菌核致死温度上也存在差异。     

广西黑皮冬瓜疫病的病原菌鉴定及其生物学特性

 Isolate PD1 of Phytophthora was isolated from diseased black pericarp wax gourd in Guangxi in 2005. The morphological and biological characters of the isolate were examined, and its sequence of ribosomal DNA-ITS was analyzed. The range of growth temperature of the isolate was 10-37℃ and the optimal one was 31℃. The pathogen was sensitive to 10 mg/kg of malachite green, and its ability for starch utilization was weak. A wide host range of the pathogen was confirmed by artificial inoculation. The sizes of sporangia were (37.5-71.7) μm×(20.8-47.5) μm (av. 55.0 μm×30.4 μm). Microcycle conidiation of the pathogen was observed. The pathogen was identified as Phytophthora drechsleri Tucker based on its morphological and biological characters as well as ribosomal DNA-ITS sequence.     

苍术黑斑病病原鉴定

 The pathogen causing dark leaf spot on Atractylodes lancea was isolated from diseased leaf. Based on morphological characteristics, pathogenicity test, the sequence of ribosomal DNA-ITS, the pathogen was identified as Alternaria tenuissima (Kunze) Wiltshire. This is the first report that this fungus infects A. lancea.     

川芎茵核病的症状及病原菌鉴定

 Symptoms of sclerotinia stem rot of Ligusticum chuanxiong were observed and the causal agent of the disease was identified. The results showed that the symptoms of this disease began with the formation of dark brown hygrophanous splotch on the basal leaves, followed by the appearance of dark brown circular spot on the basal stem. Finally, the whole plant stoped growing and died. White mycelium and/or sclerotia were formed under moisturized conditions. On PDA medium, the pathogen of this disease formed brown sclerotia with various shapes and 2-5 mm in diameter. The diameter of apothecia was 0.3-0.8 cm and the length of stipes was 2-8 cm. Asci were columniform in shape and (100-135)×9μm in size, each containing 8 ascospores sized by (6-12) μm×(3-7)μm. No asexual spore formation was observed. Based on the morphological characteristics and the sequence of ribosomal DNAITS, the pathogen was identified as Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary.     

朗伍德王莲腐霉叶腐病及病原鉴定

2009年,南京中山植物园王莲育苗池中的朗伍德王莲(Victoria‘Longwood Hybrid’)发生了叶片腐烂病。按照柯赫氏法则对其进行了病原物的分离、纯化和致病性测定,并对菌株进行了形态学和分子生物学鉴定。从发病部位稳定分离到形态一致的低等真菌;致病性测定结果表明,回接后发病株产生与自然侵染相同的症状,并重新分离到相同菌株。通过病原菌形态特征和核糖体rDNA ITS序列分析,病株分离物被鉴定为旋柄腐霉(Pythium helicoides)。这是国内外首次报道在王莲上分离出旋柄腐霉并证明其为王莲的致病菌。该病害被定名为王莲腐霉叶腐病。     

番茄叶片漆腐病病原菌鉴定

 A new leave disease of tomato (Lycopersicon esculentum Miller) was observed in polyethylene film-covered greenhouse in Beijing, China. This disease spreaded rapidly in the greenhouse and caused serious loss of the production of tomatoes. In the study, a fungal strain isolated from the lesion was confirmed to be pathogen for this new disease, and identified as Myrothecium roridum Tode ex Ft. based on the morphology, cultural characters on PDA plate and sequence analysis of ribosomal DNA-ITS. This is the first report of myrothecium leaf spot on tomato occurring in commercial greenhouse in China.     

广西水稻上嗜水小核菌的鉴定及系统发育研究

 从类似纹枯病的水稻病株上分离到一种在菌核形态上与纹枯病菌(Rhizoctonia solani)有明显差异的真菌,致病性测定结果表明该菌能侵染水稻、玉米和大豆。对该菌的显微形态、生物学特性以及核糖体DNA-ITS序列进行研究,结果表明该菌为嗜水小核菌(Sclerotium hydrophilum Sacc.)。病菌在30℃、pH为6~9条件下生长表现最佳,属硫胺素自养型菌;营养菌丝与立枯丝核菌相似,菌核球形或椭圆形,数量极多,其平均大小仅为386.4μm×420.7μm;该菌的核糖体DNA-ITS序列与GenBank中唯一一个嗜水小核菌(登录号为DQ875597)的同源性为99.5%,并且与大多数丝核菌(Rhizoctonia spp.)也有一定的同源性,病菌的28S rDNA-RFLP分析结果进一步说明了该菌在系统发育上与丝核菌类真菌具有较高的同源性。通过比较该菌和几种与水稻纹枯病相关丝核菌核糖体DNA-ITS序列的差异,设计了一对特异性引物PS-1和PS-2,能专一地从被该菌侵染的水稻感病组织中扩增出一段约550bp的DNA。