海藻糖对猪精液冷冻保存效果的影响

在传统的Tris-柠檬酸-葡萄糖稀释液基础上，分别添加25％、50％、75％、100％的海藻糖，研究不同浓度海藻糖对猪精液冷冻后精子质量的影响。结果表明，海藻糖相对于对照TCG稀释液能够显著改善和提高猪精液的冷冻效果，其最佳添加浓度为25％，冷冻-解冻后猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整性以及顶体完整率均显著提高（P〈0．05），分别达到41．38％、46．34％、44．56％、43．51％和64．09％。海藻糖可以明显抑制精子获能，获能处理前精子获能率仅为3．68％，而获能处理后达到41．82％，有利于促进精子获能。精液稀释液中甘油的适宜添加浓度为2％，海藻糖只有与甘油共同作用，才能在冷冻-解冻过程更加有效地保护精子。猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整率、顶体完整率等之间存在极显著的正相关关系（P〈0．01），而与获能处理前精子的获能率存在显著的负相关关系（P〈0．05）。     

海藻糖对民猪精液冷冻保存的影响

为研究海藻糖在民猪精液冷冻中的作用,获得最佳民猪精液冷冻液成分,本试验在BTS、Modena和Zorlesco 3种稀释液基础上添加0.15 mol/L海藻糖,及在Zorlesco稀释液中分别添加0 mol/L、0.1 mol/L、0.15 mol/L和0.2 mol/L的海藻糖,研究海藻糖在不同稀释液中及其不同浓度对冷冻的民猪精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位的影响。结果表明,在Zorlesco稀释液中添加0.15 mol/L海藻糖可明显提高民猪冷冻精子的质量,使精子活率、质膜完整性、顶体完整率和线粒体活性分别达到(44.0±2.4)%、(58.2±2.4)%、(53.2±2.1)%和(51.3±2.3)%,为各组最佳(P<0.05)。将0.15 mol/L海藻糖分别添加在BTS、Modena和Zorlesco3种稀释液中发现,其中在Zorlesco稀释液添加海藻糖效果优于其他两组(P<0.05)。但海藻糖对冷冻前精子的保护作用不明显(P>0.05)。因此,在Zorlesco稀释液中添加1.5 mol/L的海藻糖能够明显提高民猪精子冷冻后质量,是民猪冷冻保存的适宜保护液。     

水苏糖对猪精液冷冻保存效果的影响

自1956年Polge首次利用猪冷冻精液进行人工授精并获得仔猪至今,猪精液冷冻技术得到了发展,但与奶牛冷冻精液的应用相比,仍有很大差距。早在1930年,Milovanov等人对猪人工授精进行了试验,并提出最初的猪精液稀释剂(葡萄糖-硫酸盐和葡萄糖-酒石酸盐)。近年来,猪精液冷冻保存液中的非渗透性保护剂糖类物质引起了研究人员的高度关注,     

生物类黄酮和维生素C对猪精液冷冻效果的影响

为了研究冷冻稀释液中添加不同浓度的抗氧化剂生物类黄酮和维生素C对猪精液冷冻保存效果的影响,试验分别在冷冻稀释液中添加0,0.4,0.6,0.8,1.0 mg/mL的生物类黄酮和0,2,4,6,8 mg/mL的维生素C以及二者最佳配伍浓度的混合物,分别检测各试验组精液冷冻解冻后的活率、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活率等指标。结果表明:除了添加4,6 mg/mL维生素C顶体完整率与对照组相比差异不显著(P>0.05)外,添加0.4,0.6,0.8,1.0 mg/mL生物类黄酮或2,4,6,8 mg/mL维生素C精子活率、质膜完整率与对照组相比差异均显著(P<0.05),其中添加0.8 mg/mL生物类黄酮和6 mg/mL维生素C效果最好,但随着添加浓度的增加冷冻效果逐渐降低。说明在猪精液冷冻稀释液中联合添加生物类黄酮和维生素C,解冻后精液质量显著高于对照组(P<0.05)。     

低温保护剂对4℃保存猪精液活率的影响

本实验采用1%浓度的甘油、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲亚砜作为精液低温保护剂,通过精子降温-冷藏-复苏三个重要步骤,观察第7d保护剂对精子活率的影响。结果表明:在4℃下,乙二醇对精子活率保护作用最好,第7d仍能达到0.6以上;其次是甘油、二甲基乙酰胺和二甲亚砜组;空白对照组活率最低,低于0.2。     

绿原酸对猪精液冷冻保存效果的影响

为探究绿原酸对猪精液冷冻保存效果的影响,分别在TCG稀释液中添加不同浓度(15、30、50、80和100 pg/mL)的绿原酸,通过测定冷冻-解冻后精子的活率、顶体完整率、质膜完整率、DNA完整率、超氧化歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性来判定对保存效果的影响.结果表明,当添...     

二甲基甲酰胺对猪精液冷冻保存效果的影响

用二甲基甲酰胺(DMF)完全替代甘油,比较不同平衡时间和不同DMF添加量对猪精液冷冻保护效果的影响。结果表明,DMF能完全替代甘油,获得较好的冷冻保护效果。最佳平衡时间为90 min,解冻后精子活力为(44.57±0.72)%,显著高于对照组和其他组(P0.05)。当DMF添加量为5%时,冻后精子活力、活率、线粒体活性、顶体完整率和质膜完整率分别为(49.91±0.39)%(、46.51±0.26)%、(47.51±0.52)%(、49.84±0.56)%、(46.30±1.61)%,均显著高于2%、3%、6%DMF添加组(P0.05),但与4%DMF添加组相比,冻后精子活力、活率和质膜完整率差异不显著(P0.05)。本试验结果表明,DMF最适添加量为5%。     

猪精液液态保存研究

取浓分精液部分,用稍加修改的Ｂｕｅｔｓｃｈｗｉｌｅｒ、Ｂｕｅｔｓｃｈｗｉｌｅｒ加Ｈｅｐｅｓ、Ａｎｄｒｏｈｅｐ和Ａｎｄｒｏｈｅｐ加Ｈｅｐｅｓ４种稀释液在１０℃￣２０℃保存３￣７ｄ,取样,在３７℃水浴中温育０．５ｈ和２ｈ后,观察精子活率和顶体情况,Ｂｕｅｔｓｃｈｗｉｌｅｒ液精子活率分别为６９％和６１％,顶体正常情况４种稀释液均较高,Ｂｕｅｔｓｃｈｗｉｌｅｒ和Ａｕｄｒｏｈｅｐ差异不显著,经１０头经产母猪     

抗氧化剂对猪精液冷冻保存效果的影响

目前,猪的人工授精以鲜精和常温保存的液态精液为主,冷冻精液在人工授精中所占的比例不足1%,由于解冻后精子复苏率较低、异常精子多、受胎率低等原因,在生产上猪的精液冷冻与牛的精液冷冻相比尚未得到普遍推广、应用。精子的冷冻处理在畜牧业上是一个重要且具有特殊优势的操作过程。提高精子冷冻技术水平,需要对配子的生理学知识和精子收集、处理过程的生化改变有更深入的了解,这些     

含海藻糖稀释剂增补EDTA对猪精子冷冻能力的影响

探讨了猪精子冷冻保存液中添加不同浓度的海藻糖(trehalose)和EDTA(0.05mol/L trehalose、0.05mol/L trehalose 2.0mmol/LEDTA、0.05mol/L trehalose 5.0mmol/L EDTA、0.1mol/L trehalose、0.1mol/L tre-halose 2.0mmol/LEDTA、0.1mol/L trehalose 5.0mmol/LEDTA)对猪精子冷冻效果的影响。结果表明,精子冷冻解冻后,0.1mol/Ltrehalose 2mmol/LEDTA混合处理组精子活力显著高于0.1mol/Ltrehalose处理组(P<0.05),0.1mol/Ltrehalose和5.0mmol/LEDTA混合处理组的精子生存率最高。0.1mol/Ltrehalose和2~5mmol/LEDTA混合处理组精子顶体完整率显著高于trehalose处理组(P<0.05),0.05~0.1mol/Ltrehalose和5.0mmol/LEDTA混合处理组低渗膨胀精子率显著高于trehalose处理组(P<0.05)。trehalose和EDTA混合处理组精子内活性氧(ROS)含量总体上高于trehalose处理组(P<0.05)。这些结果显示稀释剂中trehalose和EDTA增补能改善精液特性,但不能抑制精子内ROS的发生。     

海藻糖、二甲乙酰胺对公猪精液冷冻保存效果的研究

采用5% 二甲乙酰胺(DMA)(V/V)完全替代甘油,比较乳糖、海藻糖对精液冷冻保存效果的影响。结果表明,海藻糖显著提高了冷冻——解冻后精子成活力(49.32%±1.52%)与顶体完整性 (47.33%±1.16%)(P<0.05)。然后利用海藻糖替代乳糖,评价不同浓度的DMA对公猪精液冷冻保存的影响。结果表明,当DMA添加量为4%时,解冻后精子活率、成活力、顶体完整率分别为(45.17±0.56)%、(50.33±0.67)%、(48.30±1.44)%,均显著高于3% DMA、6% DMA添加组(P<0.05),精子活率显著高于5% DMA添加组(P<0.05),但精子成活力、顶体完整性与其差异不显著(P>0.05)。因此,当利用海藻糖作为冷冻保存基础稀释液,DMA最适添加量为4%。     

冷冻保存对公猪精子功能的影响

试验旨在探究公猪精液冷冻保存对其精子功能的影响。取长白猪的鲜精和优质冻精,用精子分析仪检测精子的运动能力,台盼蓝染色检测精子活率,体外受精（IVF）试验检测卵裂率与囊胚率,采用不同功能检测试剂盒检测冻精和鲜精的顶体完整率、线粒体膜通道孔（MPTP）活性、线粒体膜电位（MMP）、线粒体活性、线粒体氧化应激活性氧（ROS）以及精子DNA完整性,实时荧光定量PCR检测弱精子症相关蛋白基因SMCP、TEKT3、DNAH1、TCTE3的表达。结果表明,与猪鲜精相比,猪冻精的活率及活力均显著降低（P<0.05）,冻精的顶体完整率也明显下降（P<0.05）;冻精的卵裂率和囊胚率显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体功能分析结果显示,冻精的MPTP相对荧光单位值（RFU）、线粒体膜电位荧光比率以及线粒体活性光密度（OD）值均显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体ROS检测发现,冻精的RFU值显著高于鲜精（P<0.05）;精子DNA完整性检测结果显示,冻精拖尾率显著高于鲜精（P<0.05）;而弱精子症相关蛋白基因的表达与鲜精相比,差异不显著（P>0.05）。综上所述,冷冻导致猪精子活率、活力、线粒体功能、DNA完整性下降,最终使得冷冻精液精子的受精能力降低。     

The Cryoprotective Effect of Trehalose Supplementation on Boar Spermatozoa Quality

In order to improve boar sperm quality during frozen-thawed process, the influence of the presence of trehalose on success of cryopreservation of boar sperm were investigated. We evaluated freeze-thawing tolerance of boar spermatozoa in a base cooling extender with the addition of different trehalose concentrations (0, 25, 50, 100 and 200 m m ), and try to determine the optimum concentration of trehalose. We chose sperm motility, mitochondrial activity, acrosome integrity and membrane integrity as parameters to evaluate cryopreservation capacity of boar spermatozoa. We obtained the best results for 100 m m trehalose-supplemented extenders, with values of 49.89% for motility, 44.69% for mitochondrial activity, 66.52% for acrosome integrity and 44.61% for membrane integrity, while freeze-thawing tolerance diminished significantly for 200 . The synergic effect of trehalose and glycerol resulted in better cryosurvival of boar spermatozoa than that of a single cryoprotectant. In conclusion, when trehalose-supplementation was added up to 100 m m , trehalose confers a greater cryoprotective capacity to the extender, and the sperm motility, mitochondrial activity, membrane integrity and acrosome integrity parameters were significantly improved during frozen-thawed process.     

聚乙烯吡咯烷酮对公猪精液冷冻的影响

试验旨在评价聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone,PVP）对公猪精液冷冻的影响。试验分为5组,分别为对照组（不添加PVP）和PVP处理组（在冷冻基础液中分别加入0.25%、0.50%、1.00%、2.00% PVP）。采用手握法采集松辽黑猪精液,用5种冷冻基础液稀释,在25 ℃平衡1 h,17 ℃平衡2 h,4 ℃平衡3 h后灌装于0.5 mL细管中,在液氮上方3 cm处熏蒸10 min,保存在液氮罐中30 d后进行检测。样本解冻后分别检测精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、DNA完整性、过氧化氢酶（catalase,CAT）活性、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase,GSH-Px）活性、活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平及丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平。结果显示,与对照组相比,冷冻基础液中添加0.50% PVP显著提高冻融后精子的活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、CAT活性、SOD活性、GSH-Px活性（P<0.05）,显著降低精子ROS和MDA水平（P<0.05）;与对照组相比,添加PVP有利于提高DNA完整性,但差异不显著（P>0.05）。因此,猪精液冷冻基础液中添加PVP可改善冻融后精子质量,添加0.50%效果最佳。     

芝麻酚对猪精液冷冻保存效果的影响

为了探究芝麻酚对猪精液冷冻保存效果的影响,用手握法采集成年杜洛克公猪精液,预处理后添加不同浓度芝麻酚(0,0.05,0.10,0.15,0.20和0.25g/L)的冷冻稀释液进行稀释,冷冻-解冻后检测猪精子活率、质膜完整性(低渗肿胀试验)、线粒体活性、顶体完整性、DNA完整性以及超氧化歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性等。结果显示:当芝麻酚添加浓度为0.20g/L时,解冻后精子活率、线粒体活性、质膜完整率和顶体完整率为最高,相比较于对照组,分别提高了12.67%、19.07%、18.78%和14.09%(P0.05);MDA含量最低为2.04nmol/mL(P0.05);SOD和GSH-Px酶活最高为73.04U/mL和237.59U/I(P0.05)。当芝麻酚添加浓度为0.25g/L时,DNA完整性最高为72.46%(P0.05)。当芝麻酚添加浓度为0.15g/L时,CAT酶活最高为3.44U/mL(P0.05)。结果表明:与对照组相比较,在猪精液冷冻稀释液中添加适当浓度的芝麻酚能显著提高解冻后猪精子活率、功能完整性和抗氧化能力(P0.05),且当芝麻酚的浓度为0.2g/L时对猪精子冷冻保存效果最好。研究结果表明,芝麻酚作为一种天然抗氧化剂,对猪精子冷冻保存具有良好的效果。     

高压均质鸡蛋卵黄对猪冷冻精子凋亡的影响

为探究高压均质鸡蛋卵黄对猪冷冻精子凋亡的影响,本试验采集5头健康状态良好的杜洛克公猪精液,以普通鸡蛋卵黄+Tris柠檬酸葡萄糖(TCG)冷冻基础稀释液为对照组,以添加高压均质处理的鸡蛋卵黄+Tris柠檬酸-葡萄糖(TCG)冷冻基础稀释液为试验组;精液冷冻-解冻后观察精子活力、DNA完整性、线粒体膜电位变化、细胞凋亡率、...     

影响精液冷冻保存和人工授精效果的因素

本文阐述了精液冷冻保存的细胞反应原理,指出冷冻保护剂甘油对精液保存具有利弊效应,提出精子膜脂组成的差异使得不同品种的精子对冷冻损伤的易感性不同。雌性生殖道解剖结构的品种差异,精子形态,精子运行机制的细微差异,人工授精时间及精子的运行能力,采精方式等因素对人工授精的效果有决定性作用。研究精子质膜的生物学特性可解决低活力精子的问题,然而这并不能解决冷冻后精子质量的个体差异。对精细胞基因组的研究可以找出这些个体的遗传差异。因此,冷冻精子和精原细胞(用于细胞外注射)的差异已经成为完整基因组问题。     

不同冷冻保护剂对犬精子冻存的影响

本试验通过对比冷冻保护剂和冷冻程序,优化犬精液冷冻保存方法,比较了不同甘油、乙二醇浓度、不同平衡时间对犬精子冷冻复苏率及精子顶体完整率的影响。结果发现,甘油作为冷冻保护剂时,其对精液冷冻保存后的效果明显优于乙二醇,当甘油浓度为4%时,平均冷冻复苏率最高;冷冻平衡时间为1 h最佳。因此,犬精液在冷冻保存时,甘油浓度为4%,平衡60 min,可获得平均39.21%±0.013%的冷冻复苏率,且比较稳定。