猪瘟抗体ELISA效价与保护力的相关性

对不同猪瘟抗体水平的6个试验组的24头猪及4头对照组猪用已建立的“ELISA间接法检测猪瘟抗体”法进行血清猪瘟抗体ELISA效价的测定,用石门系猪瘟强毒攻击受试猪测定保护力.研究结果表明,血清猪瘟抗体ELISA效价在1:30以上多数能够抵御猪瘟强毒的攻击.该临界线的确定为“ELISA间接法检测猪瘟抗体”技术在猪群免疫监测及防疫注射质量考核中的推广应用提供了依据.     

洛美沙星鼠源多克隆抗体的制备

用合成的LMLX-BSA偶联物免疫小鼠,ELISA方法检测抗体效价,制备洛美沙星(LMLX)多克隆抗体。结果表明:5只动物中4只产生了高效价的抗体,1只产生的效价较低。用合成的LMLX-BSA偶联物免疫小鼠获得了高效价的多克隆抗体。     

埋植抗原缓释剂ARD后牛乳特异性抗体效价评价

对奶牛埋植抗原缓释剂ARD(antigen release devise)生产免疫乳的高效性进行评价,随机选择40头成年健康荷斯坦奶牛,试验组20头奶牛于右侧髋内淋巴结处埋植3种释放时间不同的ARD,分别在埋植当天、14 d和28 d释放抗原,通过ELISA检测血清和乳清中特异性抗体的效价及消长规律。研究表明:埋植ARD免疫后,奶牛血清中特异性抗体滴定效价均明显升高,ELISA滴定效价平均为2×106。埋植后9 d便可检测到乳清中特异性抗体,其应答规律与3种ARD的释放一致,ELISA滴定效价平均可以达到4.1×104,可以达到2~3 d初乳的水平。试验结果说明了ARD生产免疫乳的高效性;通过比较血清和乳清中特异性抗体含量变化,发现在血清效价相同的情况下,奶牛个体对IgG的转运存在差异;ARD的缓释技术较为精确,缓释误差仅为2~3 d。     

生猪伪狂犬病毒gB抗体与中和抗体的相关性分析

为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。     

鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用

为建立鸭血管紧张素转换酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)定量检测方法,首先利用纯化的鸭ACE2重组蛋白,成功制备了兔抗鸭ACE2多克隆抗体,间接ELISA法确定抗体效价为1∶800;然后利用制备的鼠抗鸭ACE2多克隆抗体作为捕获抗体,通过戊二醛二步法对兔抗鸭ACE2多克隆抗体进行HRP标记,并将HRP标记的兔抗鸭ACE2多克隆抗体作为检测抗体,纯化获得的鸭ACE2重组蛋白作为标准品,建立鸭ACE2双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对抗体浓度、捕获抗体最适包被条件、孵育条件、封闭条件及显色条件等进行优化;通过Western blot法检测正常白鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织间ACE2表达的变化;利用RT-qPCR方法检测正常鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织中ACE2基因的相对表达量。结果表明：所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测浓度为5 ng·mL^-1,最佳线性范围为25～1 600 ng·mL     

基层动物检疫工作存在的问题及对策

正近几年,随着我国畜牧经济的发展,猪、牛、羊、鸡等多种动物的相关疾病不断的发生与流行,导致了猪、牛、羊、鸡等多种动物的相关疾病大流行,严重影响着我国畜牧养殖业的发展。因此,猪、牛、羊、鸡等多种动物的相关疾病检疫成为了主要任务。基层动物检疫成为猪、牛、羊、鸡等多种动物过程中主要的环节。由于动物的相关性传染性疾病对不同动物具有很高的感染率和死亡率,当动物感染了相关传染性疾病后,会造成严重的经济损失影响,基层动物检疫成为检测相关疾病     

双峰驼血清IgG纯化及其抗血清制备

纯化双峰驼血清IgG并制备兔抗骆驼IgG抗血清,为制备针对特定蛋白的特异性纳米抗体储备材料,利用Protein G纯化双峰驼血清IgG,并用纯化的IgG免疫成年家兔后采用ELISA方法检测抗血清效价;采用间接ELISA方法,利用制备的抗血清检测PCV2 Cap蛋白免疫双峰驼血清中抗Cap蛋白的抗体水平,Western blot技术检测制备的抗血清与从噬菌体纳米抗体库中筛选到的针对不同蛋白的纳米抗体的反应性,以确定抗血清的适用性。结果显示,从双峰驼血清中纯化到骆驼IgG,SDS-PAGE分析显示纯化的骆驼IgG包括3条链,约50ku的传统重链IgG1,约43ku缺失CH1的重链IgG3和约30ku的传统轻链;3次免疫后兔抗骆驼IgG抗血清效价达1∶512 000;应用制备的抗血清检测PCV2 Cap蛋白免疫5次的双峰驼血清中抗Cap蛋白的抗体效价达1∶1 024 000;制备的抗血清可以与原核表达的针对不同病毒蛋白的纳米抗体反应;说明制备的兔抗骆驼IgG抗血清可用于免疫骆驼血清和表达的纳米抗体的检测。研究结果为目标蛋白免疫骆驼后抗体效价检测及纳米抗体文库构建提供关键材料。     

罗非鱼无乳链球菌双抗体夹心ELISA检测方法的建立

通过杂交瘤技术制备抗罗非鱼无乳链球菌SIP融合蛋白单克隆抗体2株:1C9和6G5,均为IgM,效价分别为10-5和10-4,间接ELISA结果显示单克隆抗体1C9对无乳链球菌具有良好的检测特异性和灵敏性;同时制备兔抗罗非鱼无乳链球菌SIP融合蛋白多克隆抗体及其HRP酶标记物,兔抗SIP蛋白多克隆抗体的效价为10-6,经标记的抗体效价为10-4,最佳抗体工作浓度为1:400.建立双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测罗非鱼无乳链球菌的方法,具良好的特异性,检测灵敏度为0.85×106 CFU· mL-1.双抗体夹心ELISA检测实际应用结果与双重PCR检测比较,相对符合率为98.33％,检测结果可靠性高.     

禽流感血凝抑制试验的影响因素分析

血凝抑制试验是检测禽流感抗体效价的一种常用方法,具有简便、快速、灵敏、准确等特点,被区县级动物疫病预防控制中心化验室所广泛应用。但由于试验中不规范的操作和细节注意不够,从而导致不正确的检测结果,而影响试验的准确性。     

溶葡萄球菌素的原核表达及多克隆抗体的制备

【目的】制备溶葡萄球菌素(lys)的多克隆抗体,为检测其在转基因细胞、胚胎及转基因动物中的表达奠定基础。【方法】以含有lys基因成熟肽序列的PEPB质粒为模板,经PCR扩增,构建pET28a-Ly原核表达载体,并以其转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达并纯化蛋白后,常规免疫家兔,制备多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性。【结果】构建的原核表达载体pET28a-Ly经IPTG诱导6h后即可高效表达lys蛋白,蛋白经纯化后,其质量浓度可达到3.05mg/mL;抗体经ELISA检测,效价为1∶27 000,West-ern blot检测结果表明,抗体的特异性较好。【结论】成功构建了lys原核表达载体,所制备的lys多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性。     

猪鼻支原体间接血凝及EUSA检测方法的初步建立

本试验旨在建立猪鼻支原体间接血凝及ELISA检测方法,为猪鼻支原体的血清学诊断、流行病学调查及防控提供技术基础。利用Mhv全茵及P37蛋白为抗原．通过间接血凝及ELISA方法检测抗体,初步建立猪鼻支原体血清学检测方法。结果表明：利用Mhv全茵抗原建立的间接血凝法检测猪鼻支原体阳性血清具有较高的抗体效价。但与猪肺炎支原体阳性血清存在严重的交叉反应：这些结果提示Mhv全茵间接血凝及全茼包被ELISA方法检测Mhp血清与Mhp存在严重交叉反应,而P37包被ELISA不存在交叉反应。     

禽流感血凝抑制试验(HI)的影响因素分析

血凝抑制试验是检测禽流感抗体效价的一种常用方法,具有简便、快速、灵敏、准确等特点,被区县级动物疫病预防控制中心化验室所广泛应用。但由于试验中不规范的操作和细节注意不够,从而导致不正确的检测结果,而影响试验的准确性。     

猪鼻支原体间接血凝及EUSA检测方法的初步建立

本试验旨在建立猪鼻支原体间接血凝及ELISA检测方法,为猪鼻支原体的血清学诊断、流行病学调查及防控提供技术基础。利用Mhv全茵及P37蛋白为抗原．通过间接血凝及ELISA方法检测抗体,初步建立猪鼻支原体血清学检测方法。结果表明：利用Mhv全茵抗原建立的间接血凝法检测猪鼻支原体阳性血清具有较高的抗体效价。但与猪肺炎支原体阳性血清存在严重的交叉反应：这些结果提示Mhv全茵间接血凝及全茼包被ELISA方法检测Mhp血清与Mhp存在严重交叉反应,而P37包被ELISA不存在交叉反应。     

特异性RBBP10多克隆抗体的制备

目的: 制备RBBP10多克隆抗体.方法:用纯化的RBBP10蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,间接ELISA法检测抗体效价,stern印迹检测抗体特异性.结果:抗血清效价可达1:1000以上.结论:经Western印迹检测证明抗体效价高,特异性强,此抗体可通过免疫组化方法检测RBBP10蛋白在各种肿瘤中的表达,具有一定的应用价值.     

达氟沙星抗体的制备

为了制备达氟沙星(DFLX)多克隆抗体,使用合成的DFLX-BSA偶联物免疫獭兔,用ELISA方法检测抗血清效价.结果显示,2只动物中1只产生了高效价的抗血清,另1只产生的效价较低.得出结论,用合成的DFLX-BSA偶联物免疫兔子获得了高效价的抗血清.     

解析2例猪瘟免疫失败的原因

疫苗接种是预防传染性疾病的有效方法之一,在所有的预防措施中,免疫接种在畜禽传染疾病的防控中占据重要位置。但是免疫接种后是否获得免疫抗体,不但取决于接种时疫苗的质量,接种方法、免疫剂量、免疫程序等外部环境因素的影响,还取决于畜禽机体对疫苗的反应能力的内部因素。在实验室工作中经常遇到有些养殖场虽然打过疫苗,但是监测抗体时,抗体的效价却非常低的情况,这只能说明一个问题,就是免疫失败。本文就2例失败案例分析讨论,以期指导实际。     

浅析抗体检测技术在动物疫病预防中的应用

<正>前言随着我国居民生活水平的提升,人们对养殖业发展提出了较高要求,其中动物疫病日渐成为影响畜牧产品质量和人体健康的关键因素,因此在畜牧业经营过程中,相关部门必须开展有效的疫病防控工作,为社会提供安全健康的食物来源。目前,在动物疫病防控工作中,抗体检测技术发挥着重要的作用,有利于确保疫病诊断的准确性,并合理控制病情发展,以此确保防控工作的科学性与合理性。1.抗体检测技术基本情况一般而言,抗体检测是一种在体外实施的抗原体反应,     

动物疫病实验室结果准确性的因素探讨

开展动物疫病实验室检测工作的目的是能通过科学的实验数据准确认识各种动物疫病的影响因素,为动物养殖及保护提供重要的科学依据。动物疫病实验室检测属于兽医实验室重要工作内容,但在动物疫病检验工作实施过程中,检测结果受多种因素影响,导致动物疫病实验室检测结果不准确,所检测出的信息数据不具科学性。对此,还需引起高度重视,把工作重心调整到动物疫病实验室检测结果准确性影响因素方面,依据具体现象掌握影响因素,明确影响因素后给出相应的解决措施,从而确保动物疫病实验室检测结果的准确性。本文旨在分析兽医实验室中影响检测结果的因素,提出相关应对策略。     

影响动物免疫效果主要因素分析及对策研究

通过对陕南地区某县农村乡镇2009-2011年动物主要疫病免疫抗体抽样检测结果的调查分析,认为免疫接种剂量不足,疫苗保存不当、免疫程序不规范、多种疫苗混合接种,以及抗体检测采样时间不同都是影响动物免疫效果及检测结果的主要因素;提出了加强基层设施建设、建立健全免疫反应补偿机制、科学制定防疫方案、严格规范防疫程序、开展疫苗免疫效价试验、加强防疫工作科学考核评价和技术队伍建设等对策,以提高动物免疫效果,预防疫病发生,促进畜牧业发展和提高经济效益。     

抗嗜水气单胞菌卵黄抗体的制备及保护效果

从发病的暗纹东方纯体内分离、鉴定了一株致病性嗜水气单胞菌,测定其毒力,命名为NT-1.以NT-1为抗原,免疫28周龄的罗曼蛋鸡,用水稀释脱脂处理,聚乙二醇(PEG)一步法制备高效价的卵黄抗体.微量凝集试验、ELISA检测其效价及特异性:不同浓度卵黄抗体的粗提液与NT-1菌液混合注射ICR小鼠,检测特异性卵黄抗体的抑菌效果.结果表明,微量凝集试验测得的特异性抗体效价达1:16以上,ELISA效价达1:12 800以上;高效价、特异性的卵黄抗体可维持90 d,特异性卵黄抗体EUSA效价达1: 640时对感染NT-1的ICR小鼠的保护率达到了100%.