鸡胚源沙门菌的耐药表型与耐药基因的分析

为了解河南省某父母代麻鸡场死胚中沙门菌的耐药状况以及耐药机制,本试验对分离自291个孵化后期的死胚中的25株沙门菌进行血清分型,并采用K-B法进行了21种抗菌药物的耐药性检测,采用PCR法检测5类共37种耐药基因的携带情况。结果:25株分离株分属6个血清型,且对亚胺培南、美罗培南、氯霉素、呋喃妥因、多黏菌素B敏感,对氨苄西林、头孢曲松、磺胺异恶唑、头孢噻呋、氨曲南的耐药率在32%~48%之间,且有56%(14/25)的菌株存在多重耐药现象,最高可耐14种药物;共检出13种耐药基因;且5类耐药基因与耐药表型的符合率超过60%,其中四环素类的符合率为100%。提示该种鸡场中鸡胚源性沙门菌的血清型复杂、耐药率高、多重耐药情况严重,且耐药基因广泛存在于耐药菌株中。     

种鸡场孵化死胚中沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解死亡鸡胚中沙门菌的感染状况,采集351枚孵化后期死胚进行沙门菌分离鉴定,并采用K-B法进行了20种抗菌药物的耐药表型检测,采用PCR法对6类共50种耐药基因分布进行检测。结果显示,共分离到62株沙门菌,包括6个血清型。分离菌株对磺胺异噁唑耐药情况较严重,耐药率为37.1%,对其余19种药物耐药率均在26%以下,其中对亚胺培南、美罗培南、多黏菌素E、氯霉素、呋喃妥因敏感,且有16.1%(10/62)的菌株存在多重耐药现象,最高可耐14种抗生素;此外,PCR共扩增到18种耐药基因,且6类耐药基因的检出情况与耐药表型的符合率均在60%以上,其中喹诺酮类、四环素类的符合率为100%。结果表明,该种鸡场中鸡胚源性沙门菌的血清型复杂、多重耐药情况严重,且耐药基因普遍存在于耐药菌株中,药敏试验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性。     

河南地区麻种鸡死胚中沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解麻鸡死胚中沙门菌的感染和耐药状况,本研究于2014年9月～2015年8月采集河南省郑州、平顶山、漯河、商丘地区4个父母代麻鸡场孵化场死胚样品,进行沙门菌分离、血清型鉴定,并用纸片法和PCR方法对菌株耐药表型及相关耐药基因进行检测。结果显示,695份死胚样品共分离到263株沙门菌,分离率为37.8%。包括9种血清型:鸡白痢沙门菌203株、爱丁堡沙门菌17株、汤卜逊沙门菌14株、塞罗沙门菌13株、田纳西沙门菌9株、吉姆皮斯Ⅱ沙门菌4株、加瓦尼沙门菌1株、泰米尔纳德沙门菌1株、恩德培Ⅱ沙门菌1株。其中有两个鸡场样品禽副伤寒沙门菌分离率超过鸡白痢沙门菌。263株沙门菌对磺胺异噁唑(69.6%,183/263)、氨苄西林(40.7%,107/263)、四环素(35.7%,94/263)、土霉素(35.4%,93/263)、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(34.2%,90/263)的耐药较严重,且26.2%(69/263)的菌株表现为多重耐药;所有分离株对多粘菌素E、亚胺培南、美罗培南敏感;不同种鸡场来源的沙门菌耐药情况差异较大;用PCR方法共扩增到15种耐药基因,且检出的5类耐药基因与耐药表型的符合率在81.6%以上。本研究结果为制订种鸡群沙门菌病综合防控措施提供了参考。     

55株鸡胚源沙门菌的耐药性分析及ESBLs基因检测

为了解河南省某父母代麻鸡场死胚中沙门菌的耐药情况及ESBL基因流行特征,采集孵化后期死胚120份,通过PCR鉴定及血清分型鉴定,获得了55株沙门菌,包括6种血清型。采用K-B纸片法和双纸片协同测试法进行了药物敏感性及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,并运用PCR法对ESBLs阳性菌株进行了12种动物源沙门菌常见ESBLs基因的检测。结果显示,55株分离株对磺胺异恶唑(76.36%)、氨苄西林(65.45%)、磺胺甲恶唑(54.55%)的耐药情况较严重,对美罗培南、亚胺培南敏感;此外,产ESBLs的菌株有16株,阳性率为29.09%,PCR只检出TEM(100%)一种ESBLs基因,其余11种均未检出;ESBLs阳性菌株的耐药情况明显严重于ESBLs阴性菌株,且多表现为多重耐药。表明种鸡场感染的沙门菌血清型复杂、产ESBLs菌株阳性率较高,多重耐药现象与超广谱β-内酰胺酶密切相关。     

广西钦州地区黄羽肉鸡场种鸡死胚沙门菌分离鉴定与耐药性分析

为了解广西部分地区黄羽肉鸡死胚中沙门菌的感染与耐药情况,于2018～2019年间分批次由广西钦州地区多个鸡场采集麻鸡死胚共计406个进行沙门菌分离、血清型鉴定。随后利用纸片法对所分离沙门菌的耐药性进行分析,并通过PCR方法对相应耐药基因进行检测。最终由406个死胚中分离164株沙门菌,且均为鸡白痢沙门菌。所分离菌株对磺胺异恶唑、四环素等抗生素具有较高的耐药性,且呈现严重的多重耐药现象。通过PCR方法共检测出16种耐药基因。研究结果为当地种鸡群鸡白痢净化及沙门菌病综合防治提供了有力参考。     

山东济宁地区百日鸡群沙门菌的鉴定及耐药特性研究

为评估山东地方品种百日鸡沙门菌的耐药基因、耐药表型特点以及不同血清型沙门菌间的克隆关系等,本研究对采自山东济宁禽场90枚18胚龄百日鸡死胚进行细菌的分离鉴定,并采用血清诊断试剂盒测定分离菌的血清型;采用PCR方法进行多位点序列分型(MLST)、耐药基因和Ⅰ类整合子的检测;利用K-B法测定其耐药表型.结果显示,90枚死胚...     

银川地区鸡源沙门菌血清型鉴定及耐药性分析

为了解银川地区鸡源沙门菌的耐药性及优势血清型,采用药敏纸片扩散法测定了69株鸡源沙门菌对常用12种抗菌药物的耐药率,同时采用玻板凝集法对沙门菌进行了血清型鉴定。结果显示,所有菌株对12种抗菌药物均产生了不同程度的耐药性,其中对萘啶酸、复方新诺明、氨苄西林、头孢唑啉的耐药率较高;对美洛培南、环丙沙星的耐药菌株比率较低;多重耐药情况比较严重,部分菌株同时具有对12种抗菌药物的耐药性,具有5重耐药能力的菌株占21.74%。分离到的菌株中主要血清型为鸡白痢沙门菌(S.gallinarum),其次为鼠伤寒沙门菌(S.typhimurium)和伤寒沙门菌(S.typhi)。     

河南省鸡源沙门菌新近流行株的分离鉴定及其耐药性分析

旨在了解河南省鸡沙门菌临床分离株血清型分布及药物敏感情况。从河南省各地区养鸡场共采集了沙门菌可疑病料617份,按常规方法进行分离,经生化、PCR及血清型鉴定,共分离出98株鸡源沙门菌,其中血清型定型82株,主要为肠炎沙门菌(62.24%)、鸡白痢沙门菌(18.37%)。进一步Kindy-Bauer(KB)法检测分离菌株对22种药物敏感性表明,所有分离菌株对多粘菌素B、阿米卡星、庆大霉素、萘啶酸较为敏感,对阿齐霉素和氨苄西林耐药率在60.00%～70.00%之间,对红霉素和青霉素表现为极高的耐药性,耐药率高达100.00%。三重以上耐药菌株高达96.94%,七耐以上的菌株为56.12%,耐药最多的菌株可耐18种抗生素。由此可见,河南省禽类沙门菌的感染流行主要以肠炎沙门菌和鸡白痢沙门菌为主,多重耐药十分严重,严重影响了禽类沙门菌病的诊治与预防。     

河南省种鸡场鸡白痢沙门菌的耐药性分析

为调查河南省种鸡场鸡白痢沙门菌耐药状况,选用20种抗菌药物,采用K-B纸片法对2014-2015年分离自6个地区12个规模化种鸡场的395株鸡白痢沙门菌的耐药性进行检测,并运用PCR法对37种相关耐药基因进行检测。结果显示:分离菌株对磺胺异噁唑(74. 18%)、氨苄西林(50. 89%)、四环素(44. 56%)、土霉素(43. 05%)、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(17. 97%)耐药较严重;且27. 84%(110/395)的菌株表现为多重耐药,最严重的可耐14种药物; 88. 19%的菌株对环丙沙星表现中介;分离菌株耐药率与耐药谱在不同地区或同一地区不同场间存在差异;共检测到12种耐药基因,且耐药基因与耐药表型的符合率在83%以上。表明河南省种鸡场鸡白痢沙门菌对青霉素类、四环素类、磺胺类药物耐药普遍,多重耐药较严重,耐药基因广泛存在于耐药菌株中。     

腹泻仔猪肠道沙门氏菌耐药性研究

为了解贵州省规模化养殖场腹泻仔猪肠道沙门菌耐药表型与耐药基因型相关性,本试验采集了贵州省7个规模化养猪场的腹泻仔猪肠道样本进行沙门菌分离鉴定,并对分离的沙门菌用药敏纸片法进行耐药表型分析,利用PCR方法对分离菌进行耐药基因扩增。结果显示:共分离鉴定沙门菌21株;药敏试验表明所鉴定的沙门菌对抗菌药物的耐药率从高到低依次是卡那霉素、磺胺异口恶唑和诺氟沙星等,且均为多重耐药株,耐药种类达8种以上;耐药基因与耐药表型分析结果显示分离的沙门菌β-内酰胺类耐药基因与耐药表型符合率高达100%,喹诺酮耐药基因与耐药表型符合率为62.5%,氨基糖苷耐药基因符合率为73.3%,磺胺类耐药基因符合率81.8%。研究结果对合理使用药物控制仔猪沙门菌感染提供了理论依据。     

黄羽肉种鸡场死胚中鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解广东某黄羽肉种鸡场鸡白痢沙门菌的感染及耐药情况,随机采集该场孵化至21日胚龄时的117个死亡胚进行鸡白痢沙门菌分离,通过生化鉴定、PCR、血清分型及rfbS基因序列测定等鉴定鸡白痢沙门菌分离株,并采用琼脂稀释法测定分离株对16种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)。结果显示:共分离鉴定出18株鸡白痢沙门菌,分离率为15.38%;18个鸡白痢沙门菌分离株对头孢噻肟、头孢吡肟、亚胺培南、多黏菌素B、庆大霉素、阿米卡星、氟苯尼考、链霉素均敏感,而对磺胺异吡恶唑(100%)、萘啶酸(72.2%)、氨苄西林(55.6%)、四环素(44.4%)耐药率较高,且分离株均有多重耐药性。研究表明该黄羽肉种鸡场已受到鸡白痢沙门菌感染的困扰,有必要尽快启动鸡白痢沙门菌防控与净化。     

鸡源印第安纳沙门菌多重耐药性分析

采集山东不同地区鸡源沙门菌,根据Kauffmann-White方法测定分离株血清型,采用肉汤微量稀释法测试分离株对16种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测10种耐药基因,分析耐药表型和耐药基因之间的关系。结果显示：共鉴定出沙门菌80株,其中印第安纳沙门菌60株。药敏试验证实：60株印第安纳沙门菌对阿莫西林-克拉维酸、头孢唑啉、多黏菌素、氨苄西林、多西环素和甲氧苄啶等16种抗菌药物普遍耐药。88.33%菌株多重耐药分布在12~15耐,未发现3耐以下的菌株。PCR扩增出int1,blaTEM,aac（6’）-Ib-cr,floR,catA1,tetA,strA,cmlA 8种耐药基因。超过90%的菌株携带int1,blaTEM,floR和aac（6’）-Ib-cr耐药基因。上述结果表明,耐药表型及耐药基因的符合呈现相关性。     

上海市鸭源沙门菌的分离鉴定、血清分型及耐药性分析

为了解上海市农贸市场和超市中鸭源沙门菌的污染情况、血清型分布及耐药情况,于2014年从上海市各大农贸市场和超市随机采集鸭肉、鸭粪便样品186份,通过常规分离鉴定和PCR鉴定,获得了44株鸭源沙门菌。对分离株采用Kauffman-White法进行血清学分型和K-B纸片法进行16种抗生素的药敏试验。结果显示,鸭源沙门菌分离率为23.65%,共鉴定出13种血清型,优势血清型为鼠伤寒(43.18%)。耐药性结果显示,分离株对萘啶酸(63.64%)的耐药率最高,对磺胺异恶唑(47.73%)、链霉素(47.73%)、四环素(40.91%)的耐药率次之,对头孢吡肟(4.54%)、头孢噻肟(4.54%)、环丙沙星(2.27%)、庆大霉素(2.27%)等耐药率低,对氧氟沙星(0.00%)和亚胺培南(0.00%)两种药物敏感。其中,多重耐药率为43.18%,最多可耐受11种抗菌药物。表明上海市鸭源沙门菌的污染率较高,血清型分布广且耐药模式多样,多重耐药菌株较严重。提示鸭源沙门菌的流行和耐药情况值得我们密切关注,同时为进一步做好食品中沙门菌的防控提供数据支持。     

华中地区鸡源沙门菌分离鉴定及耐药性分析

为了探明华中地区种鸡场沙门菌(Salmonella)的优势血清型和耐药情况,本研究从湖北、河南、湖南等省市22个规模化鸡场采集病鸡、死胚及弱雏组织样品3 724份,通过分离培养、生化试验、PCR鉴定及血清型试验确定分离菌种属及其血清型,并采用Kirby-Bauer法对分离菌株进行了耐药性分析。结果显示,本试验从3 724份病料中共分离鉴定出124株沙门菌,其中79株为D群肠炎沙门菌(63.71%,79/124),34株为D群鸡白痢沙门菌(27.42%,34/124),8株为B群鼠伤寒沙门菌(6.45%,8/124),有3株沙门菌未能确定血清型。O抗原鉴定79株肠炎沙门菌和34株鸡白痢沙门菌为O9,8株鼠伤寒沙门菌为O4。H抗原鉴定79株肠炎沙门菌为Hg,m,8株鼠伤寒沙门菌为Hi。药敏试验结果显示,124株分离菌株对萘啶酸、氨苄青霉素、四环素和多西环素耐药率分别为95.97%(119/124)、91.94%(114/124)、57.26%(71/124)和70.16%(87/124);对复方新诺明和红霉素耐药率分别为25.81%(32/124)和12.10%(15/124);对氯霉素、庆大霉素、头孢噻肟和卡那霉素耐药率分别为6.45%(8/124)、1.61%(2/124)、1.61%(2/124)和0.81%(1/124);对左氧氟沙星、阿米卡星和多黏菌素B完全敏感。99.19%(123/124)的分离株至少对一种药物耐药,87.10%(108/124)的分离株表现多重耐药。本研究为华中地区养鸡场沙门菌的诊断及防控提供了数据支撑。     

鸡源多重耐药沙门菌转座子与耐药基因的研究

为了解鸡源性沙门菌分离株多重耐药情况与转座子及耐药基因的携带关系,采用K-B纸片法对23株鸡源性沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感试验;应用PCR对分离菌株进行转座子及耐药基因检测。结果显示,23株分离株中有10株对2种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,其中四环素-氨苄西林-甲氧苄啶-诺氟沙星-庆大霉素-环丙沙星是主要多重耐药谱;10株多重耐药菌中有8株分别携带不同种的转座子(tnpA、tn1721、tnp513、IS26),其中以转座子tnpA、tn1721和IS26的检出率最高,耐药基因中以blatem-1、tetA和tetB的检出率最高,携带转座子多的菌株中耐药基因检出率较高且耐药谱广。结果表明沙门菌多重耐药性与转座子的携带之间关系密切,耐药表型与耐药基因检测结果基本一致。     

华中地区鸡源沙门菌分离鉴定及耐药性分析

为了探明华中地区种鸡场沙门菌(Salmonella)的优势血清型和耐药情况,本研究从湖北、河南、湖南等省市22个规模化鸡场采集病鸡、死胚及弱雏组织样品3 724份,通过分离培养、生化试验、PCR鉴定及血清型试验确定分离菌种属及其血清型,并采用Kirby-Bauer法对分离菌株进行了耐药性分析。结果显示,本试验从3 724份病料中共分离鉴定出124株沙门菌,其中79株为D群肠炎沙门菌(63.71%,79/124),34株为D群鸡白痢沙门菌(27.42%,34/124),8株为B群鼠伤寒沙门菌(6.45%,8/124),有3株沙门菌未能确定血清型。O抗原鉴定79株肠炎沙门菌和34株鸡白痢沙门菌为O9,8株鼠伤寒沙门菌为O4。H抗原鉴定79株肠炎沙门菌为Hg,m,8株鼠伤寒沙门菌为Hi。药敏试验结果显示,124株分离菌株对萘啶酸、氨苄青霉素、四环素和多西环素耐药率分别为95.97%(119/124)、91.94%(114/124)、57.26%(71/124)和70.16%(87/124);对复方新诺明和红霉素耐药率分别为25.81%(32/124)和12.10%(15/124);对氯霉素、庆大霉素、头孢噻肟和卡那霉素耐药率分别为6.45%(8/124)、1.61%(2/124)、1.61%(2/124)和0.81%(1/124);对左氧氟沙星、阿米卡星和多黏菌素B完全敏感。99.19%(123/124)的分离株至少对一种药物耐药,87.10%(108/124)的分离株表现多重耐药。本研究为华中地区养鸡场沙门菌的诊断及防控提供了数据支撑。     

青岛地区鸡源大肠埃希氏菌的分离鉴定及耐药性分析

为调查青岛地区鸡源大肠埃希氏菌的流行性及耐药情况,从青岛部分规模化养殖场随机采集185份鸡泄殖腔拭子,通过选择性培养基和16S rRNA进行大肠埃希氏菌分离纯化和菌属鉴定,采用琼脂稀释法对11种抗菌药物进行药敏试验并应用PCR检测碳青霉烯类、β-内酰胺类、黏菌素类和四环素类耐药基因。结果显示共分离到173株大肠埃希氏菌,分离率为93.50%。药敏试验结果表明,分离菌株对阿莫西林、头孢氨苄、四环素等8种抗菌药物耐药率为61.27%～100.00%,对美罗培南、亚胺培南、替加环素耐药率为0.58%～30.06%。分离菌株均表现为多重耐药(3耐～10耐),以7耐～8耐为主。耐药基因检测显示,bla_CTX-M和tetA检出率为95.95%和90.75%,其他耐药基因的检出率为3.47%～37.90%。结果表明,山东省青岛地区鸡源大肠埃希氏菌耐药率较高,多重耐药情况严重,给食品安全及公共健康造成了潜在威胁。     

鸡白痢沙门菌耐药基因检测及其与药敏性的相关性分析

为探讨鸡白痢沙门菌耐药基因携带情况及其与药敏性的相关性,研究采用PCR方法对已确定耐药谱的207株鸡白痢沙门菌分离株的6类药物的10种耐药基因进行了检测。结果显示:12株(5.80%)未检出耐药基因,11株(5.31%)可携带多达7种耐药基因,携带3种耐药基因的菌株数量最多,占38.16%。10种耐药基因均可检出,tet C基因检出率最高(54.11%),其次为tet A(50.24%)和blaCMY-2(49.76%)。与菌株药敏性总符合率较高的基因依次为cat I(90.82%)、add A1(87.76%)、tet A(86.36%)、blaTEM-1(79.31%),但cat I的耐药符合率及add A1的敏感符合率均为0。blaCMY-2与tet C虽然基因检出率较高,但与药敏性的符合率均较低。研究表明:鸡白痢沙门菌分离株耐药基因携带率较高,但耐药基因与药敏性并不完全相符,耐药基因检测结果可能并不一定能反映分离菌株的实际耐药状况。     

河北省保定地区雏鸡鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性检测

为了有效防控雏鸡白痢沙门菌病,试验自保定某蛋种鸡场疑似为鸡沙门菌病雏鸡采取肝脏病料进行细菌的分离培养、生化鉴定、鸡白痢沙门菌多价血清学鉴定及沙门菌inv A基因PCR鉴定,并对分离菌进行致病性检测及对7种抗菌药物的耐药性检测。结果表明,10株分离菌的形态特征、生化特性、血清学鉴定结果符合鸡白痢沙门菌的特征,说明从病死雏鸡组织中分离出的细菌为鸡白痢沙门菌。沙门菌inv A基因PCR扩增出373 bp目的片段,进一步证实分离菌为鸡沙门菌。用分离菌株接种雏鸡,其死亡率高达90%,表明该菌株有很高的致病性。10株分离菌株对阿莫西林和青霉素耐药率达100%,对阿齐霉素的耐药率达90%,而对阿米卡星、头孢唑林和庆大霉素耐药性较弱、对氧氟沙星较为敏感。3耐菌株多重耐药比例为42.86%,4耐菌株多重耐药比例为57.14%,5耐菌株多重耐药比例为71.43%,说明雏鸡沙门菌分离株对所试抗菌药物均表现出不同程度的耐药性,且表现出多重耐药现象。本试验为鸡白痢沙门菌病的防治提供参考。     

广东省部分地区禽源和猪源沙门菌血清型与耐药性及Ⅰ类整合子分析

为了解广东省禽场和猪场沙门菌的血清型和耐药性情况,本研究2015年从广东省多个养殖场共采集样品126份,分离出沙门菌24株,分离率为19.04%。采用Kauffmann-White法、Kirby-Bauer法和PCR方法对分离株进行了血清型鉴定、药敏试验和Ⅰ类整合子检测。血清型鉴定结果显示,24株沙门菌共鉴定出4种血清型,分别是鼠伤寒沙门菌(14株)、印第安纳沙门菌(8株)、科瓦利斯沙门菌(1株)和阿尔巴尼沙门菌(1株)。药敏试验结果显示,分离株对四环素(83.33%)、氨苄西林(70.83%)、磺胺异恶唑(70.83%)、萘啶酸(66.67%)、复方新诺明(58.33%)、卡那霉素(54.17%)、阿米卡星(54.17%)、庆大霉素(50.00%)的耐药率较高,有54.17%(13/24)的菌株对8种及8种以上抗菌药物耐药。Ⅰ类整合子检测结果显示,Ⅰ类整合酶阳性率为29.17%(7/24),整合酶阳性菌株中仅有1株扩增到携带耐药基因aadA2的基因盒。上述结果表明,广东省禽场和猪场沙门菌分离率较高,耐药情况严重,菌株的耐药性与其血清型和Ⅰ类整合子的携带有一定的相关性。