芒果蒂腐病病原菌分离鉴定及其室内防治药剂筛选

【目的】明确广西百色市乐业县芒果蒂腐病的病原菌种类,并探究杀菌剂对病原菌的室内抑制效果,以期为芒果蒂腐病的田间防治提供理论依据。【方法】采用组织分离法对采集自广西百色市乐业县幼平乡百安村芒果种植区具有蒂腐病典型症状的芒果进行病原菌分离和纯化,利用柯赫氏法则对病原菌进行致病性测定,结合病原菌的形态学特征及ITS、β-tubulin和EF-1α基因序列分析鉴定病原菌种类。选取21种常用杀菌剂对病原菌进行室内毒力测定。【结果】通过传统真菌形态学、生物学分类鉴定及ITS、β-tubulin和EF-1α基因序列分析相结合的方法确定引起芒果蒂腐病的病原菌为葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)。杀菌剂对病原菌菌丝生长抑制作用测定结果显示,50%多菌灵、400 g/L氟硅唑、40%菌核净、250 g/L吡唑醚菌酯、430 g/L戊唑醇和450 g/L咪鲜胺的抑菌效果较好,其次是5%香芹酚、80%代森锰锌、20%春雷霉素和1%苯醚甲环唑,23.40%双炔酰菌胺、350 g/L精·甲霜灵和30%氟吗啉的抑菌效果最差。室内毒力测定结果显示,供试21种杀菌剂中对病原菌抑制效果较好的是5...     

桃腐烂病病原菌的分离鉴定

目的:寻找引起屈家岭地区桃树果实腐烂病的致病微生物种类。方法:分别采用细菌培养通用培养基和PDA培养基,对采集自果林的腐烂的桃果实等样本进行微生物纯化,对各种微生物分离物进行形态观测,结合16rDNA序列分析和致病性测定,对致病微生物进行鉴定。结果:从病区采集到的各种样本经过多步分离纯化均发现了成团泛菌(Pantoea agglomerans),经室内致病性实验结果,证实该细菌能够使得桃果实腐烂。结论:造成桃果实腐烂的致病菌为成团泛菌(Pantoea agglomerans)。     

草鱼肠炎病病原菌的分离鉴定

根据患病草鱼(Ctenopharyngodon idellus)的临床症状,解剖分析,初步判断为草鱼肠炎病.为确诊该病,从患病草鱼采集组织进行实验室检查,分离得到病原菌CQWL001,按常规方法进行形态特征、培养特性、主要生化及动物试验,确定该病的病原菌为肠型点状气单胞茵.     

绿色荧光蛋白基因标记芒果畸形病病原菌研究

芒果畸形病是世界性的芒果重要病害。采用PEG介导的原生质体转化法用绿色荧光蛋白(GFP)表达载体(pCT74-sGFP)转化芒果畸形病病原菌(Fusarium proliferatum),获得了表达GFP的转化子。转化子经过单孢纯化后连续继代培养仍能发出稳定而强烈的荧光,通过GFP特异性引物PCR扩增转化子基因组获得预期片段,表明GFP基因已成功转入芒果畸形病病原菌基因组中且稳定遗传。GFP标记菌株生长正常,致病性和野生菌丝无差别。获得GFP标记的转化子,为应用发绿色荧光的芒果畸形病病原菌研究病原菌的侵染方式、扩展过程等奠定了基础。     

养殖大菱鲆腹水病病原菌的分离与鉴定

[目的]从养殖大菱鲆中分离腹水病病原菌,并对其进行鉴定。[方法]从山东半岛2个不同的养殖场腹水病发病大菱鲆体内分离病原菌,并通过常规生理生化试验和16S r DNA基因序列对比对其进行鉴定。[结果]共分离到2株优势细菌。常规生理生化特征分析表明,这2株菌分别与鲨鱼弧菌(Vibrio carchiariae)和大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)表性特征非常相似。系统发育树分析表明这2株菌与鲨鱼弧菌(Vibrio carchiariae)和大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)的亲缘关系最近。[结论]这2株细菌被鉴定为鲨鱼弧菌(Vibrio carchiariae)和大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)。     

兰花茎腐病病原菌的分离与鉴定

在绍兴等地发生了较严重的兰花茎腐病,按照Koch法则对病原物进行分离纯化、菌株鉴定及致病性测定.结果表明,兰花茎腐病是由镰刀菌(Fusarium sp.)引起的.     

安徽省草莓空心病病原菌的分离与鉴定

对来源于安徽、辽宁和河北地区的草莓空心病株的病原菌进行了分离、纯化、形态观察以及分子生物学鉴定。结果显示,该病原菌在PDA平板上均呈放射状,菌丝的颜色一般为白色,菌丝上具有分枝且分生孢子呈椭圆形和镰刀形。使用PCR法扩增该病原菌的ITS和18S rDNA的序列并进行DNA克隆和测序。根据测序结果,对病原菌的ITS和18S rDNA序列的BLAST同源性对比和系统进化树分析。最终根据病原菌的外部特征和分子鉴定的结果证明引起草莓空心病的病原菌为Fusarium solani。该研究为草莓空心病的防控提供科学依据。     

大鲵腹水病病原菌的分离与鉴定研究

【目的】确定导致大鲵(Andrias davidiamus,giant salamander)腹水病的主要病原菌类型。【方法】从患病大鲵的腹水和肠道分离细菌并进行纯培养,用细菌自动鉴定系统和分子生物学方法对培养细菌进行鉴定,再对52尾健康的1龄大鲵进行感染试验,以确定病原菌,同时对病原菌进行药物敏感试验。【结果】经过细菌自动鉴定系统确定了4株细菌,室内感染试验确定嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)为主要致病菌;细菌16S rDNA基因序列分析也再次证明该菌为嗜水气单胞菌;药物敏感试验显示,该病原菌对庆大霉素、环丙沙星、阿米卡星等药物敏感,对氨卞青霉素、舒巴坦、头孢唑啉等药物具有抗性。【结论】导致大鲵腹水病的主要病原菌为嗜水气单胞菌。     

砂仁茎枯病病原菌的分离与鉴定

为明确砂仁茎枯病病原菌的分类地位,对该病原菌进行分离培养,通过致病性测定、病原菌形态特征观察及 rDNA-ITS 序列分析对病原菌进行鉴定。结果表明：砂仁茎枯病主要危害茎秆,初染病时病斑呈水渍状,逐渐扩大为纺锤形至不规则形,病斑边缘黄褐色,病健部分界明显,病斑上着生小黑点,后期病斑部质脆,呈灰褐色至灰白色干枯,导致茎部易折断,地上部分枯萎;分生孢子团奶油状,培养6～7 d 后产生菌核;分生孢子盘圆形,直径60～150μm,分生孢子梗栅栏状排列,基部褐色,向顶渐淡,具隔膜,分生孢子单个顶生,单胞,纺缍形,两端顶部钝圆,（10～18）μm×（4．5～5）μm,附着孢大量,具钝齿状裂片;分子生物学鉴定所得 rDNA 的 ITS 序列与 GenBank 中多个 Colletotrichum crassipes 菌株 ITS 序列的同源性最高,相似度为99％。引起砂仁茎枯病的病原鉴定为壳皮炭疽菌（Colletotrichum crassipes ）。     

百合鳞茎腐烂病病原菌分离鉴定

鳞茎腐烂病是百合贮藏期的重要病害,笔者从北京地区发生的百合典型鳞茎腐烂组织中分离到3种病原真菌,经过对病原菌形态特征和培养性状的观察以及致病性测定等方面的研究,结果表明Penicilliumcyclopium和Rhizopusstolonifer是引起百合贮藏期鳞茎发生腐烂的主要致病菌。     

华东山茶花腐病病原菌分离鉴定

华东山茶(Camellia japonica L.)花腐病对华东山茶的观赏性影响极其严重,为明确华东山茶花腐病的致病菌及其生物学特性,提升华东山茶花期品质和观赏价值,采用组织分离法对云南省昆明市昆明植物园华东山茶的花腐病进行病原菌分离,并进行致病性测定、形态学和分子生物学鉴定。结果表明,从华东山茶品种‘五彩’(C.japonica‘Wucai’)的病组织中分离得到1株菌株,其在PDA培养基上为白色菌丝,培养7 d长出黑色的分生孢子;将分离菌株回接于华东山茶品种‘五彩’健康花瓣上,接种后划破的花瓣病症较为明显,花朵失色变黄褐,严重时花瓣干腐或湿腐,并且产生分生孢子,与田间的症状一致;经过多引物(ITS、LSU、β-tubulin)合并系统发育分析,分离菌株与葡萄牙拟盘多毛孢(Pestalotiopsis portugallica)聚集在同一分支。综上可知,引起华东山茶花腐病的病原菌为葡萄牙拟盘多毛孢(P.portugallica),这是葡萄牙拟盘多毛孢(P.portugallica)侵染华东山茶花朵引起华东山茶花腐病的首次报道。     

仔猪大肠杆菌病病原菌分离鉴定与初步防治

从河南１２个发病场采得４４份仔猪黄、白痢检样，共分离出大肠杆菌３６株，经血清学试验鉴定为Ｏ１３９８株，Ｏ１０１７株，Ｏ１３８７株，Ｏ４５３株，Ｏ６０３株，Ｏ１４１２株，Ｏ１４７１株，Ｏ８１株，另有４株未能定型。对不同分离株进行了药敏试验。利用所分离菌株研制出灭活铝胶菌苗注射产前母猪，其后代黄、白痢发病率大大降低。     

库尔勒香梨黑头病病原菌的分离鉴定

为了分离、鉴定库尔勒香梨黑头病病原菌,并结合形态学和分子生物学等手段对致病菌进行鉴定,采用马铃薯葡萄糖琼脂平板法对致病菌株进行分离纯化,观察病原菌株的菌落特征,通过显微镜观察病原孢子形态特征,并根据回接试验确定其致病性能。结果表明,从病梨萼端表面及香梨生长环境中共分离出11株菌株,综合病原菌菌落形态、孢子显微结构及回接试验,筛选出2株候选菌株(SY-6、XL-6),其回接香梨的病症与正常发病的香梨较相似。通过十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,简称CTAB)法提取病原菌DNA,经rDNA内转录间隔区(ITS-rDNA)基因片段测序及美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,简称NCBI)网站的同源性比对,鉴定得出SY-6、XL-6均属于链格孢属。结果共分离出2株链格孢属病原菌,致病症状与自然发病的香梨较相似,结果与笔者所在课题组的前期研究结果相吻合,从而为研究病原菌致病机制提供了参考。     

甜瓜细菌性斑点病病原菌的分离鉴定

从新疆昌吉及吐鲁番甜瓜地采集发病甜瓜、植株及叶片等样品22份,对甜瓜细菌性斑点病病原菌进行了分离纯化,并经过致病性测定得到甜瓜细菌性斑点病病原菌一株.根据形态观察、培养性状并结合微生物自动鉴定仪及该菌株的16S rDNA基因序列分析,对该菌株进行了鉴定,结果表明该菌属于燕麦噬酸菌.     

鳙、鲢鱼打印病病原菌的分离与鉴定

分离和鉴定了一株嗜水气单胞杆菌纯养物。该菌呈短棒状,无芽胞,极生单鞭毛,有运动力,革兰氏染色阴性。该菌可发酵多种碳水化合物如葡萄糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖、丙三醇等。在营养琼脂上生长迅速、良好,该菌对红霉素、氯霉素、7％氯化钠溶液等敏感,对青霉素和磺胺类药物有耐药性。根据这些特征,本菌不同于嗜水气单胞菌,不产气亚种和嗜水气单胞菌解朊亚种,被定为嗜水气单胞菌嗜水亚种。     

点带石斑鱼溃烂病病原菌的分离与鉴定

溃烂病是我国北方海水工厂化养殖点带石斑鱼的主要病害之一。作者连续3a对天津地区的养殖点带石斑鱼溃烂病进行了流行病学调查,并从患病鱼病灶分离到7株致病菌,采用生理生化和分子生物学相结合的方法对7株致病菌进行了鉴定,结果表明,1株为杀鲑气单胞菌,5株为哈维氏弧菌,1株为河流弧菌。在连续3a的调查中,每年都分离到哈维氏弧菌,表明哈维氏弧菌是天津地区海水工厂化养殖点带石斑鱼溃烂病的主要条件致病菌,而杀鲑气单胞菌和河流弧菌是次要条件致病菌。研究结果将为控制石斑鱼溃烂病在海水工厂化养殖中的爆发和流行奠定基础。     

苹果果实褐腐病病原菌分离鉴定

为明确甘肃省静宁县苹果果实褐腐病病原菌种类,对采自该地区苹果果实褐腐病病原菌种类进行鉴定。通过组织分离法将菌株分离纯化后,采用柯赫氏法则进行致病性验证,结合形态学特征和内转录间隔区基因(Internal Transcribed Spacer,ITS)、β-微管蛋白基因(β-Tubulin, TUB2)和Laccase( Lcc2)多基因的系统发育分析以及常规PCR测定对分离菌株进行鉴定。结果表明,分离菌株为云南链核盘菌(Monilia yunnanensis),可同时侵染不同品种果实,致病性结果显示对‘秦冠’‘富士’‘新红星’有致病性,而对‘嘎啦’致病性较弱。     

奉新县猕猴桃果实腐烂病病原菌分离鉴定

为明确江西奉新猕猴桃果实腐烂的病原菌种类,对该县猕猴桃烂果进行大量病菌分离,对分离的病菌进行了分子鉴定和致病性测定,结果表明引起奉新猕猴桃烂果的病原菌有6种,分别是葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、富氏葡萄孢盘菌(Botryotinia fuckeliana)、盘多毛孢菌(Pestalotiopsis sp.)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、拟茎点霉菌(Phomopsis sp.)和链格孢菌(Alternaria sp.),其中主要是葡萄座腔菌(分出率占83.0％),其次是拟茎点霉菌(分出率占8.9％).致病性测定结果同时表明葡萄座腔菌既可从果面伤口侵入,也可以从果皮直接侵入,其他5种真菌则只能从伤口侵入.研究结果对奉新猕猴桃烂果病害的防治和进一步研究将具有重要的指导意义.