兰州大尾羊H-FABP基因荧光定量PCR检测方法的研究

通过对兰州大尾羊尾部、大网膜、肝脏、肾周脂肪组织中的总RNA提取,反转录获得总cDNA样品,结合PCR技术,建立了SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因mRNA在不同组织中相对表达量的试验方法,并进行批内、批间重复性检验。结果表明,H-FABP和18S基因标准曲线回归方程分别为CtH-FABP=-3.24375x+38.34230和Ct18S=-3.33137x+33.4573,相关系数(r2)分别为0.9964和0.9992,扩增效率分别为103%和99%;批内、批间重复性测定的变异系数分别为小于1.8%和10%;说明该方法灵敏度高、特异性强、准确可靠、重复性好,是实时荧光定量PCR检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白基因mRNA表达量的有效方法。     

兰州大尾羊解偶联蛋白3(UCP3)基因荧光定量PCR检测方法的研究

试验通过提取兰州大尾羊不同组织中总RNA,反转录获得总cDNA样品,建立了用SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊解偶联蛋白(UCP3)基因mRNA在不同组织中的相对表达量的检测方法,并进行批内、批间重复性检验。结果表明:UCP3和GADPH基因标准曲线回归方程分别为CtUCP3=-3.2343x+41.6198和CtGADPH=-3.2851x+38.0344,相关系数(r2)分别为0.9958和0.9986,扩增效率分别为103%和97%;批内、批间重复性测定的变异系数分别为小于1.4%和10%。     

蒙古绵羊肌内脂肪沉积相关基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

试验旨在建立一种适合于蒙古绵羊肌内脂肪沉积相关基因mRNA表达量的检测方法。根据GenBank中脂肪沉积相关基因的序列,分别设计1对特异性引物,然后通过克隆测序检测引物扩增片段的正确性,最后使用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术验证方法的可行性。结果显示,最佳的PCR反应参数为:94 ℃预变性4 min;94 ℃变性30 s,58 ℃退火45 s,72 ℃延伸1 min,40个循环;72 ℃延伸5 min。各目的基因的熔解曲线峰值单一,目的产物稳定。结果表明成功建立了一种快速检测蒙古绵羊肌内脂肪沉积基因的Real-time PCR方法,可用于绵羊肌内脂肪沉积基因的检测及定量分析。     

兰州大尾羊H-FABP基因荧光定量PCR检测方法的研究

通过对兰州大尾羊尾部、大网膜、肝脏、肾周脂肪组织中的总RNA提取,反转录获得总cDNA样品,结合PCR技术,建立了SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因mRNA在不同组织中相对表达量的试验方法,并进行批内、批间重复性检验。结果表明,H-FABP和18S基因标准曲线回归方程分别为CtH-FABP =-3.24375x+38.34230和Ct18S=-3.33137x+33.4573,相关系数（r2）分别为0.9964和0.9992,扩增效率分别为103%和99%;批内、批间重复性测定的变异系数分别为小于1.8%和10%;说明该方法灵敏度高、特异性强、准确可靠、重复性好,是实时荧光定量PCR检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白基因mRNA表达量的有效方法。     

中国美利奴(新疆型)羊不同等级羊产毛量的比较分析

细毛羊的产毛量是重要数量性状,也是重要的经济指标之一,是毛纺织工业的主体原料。在细毛羊生产中周岁母羊群分等级时,受10余种以上众多因素的影响,但产毛量则不在其中。可产毛量在分等级时到底占据何等分量、重要性又有如何?尚未有明确的报道。本文利用中国美利奴(新疆型)周岁母羊的鉴定记录和系谱资料,采用SPSS17.0软件,主要观察不同等级羊群产毛量之间的差异及变化情况,以更加明确产毛量这一重要经济性状在周岁母羊不同等级羊群中的重要性,为今后的合理组织生产和科学饲养管理、准确选择和加快遗传改良速度提供科学依据和理论基础。结果表明,不同等级羊群产毛量之间有极显著的差异(P0.01);即:其产毛量的高低顺序为:特级一级二级三级。周岁母羊等级与产毛量呈绝对正相关,认为产毛量是在细毛羊不同等级羊群中占据重要分量的主要性状之一。     

羊垂体前叶降钙素基因相关肽(CGRP)与P物质(SP)免疫反应神经纤维

应用免疫组化ＡＢＣ法发现羊垂体前叶有降钙素基因相关肽免疫反应神经纤维存在,这些纤维呈串球状分布于结节部及远侧部前２／３区域。纤维形态多样,细长者穿行于腺细胞之间;短小弯曲者围绕于腺细胞周围;反复分支折叠盘曲缠绕成团簇状者将腺细胞成堆的网络其中。神经纤维及串珠与腺细胞关系密切,提示有可能对腺细胞分泌起直接支配作用。在纤维分布区域可见散在的免疫反应细胞,形态不规则,大部分与神经纤维无接触关系,但有少数可位于纤维的网络之中。Ｐ物质免疫反应神经纤维及细胞在羊垂体前叶分布稀疏,且多位于结节部,远侧部很少。     

中国美利奴羊(新疆型)性状遗传力估测及相关分析

中国美利奴羊 (新疆型 )是 1 985年在巩乃斯种羊场育成的优良细毛羊品种 ,其主要特点是 ,净毛率高、毛长、羊毛综合品质好。又经过 1 5年的继续选育 ,其各项性状都得到了提高和巩固 ,遗传基础趋于稳定。目前 ,细毛羊的遗传参数国内外已有较多报道 ,但遗传参数受环境影响极大 ,借用外来参数只能揭示畜群的一般遗传规律 ,为指导具体的育种工作 ,应当估算本畜群的遗传参数。本文将巩乃斯种羊场的有关育种资料进行系统整理分析 ,估测其性状的遗传力和遗传相关 ,为本场今后的选种工作提供科学依据。1　材料与方法1 .1　材料来源　本文资料均来源…     

免疫组织化学方法检测牛海绵状脑病(BSE)和羊痒病(Scrapie)

按照本实验室建立的牛海绵状脑病免疫组织化学方法，将自制单克隆抗体4C11与PK酶消化处理的牛海绵状脑病阳性切片和羊痒病阳性切片进行反应，发现单抗4C11不仅能与牛海绵状脑病阳性切片发生强烈的免疫反应，而且也能与羊痒病阳性切片发生强烈的免疫反应。从阳性切片和阴性切片的实验来看，单克隆抗体4C11没有非特异性染色反应，并且也没有背景染色。用瑞士进口单抗6H4进行的对照实验获得了同样的结果。因此，可以用自制的单克隆抗体4C11替代昂贵的进口单抗6H4来监测我国的牛海绵状脑病和羊痒病。     

BMP4基因作为中国美利奴羊(军垦型)多胎性能候选基因的研究

以绵羊BMP4基因作为候选基因,以中国美利奴羊(军垦型)为研究对象,利用PCR-SSCP和基因测序分析BMP4基因5'UTR、外显子和3'UTR的单核苷酸多态性(SNPs),研究该基因对中国美利奴羊(军垦型)高繁殖力的影响.结果表明,BMP4基因5'UTR和外显子不存在多态性,3'UTR存在6个碱基(ACACAC)插入/缺失,最小二乘分析表明6 bp插入/缺失对绵羊高产羔数的影响差异不显著(P＞0.05),提示检测的BMP4基因座对中国美利奴羊(军垦型)高繁殖力没有影响.     

问号钩体(Leptospira interrogans)Ⅲ型分泌系统相关基因分析

根据鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统和大肠杆菌鞭毛系统中已知蛋白，以NCBI／Blast软件搜索问号钩体全基因组中与之高度同源的蛋白；用TMHMM-2．0对所得蛋白跨膜区进行分析；用Interpro对所得蛋白结构城进行分析，初步整理出问号钩体Ⅲ型分泌系统组成，发现10个被注释为鞭毛系统的相关基因和Ⅲ型分泌系统有关，并和鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关蛋白有较高同源性。6个为跨内膜蛋白，4个为胞内蛋白，并共同组成Ⅲ型分泌系统的内膜孔道，但没能发现组成外膜孔道的蛋白组分。问号钩体Ⅲ型分泌系统与鞭毛组装系统共用相同的部分组分，但钩体Ⅲ型分泌系统和经典Ⅲ型分泌系统有一定程度的差别：它缺乏外膜孔道结构，且分泌产物先进入胞周间隙。     

羊布氏杆菌病活疫苗(S2株)不同免疫方法效果观察

正布鲁氏菌病是一种人畜共患的传染病,作为一种公共卫生疾病,世界OIE将其列为B类疫病,我国将其列为二类动物疫病。由于近年人畜间疫情不断上升,越来越受到国家、省、市的关注和重视,现已作为重大动物疫病防控。各地均采取检疫、扑杀、免疫、监测相结合的措施。布氏杆菌病活疫苗(S2株)作为家畜布病免疫的首选疫苗,具有使用范围广和使用方便的特点,可供猪、牛、羊等动物免疫使用,其免疫方法有肌肉注射、口服、饮水免疫等多种接种方法。为了观察布氏     

中国美利奴羊(军垦型)MHC-DRB1基因Nested PCR-RFLP反应体系的优化

本实验针对目前对绵羊MHC-DRB1基因的分析,介绍了利用NestedPCR扩增再进行RFLP反应的方法在中国美利奴(军垦型)上的应用。分析了在NestedPCR-RFLP反应中的一些影响因素,及它的优缺点,建立了绵羊MHC-DRB1基因NestedPCR-RFLP的最佳反应体系。     

中国美利奴羊(军垦型)MHC-DRB1基因Nested PCR-RFLP反应体系的优化

试验针对目前对绵羊MHC-DRB1基因的分析,介绍了利用Nested PCR扩增再进行RFLP反应的方法在中国美利奴(军垦型)上的应用.分析了在NestedPCR-RFLP反应中的一些影响因素及它的优缺点,建立了绵羊MHC-DRB1基因Nested PCR-RFLP的最佳反应体系.     

牛源大肠杆菌O_(157)Rfb基因PCR检测方法的建立

为了建立牛源大肠杆菌O157Rfb基因的PCR检测方法,试验利用Gen Bank中公布的大肠杆菌O157Rfb基因序列设计1对特异性引物进行PCR扩增,并研究该方法的特异性和敏感性。结果表明:大肠杆菌O157Rfb基因PCR检测方法得到的片段大小为259 bp,灵敏度可达到1×104模板稀释度。     

中国美利奴(新疆型)不同等级羊剪毛后体重差异的比较分析

本文利用新疆阿克苏地区拜城县种羊场饲养的4 195只中国美利奴(新疆型)周岁母羊的鉴定记录,采用SPSS 17.0软件进行统计分析,主要观察不同等级羊之间剪毛后体重的差异及变化情况。同时也分析明确季节、不同牧队(群)等固定效应对剪毛后体重的影响。结果表明,不同等级羊剪毛后体重之间有极显著的差异(P<0.01)。不同牧队和不同季节也对中国美利奴(新疆型)羊剪毛后的体重有一定的影响。即剪毛后体重不同等级的为:特级>一级>二级>三级,不同季节的为:春羔>冬羔,不同牧队的为:牧三队>牧二队>牧一队。     

中国美利奴羊(新疆军垦型)品系间羊毛理化性能及性状相关分析

为研究中国美利奴羊(新疆军垦型)品系间的毛品质特点,以超细毛品系、A品系、B品系、毛用多胎品系和肉用多胎品系为试验对象,测定毛纤维的主要理化性能,分析各品系羊的毛纤维特点,并作相关分析。结果表明,A品系羊毛自然长度最长;超细毛品系羊毛纤维直径显著低于其它品系(P＜0.05),其羊毛卷曲度显著高于其它品系(P＜0.05);B品系污毛量最高,肉用多胎品系污毛量显著低于其它品系(P＜0.05)。毛用多胎品系净毛率最高,但各品系间净毛率差异不显著(P＞0.05)。相关分析结果表明,羊毛细度与卷曲度呈极显著负相关(P＜0.01),细度与污毛量呈显著正相关(P＜0.05);卷曲度与污毛量呈显著负相关(P＜0.05),卷曲度与自然长度呈极显著负相关(P<0.01);污毛量与自然长度呈极显著正相关(P＜0.01);自然长度与净毛率呈显著正相关(P＜0.05)。说明各品系羊的毛品质特点与培育目标一致,其中,超细毛品系羊毛综合品质优良。     

猪圆环病毒2型(PCV2)快速检测方法专利技术转让

正由上海市农业科学院生物技术研究所研发的PCV2LAMP可视化快速检测和荧光定量PCR检测方法获得了国家发明专利(图1),所在项目获得了上海市科技进步三等奖(图2)。现在该技术完成了实验室阶段测试,已组装成试剂盒(图3,4),目前正在申报药证。现准备转让,或联合申报。该技术的详细信息请见下面附文。     

动物戊型肝炎病毒(HEV)RT-nPCR检测方法的建立及应用

根据戊型肝炎病毒(HEV)的4个基因亚型,寻找其保守序列ORF2,成功设计了一套以Ⅰ、Ⅳ型为主兼顾Ⅱ、Ⅲ型的通用简并引物,摸索条件,建立检测动物戊型肝炎病毒反转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)的方法,扩增片段为507 bp。该方法检测所需时间为5 h,灵敏度可达10 pg,特异性强、重复性好;经优化研制了动物戊型肝炎病毒RT-nPCR检测试剂盒,保存期半年以上,该试剂盒可用于动物粪便、胆汁HEV RNA的检测。