几种淡水鱼肌肉乙酰胆碱酯酶的盐析提取及农药敏感性研究

以鲢鱼、镛鱼和罗非鱼肌肉组织为材料,研究乙酰胆碱酯酶AChE的盐析提取方法及农药敏感性。结果表明,3种淡水鱼肌肉组织在55%硫酸铵饱和度时得到的沉淀酶总活力最高,乙酰胆碱酯酶的比活力分别达到0.264,0.263,0.221 U/mg,纯化倍数分别为1.222,1.277,1.190,回收率分别为27.626%,37.621%,26.441%。5种有机磷农药（敌敌畏,辛硫磷,马拉硫磷,乙酰甲胺磷,氧化乐果）对3种淡水鱼肌肉乙酰胆碱酯酶有抑制作用,其中罗非鱼AChE对敌敌畏最敏感,抑制中浓度I50为0.14μg/mL,对马拉硫磷最不敏感,抑制中浓度I50为11.202μg/mL     

有机磷农药与小麦酯酶作用关系研究

本研究以小麦为植物酯酶的酶源,α-乙酸萘酯为底物,考察了小麦酯酶与有机磷农药之间作用的关系,建立了10个以吸光值变化表示的酶活性与有机磷农药浓度对数之间的线性方程,并确定了函数的单调区间和极值。     

重组人乙酰胆碱酯酶基因在毕赤酵母中分泌表达及其对农药的敏感性评估

乙酰胆碱酯酶是用酶抑制法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的关键用酶,本研究利用毕赤酵母表达系统分泌表达人乙酰胆碱酯酶,并评估其对8种农药的敏感性,为工业化大规模生产高敏感性酶源奠定基础。根据GenBank上已发表的人乙酰胆碱酯酶(human acetylcholinesterase, hAChE)基因核酸序列设计引物,从pReceiverM02-h AChE-ORF质粒中扩增出hAChE的开放阅读框(open reading frame, ORF)片段,接着利用SnaBⅠ和AvrⅡ双酶切将其克隆至载体pPIC9K中,构建pPIC9K-hAChE表达载体,然后将SalⅠ线性化的pPIC9K-hAChE电转化至毕赤酵母GS115中,在含4.00 mg/mL G418抗性平板上筛选获得阳性克隆,最后经0.5%甲醇诱导分泌表达144 h,发现其发酵上清液的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱在65 kDa处有一条明显的蛋白条带,大小与预期的hAChE蛋白一致。利用Q-Sepharose FF柱层析法对其总蛋白进行纯化,获得了较纯的人乙酰胆碱酯酶。用Bradford法测得发酵上清液中hAChE蛋白质量浓度为1.330 mg/mL,占总蛋白的5.58%,纯化后比酶活达到1 080nmol/(min·mL)。通过初步计算比对重组工程菌发酵上清液对8种常见农药的半抑制浓度,得出敌百虫敌敌畏克百威马拉硫磷乐果甲胺磷甲萘威毒死蜱,即人乙酰胆碱酯酶对毒死蜱最敏感。     

罗非鱼乙酰胆碱酯酶的组织分布尧动力学特性及农药敏感性分析

鱼体内乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的降低是水体环境农药污染的重要生物化学标记.以奥利亚罗非鱼(Oreochromis aurea)肌肉、肝脏和脑组织为材料,研究乙酰胆碱酯酶的组织分布、动力学性质及12种杀虫剂(9种有机磷类、3种氨基甲酸酯类)对酶的抑制作用.结果表明:脑组织蛋白含量最低(1.53 mg/mL),比活力最高(1.34μmol/min· mg).脑组织AChE的Km值最小(0.160 mmol/L),其次是肌肉AChE (0.227 mmol/L),最高是肝AChE(0.902 mmol/L).脑组织AChE的Vmax最大(2.35 μmol/min ·mgp),其次是肝组织,最小是肌肉组织(0.63μmol/min· mgp).12种农药对肌肉AChE抑制作用强弱顺序为:敌敌畏＞辛硫磷＞敌百虫＞呋喃丹＞乐果＞甲基异柳磷＞马拉硫磷＞氧化乐果＞丁硫克百威＞甲胺磷＞对硫磷＞灭多威,对脑AChE抑制作用强弱顺序为:敌敌畏＞呋喃丹＞灭多威＞敌百虫＞辛硫磷＞氧化乐果＞乐果＞对硫磷＞丁硫克百威＞甲基异柳磷＞马拉硫磷＞甲胺磷,对肝脏AChE抑制作用强弱顺序为:呋喃丹＞敌敌畏＞辛硫磷＞甲基异柳磷＞灭多威＞敌百虫＞氧化乐果＞丁硫克百威＞对硫磷＞马拉硫磷＞甲胺磷＞乐果.     

植物胆碱酯酶抑制法分析有机磷农药残留的研究

根据有机磷农药化学特性及其对植物胆碱酯酶抑制的原理,在确定酶促反应条件的基础上,考察了不同展开体系对11种有机磷农药的薄层层析分离效果,建立了10种有机磷农药残留的定性分析方法。     

凡纳滨对虾乙酰胆碱酯酶组织分布及对有机磷农药敏感性分析

采用改进的ELLMAN法测定凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）脑神经节乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）活性,确定其适宜测定条件,并在此基础上测定对虾不同组织AChE活性,比较毒死蜱、敌敌畏、辛硫磷和乙酰甲胺磷4种有机磷农药对凡纳滨对虾脑神经节AChE活性的影响。结果表明,温度35 ℃,磷酸缓冲液pH 7.5时,凡纳滨对虾的AChE活性最高,保温时间对酶活性影响很小;对虾AChE活性存在着明显的组织分布差异性,脑神经节AChE活性最高,为（49.73±8.42） nmol/(min·mg),分别是鳃、肌肉和肝胰腺的3倍、15倍和19倍;对虾AChE 对敌敌畏最为敏感,IC₅₀为0.19 μg/mL,对毒死蜱和辛硫磷敏感性较强,IC₅₀ 分别为7.20 μg/mL和9.39 μg/mL, AChE对乙酰甲胺磷敏感性最弱,IC₅₀ 为136.77 μg/mL。由此可见,对虾养殖中应注意防范敌敌畏、毒死蜱和辛硫磷等有机磷农药的毒性危害。     

农药残留检测用植物酯酶筛选研究

目的:选用4种块茎马铃薯、红薯、茨菇、芋头提取植物酯酶,研究其检测有机磷农药的最佳条件,拟选取适宜的植物酶源;方法:使用酶抑制法,研究4种块茎中提取出的植物酯酶对农药敌敌畏、敌百虫、甲胺磷、辛硫磷灵敏度及其最低检测限;结果:4种植物酯酶均对农药敌百虫的灵敏度最好,最高可达37.184,检测限也低于国家标准;结论:因此,该酶可作为新的有机磷农药残留检测用酶。     

鸡肝酯酶快速检测氰戊菊酯农药的试验研究

采用鸡肝酯酶对不同浓度的氰戊菊酯农药进行了催化水解,并通过pH-stat法优化了水解条件.结果表明,在pH 8.0,温度55℃的条件下,酶催化反应速度较大.在该反应条件下,分析了农药浓度(1/x)与酶解反应初速度(1/y)之间的关系,发现在0.05～2.00 mg·L-1农药浓度范围内,两者的关系曲线为y=0.0723...     

3种昆虫对蔬菜农药残留的敏感性对比试验

试验采用生物检测法,对3种昆虫在生菜中,对3类农药常规用药浓度下的敏感性做了比较和跟踪试验。试验结果表明,不同的昆虫种类对不同农药品种的敏感性不同,并且,综合评价3种昆虫的试验认为,黄粉虫幼虫更适于蔬菜农药残留的检测和上市蔬菜的安全性监督。     

豆类酯酶的提取及其在有机磷农药检测中的应用

研究了多种豆类酯酶的提取及酶活力的测定,并根据酶抑制法原理,研究了各种不同豆类来源的酯酶对有机磷农药的敏感性。结果表明:不同豆类来源的酯酶对敌敌畏、甲胺磷等8种农药的敏感性不同,其中以绿豆、黑豆来源酯酶的总酯酶活力和敏感性为最好。     

家蝇乙酰胆碱酯酶的纯化、生化性质及其对杀虫剂敏感性的研究

采用CEA亲和层析法对家蝇AChE进行纯化,测定了不同温度、pH值、ATChI浓度、DTNB浓度对AChE活性的影响,并测定了不同杀虫剂对纯酶和粗酶的抑制作用.结果表,CEA纯化倍数为672.36,产率为34.68%;当温度为35℃时,粗酶和纯酶的AChE活性最高;当pH=7.2时,纯化后AChE的活性最高,随后随着pH的升高AChE的活性反呈下降趋势;当pH=7.8时,粗酶AChE活性最高;当底物浓度的2 500 umol·L-1时,纯化AChE活性达到最大值,当底物浓度为l 500 μmol·L-1时,粗酶活性达到最大值;粗酶和纯化的AChE活性的两个波峰出现在DTNB浓度为0.2 mol·L-1和0.4 mol·L-1时;仲丁威、乙酰甲胺磷、速灭威、甲胺磷、毒死蜱、克百威、抗蚜威、灭多威和辛硫磷等9种杀虫剂对粗酶和纯酶AChE的IC50比值都大于6,甲萘威对纯酶和粗酶AChE的IC50比值为4.826,二嗪磷的为1.184,三唑磷的为0.099.     

木霉培育条件及与农药的敏感性研究

[目的]筛选木霉的培育条件,同时对木霉对农药的敏感性进行研究。[方法]以木霉TC、TY、NF9、PZ株系为材料,先在PDA培养基和玉米培养基中筛选出合适的培养基,再对瓶装培养中的透气条件和袋装培养中培养条件进行筛选,最后进行木霉与农药甲霜灵、百菌清、菌核净间的敏感性试验。[结果]PDA培养基更有利于3种木霉株系的产孢;瓶装培养中透气塑料纸密封能促进木霉产孢;袋装培养中木霉在温度24(±2)℃、光暗比9 h∶15 h或10 h∶14 h的条件下生长较为理想;木霉对甲霜灵的敏感浓度可达1 500 mg/L左右。[结论]为后续的抗性试验提供了数据支持。     

植物酯酶检测有机磷农药残留影响因素的研究

分析了固定方式、pH值、温度、农药浓度和显色剂类型对植物酯酶检测有机磷农药残留的影响,比较了两种固定方式检测农残的灵敏度,结果表明:离子交换法比微乳板法敏感性略高;固化酯酶的最适合pH值约为5.6,游离酯酶的最适合pH值约为4.8;固化酯酶与游离酯酶的最适温度相同,但固化酶活力对温度响应的峰型较游离酶略陡,不同农药对植物酯酶的抑制效果差异较大,其中敌敌畏最灵敏,对硫磷的灵敏度最差,且随着农药稀释浓度的增加,检测灵敏度逐渐下降。实验还发现,液体显色剂在室温40 min后显色能力显著下降,因此固体显色剂更适用于农残的快速检测。     

自制酯酶对甲胺磷农药残留的快速检测研究

利用猪肝提取酶水解碘化硫代丁酰胆碱后形成的硫代胆碱,与二硫双对硝基苯甲酸发生化学反应测定酶、底物的添加量以及保温温度和保温时间对酶活力的影响,并研究了不同浓度与保温时间的甲胺磷对胆碱酯酶活力的抑制情况。结果表明自制胆碱酯酶对甲胺磷比较敏感,其样品最低检出浓度为2.0mg/kg,适合对蔬菜中高残留农药的快速检测。     

枸杞木虱各虫期对三唑磷的敏感性及其与羧酸酯酶活力关系的研究

用浸渍法和药膜法分别测定了枸杞木虱若虫和成虫对三唑磷的敏感性,并测定了枸杞木虱各虫期羧酸酯酶的活性及三唑磷对其羧酸酯酶的抑制率。枸杞木虱各虫期对三唑磷的LC50随着龄期的增加而增加,各龄期的羧酸酯酶活性也随着龄期的增加而增加。三唑磷对各虫期羧酸酯酶的抑制率除3龄以外,也随着龄期的增加而增加,3龄期的抑制中浓度IC50较其他虫期为高。枸杞木虱羧酸酯酶活性越高,对农药的敏感性越低。     

用于检测农药残留的胆碱酯酶酶源的研究进展

概述农药残留检测的现状,分析胆碱酯酶的分子类型、分布,不同来源的胆碱酯酶的特点及分离纯化方法,提出存在的问题,并展望其应用前景。     

3个家蝇(Musca domestica L.)种群及其乙酰胆碱酯酶对杀虫剂的敏感性研究

采用药膜法测定了3个家蝇（Musca domestica L.）种群对12种有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的敏感性,采用酶动力学方法测定了不同杀虫剂对家蝇乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）的体外抑制作用。结果表明,Org种群对抗蚜威（LC50=18.654mg·L^-1）、速灭威（LC50=17.387mg·L^-1）比FAAS种群（LC50分别为26.011、26.632mg·L^-1）更为敏感,FAAS种群对仲丁威（LC50=8.271mg·L^-1）比Org种群（LC50=12.539mg·L^-1）更为敏感;除了与乙酰甲胺磷无显著差异外,FZ种群对其他供试杀虫剂的敏感性均显著低于Org种群和FAAS种群（95%CI没有重叠）。Org种群AChE对二嗪磷（IC50=0.025mg·L^-1）比FAAS种群AChE（IC50=0.048mg·L^-1）更为敏感,FAAS种群AChE对辛硫磷（IC50=0.021mg·L^-1）比Org种群AChE（IC50=0.026mg·L^-1）更为敏感;FZ种群AChE对所有供试杀虫剂的敏感性均显著低于Org种群和FAAS种群AChE（95%CI没有重叠）。     

麦麸中植物酯酶的提取及其在有机磷农药残留检测中的初探

本文初步确定了麦麸中提取植物酯酶的工艺、酶促反应的最佳检测波长和酶促反应最适条件。酶活测定采用分光光度法,波长确定为533纳米,酶活力用单位时间酶促反应速率表示。酶促反应的最佳条件为:酶液保存温度0～5℃;反应温度40℃,保温时间15分钟,pH7.5,酶量30μL,8毫克/毫升固兰B盐0.5毫升,3毫克/毫升底物(α-乙酸蔡酯)200μL。同时探讨了从麦麸中提取的植物酯酶用于快速检测蔬菜中农药残留的方法。     

小尾寒羊血清酯酶多态性及其与产羔性能关系的研究

[目的]为小尾寒羊的多胎品种选育及鉴定提供理论依据。[方法]采用垂直板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）检测小尾寒羊血清酯酶（Es）位点的多态性,将不同基因型个体与其产羔数进行统计分析,根据结果分析Es多态性与产羔数之间的相关性。[结果]Es位点有3种基因型,其中优势基因型为Es＋＋。3种基因型母羊的第1胎产羔数差异不显著（P〉0.05）,第2胎和第3胎产羔数以Es＋＋型显著（P〈0.05）高于Es--型和Es＋-型 Es＋＋型平均产羔数极显著（P〈0.01）高于Es--型和Es＋-型,Es--和Es＋-之间差异均不显著（P〉0.05）。[结论]Es位点可以作为小尾寒羊高产母羊早期选择的遗传标记位点,Es＋＋为其高产基因型。     

熊蜂对番茄常用农药的敏感性

用触杀和残毒试验的方法。测定了番茄生产中常用的10种杀菌剂和11种杀虫剂对欧洲熊蜂(Bombus terrestris)的毒性。触杀试验结果表明：(1)杀菌剂对熊蜂也具有杀伤作用。但其致死作用明显低于杀虫剂。(2)在供试的杀菌剂中,以62．2％仙生(myclobutanil—mancozebl)可湿性粉剂和40％百可得(irninoctadine tris)可湿性粉剂对熊蜂的毒害比较明显;其次为40％福星(flusilazole)乳油、50％多菌灵(carbendazim)可湿性粉剂、50％速克灵(procymidone)可湿性粉剂、40％达科宁(chlomthabnil)悬浮剂、50％扑海因(iprodione)可湿性粉剂、80％大生(mancozeb)可湿性粉剂等;58％的雷多米尔(metalaxyl—mancozeb)可湿性粉剂和64％杀毒矾(oxadixyl—mancozeb)可湿性粉剂对熊蜂的毒害作用最低。(3)杀虫剂对熊蜂的毒害比较明显。20％米满(tebufenozide)悬浮剂、5％抑太保(chlorfluazuron)SL油、50％阿波罗(clofentezine)悬浮剂的毒性较低;而5％锐劲特(fipronil)悬浮剂、10％一遍净(imidacloprid)可湿性粉剂、48％乐斯本(chlorpyrih)乳油的毒性较高;25％扑虱灵(buprofezin)可湿性粉剂、10％除尽(chlorfenapyr)SL油、1．8％害极灭(abamectin)乳油、20％喹硫磷(quinalphcs)乳油、2．5％天王星(bifenthrin)SL油介于前二类之间。残效试验结果表明。1．8％害极灭乳油对熊蜂的残毒期较短,3d后对熊蜂已安全;而天王星在药后10d对熊蜂才表现安全;一遍净与熊蜂极不相容。药后1个月对熊蜂仍有明显毒害,50d后才表现安全。