粘虫核型多角体病毒的研究——I.毒力的生物测定

<正> 利用病毒防治害虫,已成为综合防治中有发展前途的方法之一.粘虫核多角体病毒已成功地用于大田防治,病毒的应用效果,主要决定于它的生物活性.而其生物活性受各种因素的影响,只凭多角体的数量来估计病毒的活性是不准确的,必须进行生物测定.我们用本所分离的粘虫核多角体病毒涂在天然饲料上饲养各龄幼虫使受感染,然后测定1—6龄粘虫的幼虫敏感性.并根据不同虫龄的敏感性,将病毒稀释成五种浓度,梯度为各相距两倍,对一龄幼虫进行了毒力的生物测定.现将生物测定方法和结果报道如下.     

荧光增白剂对春尺蠖核型多角体病毒的增效作用研究

以荧光增白剂VBL作为春尺蠖核型多角体病毒(AciNPV)的增效剂,对春尺蠖2～3龄幼虫进行生物测定,试验结果表明,浓度为1.0%(W/V)的荧光增白剂VBL对春尺蠖核型多角体病毒有显著的增效作用.荧光增白剂VBL的加入不仅将春尺蠖死亡率提高了20%～35%,而且使春尺蠖死亡高峰期提前了1 d以上,半致死时间(LT50)提前了2 d,AciNPV的半致死浓度(LC50)降低了22倍多,有效地降低了AciNPV的施用浓度.     

灭幼脲和氟啶脲对斜纹夜蛾的毒力及其增效作用研究

在室内条件下测定了灭幼脲和氟啶脲对斜纹夜蛾(Prodenia litura Fabr)幼虫的毒力及其与5种增效剂的增效作用。结果发现,在3龄幼虫中,酯酶抑制剂TBPT对灭幼脲增效显著,SR值为8.58,羧酸酯酶抑制剂TPP增效6.04倍,谷胱甘肽转移酶抑制剂DEM增效4.22倍。多功能氧化酶抑制剂PB增效2.23倍,DDT脱氯化氢酶抑制剂DMC的增效作用最小,SR值为1.14,而在6龄幼虫中,以DEM对灭幼脲的增效作用最显著,SR值为6.4,其次为TBPT(5.93)>TPP(3.47)>DMC(1.49)。说明斜纺夜蛾对灭幼脲的解毒途径主要是水解作用,其次是氧化作用。就氟啶脲而言,5种增效剂无论是对3龄幼虫还是6龄幼虫,其增效比(SR)值和增效差(SD)值均无显著差异。     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒对东方粘虫痘病毒的增效作用

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrosisvirus,AcMNPV)能够增强粘虫痘病毒(Pseudaletia separata entomopoxvirus,PsEPV)的侵染力。将两种病毒的混合悬液滴于50mg的饲料上,接入3龄末东方粘虫(Mythimna separata)的幼虫进行生物测定。当每头幼虫接入1.0×10~4 OBs的AcMNPV和1.0×10~7 OBs的PsEPV的混合液时,幼虫的死亡率为95.00%,而单独用1.0×10~7 OBs·虫~(-1)AcMNPV处理时,则幼虫不感染;单独用1.0×10~7 OBs·头~(-1)PsEPV处理时,只获得46.33%的死亡率。将AcMNPV多角体蛋白与病毒粒子分离,进一步测定,单独用1.0×10~6 OBs·虫~(-1) PsEPV侵染3龄末幼虫时,幼虫不被感染,而用同样浓度再混以AcM- NPV多角体蛋白或病毒粒子时,则会有41.67%和36.67%的死亡率,说明多角体蛋白或是病毒粒子的包涵体蛋白是产生增效作用的重要因子。     

苏云金杆菌和灭幼脲混剂对美国白蛾幼虫2种酶活性的影响

通过室内外毒力测定和防治试验发现,苏云金杆菌(Bt)+灭幼脲混剂对美国白蛾2~3代4龄幼虫有较强增效作用,在此基础上分析该混剂对白蛾4龄幼虫体内中肠几丁质酶和乙酰胆碱脂酶(ACh E)活力的影响。结果表明:5种浓度的Bt、灭幼脲及其混剂对白蛾4龄幼虫体内中肠几丁质酶活力的影响随处理浓度增高和处理时间延长抑制作用越明显,且差异极显著,说明Bt+灭幼脲混剂均有抑制白蛾4龄幼虫中肠几丁质酶活力的作用,是该混剂对白蛾4龄幼虫提高毒杀效果的原因;5种浓度Bt+灭幼脲及其混剂处理对白蛾4龄幼虫体壁ACh E活性的影响随处理时间的增加有先升高后降低的趋势,36~96 h具诱导幼虫体壁ACh E活性逐渐增强的趋势,96 h后活性明显减弱,ACh E活性减低后白蛾4龄幼虫很快死亡,对ACh E活性抑制率为20.13%~90.00%,为Bt+灭幼脲混剂增效关键作用的另一个原因。     

灭幼脲毒理学研究——Ⅴ.灭幼脲对东方粘虫蜕皮激素的影响

灭幼脲可影响东方粘虫蜕皮甾类滴度,并表现出如下特点:(1)强烈抑制末龄幼虫血淋巴蜕皮甾类滴度峰,并存在一定的剂量依赖关系,但对峰以外时间的滴度无影响;(2)点滴处理东方粘虫体壁后,灭幼脲以剂量依赖的方式抑制前胸腺的分泌活力,但却不抑制离体前胸腺分泌蜕皮酮;(3)灭幼脲抑制促前胸腺激素对前胸腺的活化。     

3种无公害药剂防治美国白蛾试验

应用3.6%烟碱·苦参碱乳油、25%阿维.灭幼脲悬浮剂、棉铃虫核型多角体病毒3种无公害药剂防治美国白蛾幼虫,结果表明：3.6%烟碱·苦参碱乳油3000倍液，喷药9d后防治效果达100%；25%阿维.灭幼脲悬浮1000倍液和1500倍液，喷药15d后防治效果均达到98%以上，生产上应选择1500倍液；以2.50×106PIB/ml、4.25×106PIB/ml 和1.25×107PIB/ml棉铃虫核型多角体病毒喷洒美国白蛾1-3龄幼虫，15d后防治效果均达到91%以上。核型多角体病毒对鱼虾安全，可在鱼虾养殖等水域美国白蛾防治中大面积应用推广。     

荧光增白剂OB对甜菜夜蛾核型多角体病毒增效作用的研究

以甜菜夜蛾为试虫,研究荧光增白剂OB对甜菜夜蛾核型多角体病毒的增效作用.结果表明,在0.25％ ～1％的浓度范围内,随着荧光增白剂OB浓度的增加,其对甜菜夜蛾核型多角体病毒的增效作用不断升高,最高增效倍数达110.2倍.而在2～4龄幼虫范围内,荧光增白剂OB对甜菜夜蛾核型多角体病毒的增效作用随着甜菜夜蛾虫龄的增大而降低.     

300亿PIB/g斜纹夜蛾核多角体病毒母药的生产工艺

阐述了300亿PIB/g斜纹夜蛾核多角体病毒母药的生产工艺,包括斜纹夜蛾的人工饲养、多角体病毒的人工增殖、多角体病毒的提纯、产品的制备、加工及包装.该产品为粉剂,多角体含量为300亿PIB/g.经生物测定,当多角体病毒的接种浓度为2.0×107 PIB/mL时,斜纹夜蛾四龄幼虫的平均死亡率可达86.40％.     

灭幼脲毒理学研究——Ⅶ.灭幼脲对东方粘虫末龄幼虫保幼激素滴度的影响

以蜡螟生测法测定了72时龄以内的东方粘虫(Mythimna separata Walkcr)末龄幼虫的保幼激素动态及灭幼脲对其影响,发现在48时龄。保幼激素滴度下降到极低水平时,灭幼脲可使保幼激素滴度堆持在一个高于正常幼虫的水平。不同时龄滴加保幼激素类似物ZR-512,发现幼虫可因施药期不同而对ZR-512产生不同效应,其转换期也是在幼虫发育到48时龄的时候,由此讨论了由于灭幼脲对保幼激素滴度在转换期间不下降到规定阈值,可能干扰了激素序列的调控,导致蜕皮、变态异常的毒理学机制。     

基因重组核型多角体病毒AcMNPV对东方粘虫的毒力作用

采用小滴饮下法，研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPVAaIT和野生型核型多角体病毒AcMNPV-C6对东方粘虫(Pseudaletia separata)的病原性，并添加感染增效物质，研究其增效作用。结果表明，AcMNPVAaIT比AcMNPV-C6具有更强的病原性，被感染昆虫死亡率高，致死时间短；添加的感染增效物质Fluorescent brightener28具有较强的感染增效作用。     

八字地老虎核型多角体病毒的寄主范围和室内增殖以及寄主 …

八字地老虎核型多角体病毒对６种夜蛾科害虫有侵染性,根据害虫感受性的高低顺序为：甘蓝夜蛾,警纹夜蛾〉黑三条夜蛾〉朽木夜蛾〉粘虫〉三角夜蛾。Ｘｃ－ｎＮＰＶ能够感染八字地老虎幼虫的体壁,脂肪体,气管基质,血细胞的睾丸被膜,而在马氏管,丝腺,消化管,腹神经索和肌肉组织中未发现有多角体的增殖;虫龄影响病毒产量,虫龄高平均每头幼虫的病毒产量越高,以３龄幼虫的病毒总产量最高。     

抑食肼,灭幼脲对棉铃虫,菜青虫生物活性的研究

抑食肼对棉铃虫１、２龄幼虫拒食生物活性很强，平均拒食率为８８％和８３％，对５龄幼虫基本无拒食作用。抑食肼与灭幼脲对菜青虫４龄幼虫有很好的触杀作用，还研究了棉铃虫幼虫取食肼后中肠的组织学病变。     

苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒对甜菜夜蛾幼虫及成虫的影响

分别研究了甜菜夜蛾在幼虫期和成虫期对苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒 (AcNPV)的敏感性。结果表明,AcNPV对 4龄甜菜夜蛾幼虫的致死中浓度为 1ml9 1×106 PIB(多角体), 4龄幼虫摄入亚致死剂量病毒对化蛹产生不良影响,并使性比发生变化,雌雄蛹比为 0 6~0 8,较对照明显升高;幼虫期摄入病毒亦对其成虫的繁殖力产生影响,无论是每雌产卵量、总卵量还是卵孵化率均比对照显著降低,交配比例和次数也比对照明显下降。甜菜夜蛾成虫期摄入病毒亦对繁殖力产生影响,产卵量和交配比例和次数以及卵孵率均比对照明显下降,此外,还对后代幼虫的存活率有显著影响。     

八字地老虎核型多角体病毒的寄主范围和室内增殖以及寄主组织病理的研究

八字地老虎核型多角体病毒（Ｘｃ－ｎＮＰＶ）对６种夜蛾科害虫有侵染性,根据害虫感受性的高低顺序为：甘蓝夜蛾、警纹夜蛾＞黑三条夜蛾＞朽木夜蛾＞粘虫＞三角夜蛾。Ｘｃ－ｎＮＰＶ能够感染八字地老虎幼虫的体壁、脂肪体、气管基质、血细胞和睾丸被膜,而在马氏管、丝腺、消化管、腹神经索和肌肉组织中未发现有多角体的增殖;虫龄影响病毒产量,虫龄越高平均每头幼虫的病毒产量越高,以３龄幼虫的病毒总产量最高。     

灭幼脲对粘虫幼虫体内物质代谢的影响

脱皮８ｈ内的粘虫６龄幼虫,用灭幼脲每头０．０４μｇ胃毒处理后１ｄ～４ｄ,体内血糖和整体糖原含量高于对照约１０％～２０％左右,而血液和脂肪体内蛋白质含量则略低于对照,与此相反,处理５ｄ后至初蛹期,粘虫体内血糖和整体糖原含量低于对照３％～２０％,而血液和脂肪体内蛋白质含量却高于对照,７日龄时处理组幼虫脂肪体内蛋白质含量比对照高达３１％。上述现象难以用灭幼脉抑制粘虫几丁质生物合成来解释,可能是其干扰了粘虫激素平衡的结果。同时,灭幼脲时稻瘟病菌孢子萌发有一定抑制作用,但抑制强度远低于异稻瘟净,说明灭幼麻可能对真菌几丁质合成有较弱的抑制。     

僵蚕乙醇提取物对HearNPV的增效作用研究

【目的】利用僵蚕乙醇提取物作为棉铃虫核型多角体病毒(HearNPV)的生物增效剂,研究其对棉铃虫核型多角体病毒(HearNPV)毒力的增效作用与内在机制。【方法】以棉铃虫3龄幼虫为标靶试虫,在HearNPV中添加0~80μg/mL僵蚕乙醇提取物,研究其对HearNPV的增效作用,并通过僵蚕乙醇提取物对试虫ALP活性的影响探讨其增效作用机理。【结果】僵蚕乙醇提取物对HearNPV具有显著的增效作用,能够显著提高病毒的毒力,40μg/mL的剂量水平就能够使病毒感染的3龄棉铃虫在第6天达到90%的死亡率、第7天达到100%的死亡率。剂量80μg/mL的僵蚕乙醇提取物能够显著缩短棉铃虫3龄试虫的LT50和LT90值,其LT50和LT90分别较对照缩短23.2%和27.8%。同时,在HearNPV中添加僵蚕乙醇提取物可以显著降低试虫中肠的ALP活性,僵蚕乙醇提取物的使用剂量达到40μg/mL以上时,试虫中肠ALP活性较对照显著下降,且差异随感染时间的延长进一步增大。【结论】僵蚕可以作为病毒增效剂新材料,其在克服传统杆状病毒制剂杀虫速度慢的缺陷方面具有极好的发展前景。     

美国白蛾高毒Bt菌株复配增效试验

苏云金芽孢杆菌是一种重要的生物杀虫剂,有着低毒、无公害、环境友好等优点,在防治美国白蛾中取得了较好成效。但单一使用时也存在着对美国白蛾幼虫致死效率不高及致死速率较慢的问题。首先利用前期筛选的美国白蛾高毒苏云金芽孢杆菌CF1262菌株与常用生物制剂（灭幼脲III号、阿维菌素、苦参碱）进行相容性测定试验,筛选出与苏云金芽孢杆菌相容性好的生物杀虫剂灭幼脲III号和阿维菌素;再用筛选出的生物杀虫剂进行不同浓度的复配增效试验,测试室内联合毒力,并通过共毒系数的计算优选出表现增效作用的组合。综合复配剂对美国白蛾4龄幼虫的联合毒力及共毒系数的整体情况来看,1.8%阿维菌素乳油、25%灭幼脲III号悬浮剂与苏云金芽孢杆菌CF1262复配剂均对美国白蛾的生物防治显示出了很好的增效作用。其中,苏云金芽孢杆菌CF1262与1.8%阿维菌素乳油体积比1∶1混合后增效作用尤为明显,共毒系数达到179.88。试验结果为美国白蛾的生物防治提供更多值得参考的方法和选择。     

柞蚕核型多角体病毒研究进展

柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi Nuclear Polyhedrosis Virus，简称ApNPV)，属杆状病毒科包含体杆状病毒亚科核型多角体病毒属，是柞蚕核型多角体病的病原。该成熟病毒包含体的断面分三层结构：最外层是致密层，次外层是多角体蛋白层，内部是病毒束。柞蚕核型多角体病毒的核酸为DNA，经限制性内切酶PstI，HindⅢ，BamH，XhoI，SalI，EcoR I和EcoR I BamH I酶解后，电泳分别形成31,25，6，15，24，5，7条谱带。柞蚕核型多角体病毒主要通过食下和体壁创伤途径感染柞蚕幼虫，不同病毒株对柞蚕的致病性存在着差异。柞蚕幼虫消化液对柞蚕核型多角体病毒有溶解、灭活作用；柞蚕幼虫中肠围食膜对柞蚕核型多角体病毒有灭活作用。柞蚕核型多角体病毒多角体在自然条件下有自然裂解现象，游离的病毒粒子在自然条件下很快失活。目前已建立柞蚕核型多角体病毒载体表达系统，并在分别在体内、体外表达了报告基因．     

不同龄期草地贪夜蛾对常用杀虫剂的敏感性

【目的】明确草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）不同龄期幼虫对常用杀虫剂的敏感性差异,为 该虫化学防治提供科学依据。【方法】在室内测定 10 种杀虫剂对草地贪夜蛾三龄幼虫的防效,通过生物测定比 较一龄、三龄、五龄幼虫对防效高于 85% 的 4 种药剂的敏感性。【结果】氯虫苯甲酰胺、甲氨基阿维菌素苯甲 酸盐、虫螨腈对草地贪夜蛾三龄幼虫药后 7 d 的防效均为 100%,虱螨脲的防效为 91.67%,溴氰虫酰胺的防效为 88.89%,其余 5 种杀虫剂的防效较低,在 44.44%~69.44% 之间。生物测定结果表明,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐 药后 48 h 对一龄、三龄、五龄幼虫的致死中浓度（LC50）分别为 0.0190、0.0234、0.3918 mg/L,氯虫苯甲酰胺药 后 72 h 的 LC50 分别为 0.2167、0.2763、3.3718 mg/L,虫螨腈为 1.1286、3.0194、19.2726 mg/L,虱螨脲为 1.2213、 2.1445、7.8419 mg/L。可见,随着龄期的增加,草地贪夜蛾幼虫对 4 种药剂的敏感性逐渐降低,五龄幼虫的敏感 性显著低于一龄和三龄幼虫。【结论】草地贪夜蛾幼虫为 1~3 龄时推荐使用氯虫苯甲酰胺、甲氨基阿维菌素苯 甲酸盐、虫螨腈和虱螨脲进行防治,当幼虫发育至五龄时推荐使用甲氨基阿维菌素苯甲酸盐或氯虫苯甲酰胺。