5种中草药提取物对嗜水气单胞菌体外抑菌效果的研究

[目的]研究5种中草药提取物对嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）的体外抑菌效果。[方法]以鱼类常见病原菌嗜水气单胞菌为供试菌,测定了5种中草药对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用,并测定了其中效果较好的中草药的治愈率,确定了其最佳用药剂量。[结果]在相同试验条件下,5种中草药中五倍子（Rhus chinensisMill）、石榴皮（Punica granatumL.）和诃子（Terminalia chebulaRetz）对嗜水气单胞菌有较强的抑菌效果,其中五倍子抑菌效果显著高于其他几种中草药（P〈0.05）。五倍子治疗由嗜水气单胞菌引起的细菌性败血症的最佳治疗剂量为：0.5 mg/ml五倍子药液药浴40 min,治愈率为100%。[结论]为鱼类暴发性细菌病的防治提供了科学的用药依据。     

大黄提取物对嗜水气单胞菌的抑菌效果

测定了大黄提取物对水产养殖中常见病原菌的最小抑菌浓度及其对嗜水气单胞菌体内和体外抑菌效果。结果显示,大黄提取物对水产养殖中的常见病原菌嗜水气单胞菌最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)均为250μl/L,点状产气单胞菌、鳗弧菌、苏伯利产气单胞菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌的MIC与MBC均为500μl/L,肠型点状产气单胞菌的MIC与MBC均为1 000μl/L。药敏试验结果发现,大黄提取物对嗜水气单胞菌抑菌圈的直径为(20.4±1.3)mm,氟哌酸的抑菌圈直径为(33.0±1.6)mm,氯霉素为(29.0±2.8)mm。攻毒试验结果显示,在攻毒7 d后,对照组死亡率为40.00%,饲料中添加0.5%大黄提取物的试验组死亡率为6.67%,添加4%的试验组的死亡率为20%,添加1%和2%的试验组没有鱼死亡,表明饲料中添加1%的大黄提取物能有效增强鱼体对嗜水气单胞菌的抵抗能力。本试验结果说明,大黄提取物对水产养殖中常见的病原菌具有良好的抑菌效果,对嗜水气单胞菌的抑菌效果与抗生素类抗菌药物相当,能够增强机体免疫力,对细菌性疾病具有较强的预防作用。     

几种氟喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌体外药效学研究

采用试管两部稀释法测定了盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、二氟沙星对嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度 (MIC)和最小杀菌浓度 (MBC) ,MIC分别是 :0 .0 0 6 2 5 ,0 .0 0 6 2 5 ,0 .0 12 5 ,0 .0 5 ,0 .2 0 ︼g.m L- 1 ,MBC分别是 0 .0 2 5 ,0 .0 2 5 ,0 .0 5 ,0 .10 ,0 .80 ︼g.m L- 1。同时研究了不同药物浓度 (2 MIC,5 MIC,8MIC)对嗜水气单胞菌杀菌的经时变化规律。结果表明 ,这几种药物从 2 MIC到 5 MIC浓度在 3h内菌数减少的 1g值之间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,从 5 MIC浓度到 8MIC浓度在 3h内菌数减少的 1g值之间差异不显著 (P >0 .0 5 )     

4种中药对嗜水气单胞菌抑菌效果的Meta分析

[目的]采用Meta分析大黄、五倍子、黄连和乌梅等4种中药对不同来源嗜水气单胞菌的抑菌效果,为筛选防治嗜水气单胞菌的中药及其复方提供参考.[方法]使用计算机检索中国知网(CNKI)数据库,检索时限为建库至2016年5月,搜集大黄、五倍子、黄连和乌梅体外抑制嗜水气单胞菌效果的研究文献,并追溯纳入文献的参考文献,提取数据,利用RevMan 5.3进行Meta分析.[结果]共纳入9篇文献进行Meta分析,分析结果显示五倍子对嗜水气单胞菌的抑菌效果显著高于大黄[MD=8.11,95% CI(6.26,9.95),P<0.00001],黄连的抑菌效果显著低于大黄[MD=-3.41,95%CI(-5.61,-1.21),P=0.002],乌梅的抑菌效果显著高于大黄[MD=6.43,95% CI(5.18,7.69),P<0.00001],乌梅的抑菌效果显著低于五倍子[MD=-9.34,95%CI(-18.14,-0.54),P=0.04],黄连的抑菌效果显著低于五倍子[MD=-10.81,95%CI(-12.64,-8.97),P<0.00001];敏感分析结果显示Meta分析结果均稳定.[结论]大黄、黄连、五倍子和乌梅4种中药对嗜水气单胞菌的抑菌效果为五倍子>乌梅>大黄>黄连,分析结果稳定,今后防治嗜水气单胞菌的中药复方配伍或中西药配伍时可首选五倍子和乌梅.     

嗜水气单胞菌胞外蛋白酶对鲫鱼的致病性

以提纯的嗜水气单胞菌胞外蛋白酶注射异育银鲫,鲫鱼出现典型的嗜水气单胞菌引起的败血症症状;病鱼体表充血、出血,鳃苍白,腹部膨大,肛门红肿突出,腹腔内有红色的腹水,肠壁充血发炎;背部肌肉注射部位发生液化、糜烂,鳞片竖起。病鱼各组织器官都有病变,其中尤以肝、肾最为严重：肝脏肿大,质地脆弱,肝细胞水肿,胞浆结构疏松;肾小体坏死以至解体,肾小管上皮细胞也发生病变。体外试验表明,正常鲫鱼血精中有某种成分能够抑     

大鲵油对嗜水气单胞菌的抑菌效果研究

[目的]研究大鲵油脂对嗜水气单胞菌的抑菌作用及其抑菌效果。[方法]用乙醚萃取大鲵油脂后,采用滤纸片琼脂扩散法研究大鲵油脂对嗜水气单胞菌的抑菌作用。[结果]大鲵油对嗜水气单胞菌有抑制作用,其抑菌圈直径为（8．10±0．55）mm。[结论]大鲵油脂对嗜水气单胞菌有抑菌作用,但与其他生物来源的油脂相比,其抗菌作用较差。     

嗜水气单胞菌胞外蛋白酶的研究概况

嗜水气单胞菌胞外蛋白酶的研究概况李焕荣,陆承平（北京农学院动物科学系,北京１０２２０６）（南京农业大学动物医学院,南京２１００９５）嗜水气单胞菌等气单胞菌是鱼类［３３］、冷血动物及包括人在内的温血动物的重要病原菌［５,１２,１３］．在自然界中分布极广...     

嗜水气单胞菌胞外蛋白酶ECPase54的纯化及特性分析

嗜水气单胞菌（Ａｈ）Ｊ－１株的液体培养物上清在５６℃或与乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）或丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）作用，其胞外蛋白酶（ＥＣＰａｓｅ）的活力有不同程度的下降，将酪蛋白掺入丙烯酰胺聚合后，加Ａｈ－Ｊ－１上清作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ３７℃原位消化，染色，显示上清中存在至少５种分子量不同的蛋白酶，ＡｈＪ－１株的培养上清经硫酸铵沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２０     

黄芩、黄连等对猪致病性大肠杆菌的体外抑菌试验

无菌采集发病仔猪的粪便和肠内容物,经细菌分离纯化培养、形态学观察、动物致病性试验,结果表明分离所得大肠杆菌为强致病性大肠杆菌。将黄芩、黄连、石榴皮、甘草、大黄、鱼腥草、苦参、地榆8种单味中药经水煮处理制成浓度为1g/mL的受试溶液,对所得的大肠杆菌进行体外抑菌试验。试验结果表明,不同的中草药对分离所得到的大肠杆菌具有不同的抑制作用。     

嗜水气单胞菌胞外产物对翘嘴鳜免疫防御机制的影响

用嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)制备的福尔马林灭活菌苗 (F AH)和胞外产物 (ECP)作为免疫原 ,接种翘嘴鳜 (SinipercachuatsiBasilewsky)后 ,通过测定供试鱼的体液及细胞免疫活性 ,探讨了A .hydrophila的ECP对翘嘴鳜免疫防御机制的影响。结果表明 ,与F AH免疫组相比 ,ECP能极显著地影响供试鱼的凝集抗体、补体等体液因子的活性 (t测验 ,P <0 .0 1) ,而对供试鱼血液中白细胞的自发吞噬活性和细胞内杀菌活性没有显著影响 (t测验 ,P >0 .0 5 )。推测A .hydrophila的ECP对翘嘴鳜免疫防御机制的抑制作用是导致翘嘴鳜容易重复感染由A .hydrophila引起的细菌性败血症的重要原因     

培养条件对嗜水气单胞菌胞外蛋白酶合成与分泌的影响

对体外培养嗜水气单胞菌的胞外蛋白酶 (ECPase)产生条件进行了优化。结果发现 ,其产量与碳源、氮源、培养温度、培养基初始pH值等有关。蔗糖能促进蛋白酶的产生 ,NH4 + 抑制蛋白酶的产生。其最佳产酶条件为 :pH 7 5的0 0 2mol·L-1KC1,0 0 6mol·L-1K2 HPO4 ,5g·L-1的蔗糖和 5g·L-1的胰蛋白胨水 ,2 8℃ ,15 0r·min-1摇床培养 6 5h。在此条件下酶活性可达 2 0 8U·mL-1。     

抗嗜水气单胞菌IgY的提纯及体外抑菌效果研究

以灭活嗜水气单胞菌(AS 1.927菌株)为抗原免疫蛋鸡,采用水稀释法粗提蛋黄液IgY和硫酸铵法纯化粗提物中IgY,研究其在上清液中的抗体提取率及其体外抑菌效果.研究表明,pH 5.0、10×水稀释法粗提后上清液中IgY抗体提取率为78.34%,33%(v/v)饱和硫酸铵法纯化后上清液中抗体提取率为64.1%,SDS-PAGE电泳显示纯化后的IgY纯度较高.pH 5.0、10×水稀释法粗提后的特异性IgY浓度达1.0 mg/mL时,嗜水气单胞菌在18 h内无生长.结果提示,用水稀释法和硫酸铵法提取蛋黄中的抗嗜水气单胞菌特异性IgY,具有简便、快捷、高效的特点,所制备的IgY活性较高,可用于嗜水气单胞菌感染引起的水生动物疾病预防和控制.     

嗜水气单胞菌Aer毒素和胞外蛋白酶卵黄抗体的制备

为克服嗜水气单胞菌不同血清型对卵黄抗体免疫保护效果的影响,从嗜水气单胞菌中提取其主要致病因子Aer毒素和胞外蛋白酶(ECPase),验证其生物学活性,分别免疫蛋鸡。用辛酸-硫酸铵法粗提卵黄抗体,用间接ELISA法测其效价、鉴定抗体与不同来源嗜水气单胞菌主要致病因子的交叉反应。结果表明,抗Aer毒素和抗ECPase卵黄抗体效价最高分别可达1∶213和1∶212,与其他来源嗜水气单胞菌交叉反应性强。     

碳酸氢钠对嗜水气单胞菌的抑制效果

【目的】为了探讨碳酸氢钠(NaHCO_3)对嗜水气单胞菌的抑制效果和抑制机理.【方法】研究了不同浓度的NaHCO_3及等摩尔浓度(0.2、0.4、0.8mmol/L)的氯化钠(NaCl)和碳酸氢钾(KHCO_3)对嗜水气单胞菌生长的影响.【结果】随着NaHCO_3浓度的增大,嗜水气单胞菌的生长越来越缓慢.NaHCO_3达到一定浓度后具有杀菌作用,嗜水气单胞菌暴露在0.8、0.4 mmol/L NaHCO_3中达到99.5%死亡率所需要时间分别为1h和4h,暴露在0.2mmol/L NaHCO_3中6h,其死亡率为78.4%.NaHCO_3浓度越高,嗜水气单胞菌致死所需时间越短.暴露12h后,0.4、0.8mmol/L NaHCO_3中均无嗜水气单胞菌存活,0.2 mmol/L NaHCO_3中只有极少数嗜水气单胞菌存活(存活率小于0.01%).0.2、0.4mmol/L的NaHCO_3均能有效抑制嗜水气单胞菌生长,而添加等摩尔浓度的NaCl培养液中,细菌生长不受影响;添加等摩尔浓度KHCO_3的培养液中培养的嗜水气单胞菌,其生长情况与添加NaHCO_3的嗜水气单胞菌相似,生长被明显抑制,结果表明NaHCO_3对嗜水气单胞菌的抑制并非由渗透压引起,而是与碳酸氢根有关.【结论】研究结果为有效控制嗜水气单胞菌病提供了理论依据.     

29种中草药提取物对嗜水气单胞菌的抑菌活性研究

[目的]筛选对嗜水气单胞菌具有较强抑制作用的中草药,为该菌引起的爆发性鱼病防治提供用药依据。[方法]采用水提法和醇提法分别提取29种中草药的有效成分,并研究了29种中草药对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用。[结果]12种中草药提取物对嗜水气单胞菌有不同程度的抑制作用,其中诃子的水提物和醇提物的抑菌效果较好,其醇提物的最小抑菌浓度(MIC)为1.2 g/L。博落回、白屈菜、五倍子对嗜水气单胞菌也有较强的抑制作用,当其浓度为10.0 g/L时,抑菌圈直径均大于10 mm,其醇提物的最小抑菌浓度分别为2.4、4.8和4.8 g/L。[结论]博落回、白屈菜、五倍子可作为抗嗜水气单胞菌的筛选药物。     

不同单味中草药与复配组方对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌效果

【目的】探明6种单味中草药与复配组方对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌效果,为抗嗜水气单胞菌感染的中药组方制剂选择提供参考。【方法】采用水提法制备单味中草药提取液,并按排列组合法将6种提取液按相同比例混合得到不同配方复配液,用牛津杯法进行体外抑菌试验,试管二倍稀释法测定最小抑菌质量浓度(MIC)与最小杀菌质量浓度(MBC),研究不同单味中草药与复配组方对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌效果。【结果】6种单味中草药提取液对鲫鱼源嗜水气单胞菌抑菌圈直径为12.69～19.88 mm,五倍子的抑菌效果最好,为高度敏感,抑菌圈直径为19.88 mm,最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为15.60 mg/mL和31.25 mg/mL;2味中草药复配对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为10.64～19.98 mm,五倍子＋乌梅和五倍子＋五味子的抑菌效果最好,为高度敏感,抑菌圈直径分别为19.98 mm和19.94 mm,MIC和MBC分别为15.60 mg/mL和31.25 mg/mL;3味中草药复配对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为9.94～20.26 mm,山茱萸＋诃子＋大黄的抑菌效果最好,为极度敏感,抑菌圈直径为20.26 mm,MIC和MBC分别为7.80 mg/mL和15.60 mg/mL;4味中草药复配对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为9.88～21.28 mm,五倍子＋诃子＋乌梅＋五味子的抑菌效果最好,为极度敏感,抑菌圈直径为21.28 mm,MIC和MBC分别为7.80 mg/mL和15.60 mg/mL;5味及6味中草药复配对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为14.11～19.07 mm,以6味的五倍子＋山茱萸＋诃子＋大黄＋乌梅＋五味子的抑菌效果最好,为高度敏感,抑菌圈直径为19.07 mm,MIC和MBC均为31.25 mg/mL。【结论】山茱萸＋诃子＋大黄和五倍子＋诃子＋乌梅＋五味子组方对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌效果最佳,均为极度敏感,可用于防治嗜水气单胞菌导致的鲫鱼败血症。     

几种培养因子对喹诺酮类药物抑制体外嗜水气单胞茵活性的影响

研究了培养基酸碱度(pH)、镁离子(Mg^2 )、细菌接种量及小牛血清对4种喹诺酮药物抑制鱼类体外病原菌嗜水气单胞菌Aerorrmnas hydrophila的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的影响。结果表明，当pH为7和8时，4种药物的MIC和MBC均最小，当pH升高或降低时，MIC和MBC均明显升高，抑菌活性明显降低。Mg^2 对4种药物的体外抗菌活性均有不同程度的影响，随着Mg^2 浓度的升高，环丙沙星和恩诺沙星的MIC和MBC均升高；当Mg^2 浓度为0～2．0mg／mL时，二氟沙星的MIC无明显变化；Mg^2 浓度为1．0mg／mL时，二氟沙星的MBC由0．8μg／mL上升到3．2μg／mL，单诺沙星的MIC为0．00625μg／mL，但随着Mg^2 浓度的增加，MIC和MBC均有升高。细菌接种量为10^2～10^5 CFU／mL时，环丙沙星和二氟沙星的MIC和MBC均无变化，只有当菌数增至10^6 CFU／mL时，MIC和MBC才开始随着接种细菌量的增加而增加。血清能明显降低4种喹诺酮类药物的体外抑菌活性。     

嗜水气单胞菌灭活疫苗对鲫鱼的免疫效果

随着食品安全等问题日趋严重,寻找良好而安全的防治细菌性疾病的方法迫在眉睫。本研究利用从患病鲫鱼体内分离的嗜水气单胞菌制备灭活疫苗,用(50±5) g的健康鲫鱼作为试验对象,免疫组腹腔注射制备的疫苗,对照组腹腔注射等量的磷酸缓冲液。二次免疫后1、7、14、21、28 d检测血清凝集效价、血清中溶菌酶活性和酸性磷酸酶活性;二次免疫28 d后,对免疫组和对照组同时腹腔注射嗜水气单胞菌进行攻毒,观察鲫鱼生长状况,记录死亡量。结果表明,免疫组血清凝集效价在免疫后逐渐升高,在21 d达到峰值,明显高于对照组;血清中溶菌酶活性和酸性磷酸酶活性都于免疫后14 d达到峰值,明显高于对照组;攻毒结果显示,免疫组死亡率10.0%,对照组死亡率83.7%,相对保护率达到88.5%。说明制备的嗜水气单胞菌灭活疫苗可以诱导鲫鱼产生免疫应答反应,对嗜水气单胞菌的感染具有较好的免疫保护作用。     

基于Meta分析的国内鱼、鳖源嗜水气单胞菌毒力基因研究

通过借鉴Meta分析法分析中国知网数据库(CNKI)中有关鱼源、鳖源嗜水气单胞菌的7种毒力基因的相关研究数据,探讨鱼源、鳖源嗜水气单胞菌毒力基因的分布特点及为研制嗜水气单胞菌多价DNA疫苗提供候选基因。分析结果表明:嗜水气单胞菌毒力基因的分布受养殖对象的种类和生长环境影响;南方和北方地区鱼源嗜水气单胞菌以毒力基因astA、altA、aerA和hlyA分布较为广泛,南方地区鳖源嗜水气单胞菌毒力基因hlyA、actA和aerA分布均较为广泛,可分别作为制备鱼源和鳖源嗜水气单胞菌多价DNA疫苗候选基因。