中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中TLR4介导的MyD88依赖性途径的影响

试验旨在探讨不同剂量中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4及下游MyD88依赖性信号转导通路主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低剂量组和对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h收集细胞,应用实时荧光定量PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达。结果显示,与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6mRNA的表达量(P0.05);中、低剂量组AA基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于高剂量组(培养16h时TLR4基因除外),高剂量组BB基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养32和48h时TLR4基因除外)),低剂量组BC基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养16h时TLR4基因除外)。结果表明,中药复方多糖发挥机体免疫调节作用的机制是通过与淋巴细胞表面TLR4结合,激活下游MyD88依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,且不同MH-C B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。     

细菌内毒素对鸡NLRC5信号通路相关基因转录的影响

通过LPS刺激鸡成纤维细胞系(DF-1),分别在0、2、4、6、8、12、18和24h等8个时间点采集细胞,提取总RNA,并设计相关引物,应用荧光定量PCR方法检测NLRC5信号通路相关基因(NLRC5、NF-κB、MHC-I、IL-6、IL-18、STAT1、STAT3和TLR4)mRNA表达变化规律。结果显示,LPS刺激后,NF-κB、MHC-I、IL-6、IL-18和STAT3的转录水平均呈现先显著下降(P0.05)后上升的趋势,NLRC5和TLR4先显著上升后下降的趋势(P0.05),STAT1的mRNA转录水平无显著性变化(P0.05)。研究表明LPS刺激能够引起鸡DF-1细胞产生免疫反应,鸡NLRC5对NF-κB的转录起负调控作用。     

REV感染对鸡NLRC5及其信号通路相关基因转录的影响

为探讨鸡NLRC5信号通路相关基因在禽网状内皮组织增生病病毒(REV)刺激后转录水平的变化,通过REV刺激鸡胚成纤维细胞(CEF),在刺激后7天采集细胞,提取总RNA,并设计相关引物,应用荧光定量PCR方法检测NLRC5信号通路相关基因(NLRC5、MHC-I、IL-6、IL-18、STAT1、STAT3、NF-κB)m RNA表达变化规律。结果表明:REV感染后MHC-I、IL-18、STAT1和STAT3的转录水平高于未刺激组,差异显著(P0.05),NLRC5、IL-6和NF-κB转录水平低于未刺激组,差异不显著(P0.05),研究初步证实REV刺激能够引起CEF产生免疫应答反应,且对NLRC5基因及其信号通路产生影响,REV可能通过抑制NLRC5基因表达来抑制机体先天性免疫。     

黄连素对福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良的影响

为探讨黄连素(berberin)通过调控基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)又名CD147的表达对肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)的影响,将150只1日龄AA肉鸡随机均分为3组:对照组、TD发生组和黄连素组,对照组正常饲喂基础日粮;从第3天开始,TD发生组和黄连素组,在饲喂基础日粮的同时添加25 mg/kg的福美双诱导产生TD,黄连素组从第7天开始口腔灌服黄连素,剂量为15 mg/kg,连用7 d。于第14天剖杀全部雏鸡。观察记录各组雏鸡体质量变化、HE染色观察生长板结构及血管变化,real-time PCR和Western blot检测CD147基因和蛋白的表达差异。结果显示,TD发生组雏鸡体质量增长缓慢,生长板组织结构破坏严重,且CD147基因及蛋白表达量显著下降。黄连素组雏鸡体质量增长较快,TD症状缓解,生长板血管浸润较多,且CD147基因及蛋白表达量增加。由此推测,饲料中添加黄连素可以上调CD147基因和蛋白的表达量,从而促进TD病变区血管的生成和恢复,缓解TD症状,提高肉鸡产量。     

低剂量RT对小鼠肺泡巨噬细胞TLR4信号通路的影响

取SPF级昆明小鼠进行RT雾化攻毒。攻毒后每隔一段时间通过BCA法测定小鼠支气管灌洗液BALF上清中总蛋白浓度,ELISA法测定小鼠BALF中致炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β浓度,利用RT-PCR检测小鼠肺泡巨噬细胞TLR4及其信号通路mRNA的表达情况。结果显示:小鼠吸入1/150LD50剂量雾化RT后,BALF上清总蛋白浓度增加,IL-1β、TNF-α浓度12h时达到最高值,IL-6浓度48h达到最高值。攻毒后12,24h时TLR4表达高于空白组,差异显著(0.01P0.05);12h时MyD88表达高于空白组,差异极显著(P0.01)。12h时IRAK-1、IRAK-4、TRAF6表达高于空白组,差异显著(0.01P0.05)。结果表明:小鼠吸入1/150LD_(50)剂量雾化RT,肺部发生炎症且肺泡组织通透性增加;低浓度蓖麻毒素攻毒后可刺激肺泡巨噬细胞TLR4及其信号转导通路下游MyD88、TRAF6、IRAK-1、IRAK-4等相关因子mRNA的表达,主要通过MyD88途径引起肺部炎症反应。     

羊Toll样受体MyD88信号通路接头分子MyD88、TRAF6、AP-1、NF-кB基因TaqMan探针荧光定量检测方法的建立及应用

为探究不同品种羊Toll样受体MyD88通路重要接头分子在其肺组织中转录水平的差异,本研究建立了可用于分析不同品种羊Toll样受体MyD88信号通路接头分子MyD88、AP-1、NF-кB、TRAF6基因的TaqMan荧光定量PCR方法,并对该方法进行特异性、敏感性、重复性及应用性等性能评价。结果显示:建立的Toll样受体MyD 88通路接头分子4个基因的TaqMan探针荧光定量PCR方法具有较强特异性和较高灵敏度,组内重复和组间重复的变异系数均在5%以下,扩增效率均在90%～105%。将该方法初步应用于临床组织样本的检测,结果显示:NF-кB在黑山羊肺组织中转录水平极显著高于其余4种羊(p0.01);在白山羊、麻羊、湖羊和波尔山羊肺组织中MyD88和TRAF6的转录水平极显著高于AP-1和NF-кB基因的转录水平(p0.01)。本研究建立的方法为研究羊呼吸系统性疫病的发生与Toll样受体信号通路传导的关系奠定基础。     

撒坝猪源大肠埃希氏菌HPI对泛素蛋白酶体介导的TLR4/NF-κB信号通路关键因子表达的影响

为探讨撒坝猪源大肠埃希氏菌(E.coli)的耶尔森强毒力岛(HPI)对泛素蛋白酶体(UPS)介导的TLR4/NF-κB信号通路关键因子的影响,将猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)分为5组,空白对照组、HPI阳性株感染组、HPI阴性株感染组、HPI阳性株+MG-132组、HPI阴性株+MG-132组。于试验后的第4、6、12、24 h收集各组细胞,用试剂盒检测泛素蛋白酶体活性,荧光定量PCR法检测TLR4、MyD88、NF-κB和IκB-α的mRNA水平,ELISA法检测NF-κB、IκB-α及炎性因子IL-1和TNF-α含量。结果显示,IPEC-J2细胞感染E.coli后,与空白对照组相比,感染组中泛素蛋白酶体活性水平、TLR4、MyD88、NF-κB和IκB-α的mRNA水平及细胞炎性因子IL-1和TNF-α的蛋白含量总体上调,且HPI阳性株感染组均高于HPI阴性株感染组;用E.coli HPI感染经MG-132处理后的IPEC-J2细胞,泛素蛋白酶体活性下降,TLR4/NF-κB信号通路中关键因子的转录水平及炎性因子的蛋白含量下降,且低于空白对照组。试验结果表明撒坝猪源E.coli HPI能激活泛素蛋白酶体介导的TLR4/NF-κB信号通路,可通过上调TLR4、MyD88、NF-κB和IκB-α的mRNA水平,促进炎性因子IL-1和TNF-α的释放,诱发炎症反应。     

SE感染对雏鸡空回肠组织中TLR4信号转导通路及pIgR的影响

为了研究肠炎沙门菌(SE)对TLR4信号通路调节雏鸡空肠和回肠组织中多聚免疫球蛋白受体(pIgR)的影响,本试验以7日龄海兰褐雏鸡的空肠和回肠组织为主要研究对象,通过口服SE的方式感染雏鸡,于感染后的1,3,7和14d,检测雏鸡的空肠和回肠组织中TLR4信号通路下游因子MyD88、TRAF6、NF-B和pIgR mRNA表达。结果表明:雏鸡感染SE后,TLR4信号通路被激活,且空肠、回肠组织中pIgR mRNA的表达量升高(P<0.01),同时上调空肠和回肠组织中pIgR的蛋白水平。证实SE能够激活空肠和回肠黏膜细胞表面的TLR4信号通路并上调pIgR的表达,进而增强雏鸡的肠黏膜免疫。     

甘氨酸对奶山羊乳腺炎性应答的调节及其作用机制研究

本试验在体内条件下研究了甘氨酸对奶山羊乳腺炎性应答的调节及其信号通路的变化。选用15只泌乳期经产健康萨能奶山羊,分为对照组、脂多糖(LPS)模型组和3个甘氨酸干预组,每组3只,饲养管理程序一致。对照组奶山羊不注射LPS和甘氨酸,以1 mL生理盐水取代;LPS模型组奶山羊于左右乳区通过乳头管分别注射1 mL LPS溶液(4μg/乳区);3个甘氨酸干预组奶山羊分别按照1、5、25 g/(只·d)的剂量,于左右乳区通过乳头管分别注射0.5 mL甘氨酸,连续注射5 d,第6天在左右乳区通过乳头管注射1 mL LPS(4μg/乳区)。各组奶山羊在注射LPS或生理盐水24 h后屠宰取乳腺组织样。制作乳腺组织切片,苏木精-伊红(HE)染色后用于观察病理变化;采用实时定量PCR法检测乳腺组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)、Toll样受体(TLR)2、TLR4、TLR9、髓样分化因子88(MyD88)、β-干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)基因的表达水平;采用Western blotting法检测乳腺组织中核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达水平。结果显示:注射LPS 24 h后,3个甘氨酸干预组试验羊体温降至39.5℃以下。与LPS模型组相比,3个甘氨酸干预组炎性细胞侵润明显减少,乳腺细胞坏死程度明显减轻;高、中、低剂量甘氨酸干预均显著下调了IL-1β、IL-8和COX-2基因的表达水平(P<0.05),只有中剂量甘氨酸干预显著下调了IL-6、TNF-α基因的表达水平(P<0.05);高、中、低剂量甘氨酸干预均显著下调了TLR4基因的表达水平(P<0.05),只有中剂量甘氨酸干预显著下调了TLR2、TLR9基因的表达水平(P<0.05);高、中、低剂量甘氨酸干预均显著下调了MyD88基因的表达水平(P<0.05),同时低、高剂量甘氨酸干预还显著下调了TRIF基因的表达水平(P<0.05);高、中、低剂量甘氨酸干预均显著下调了核转录因子NF-κB p65蛋白的表达水平(P<0.05)。综上可知:1)甘氨酸通过下调TLR4及其下游关键信号分子MyD88和TRIF基因的表达,抑制转录因子NF-κB p65磷酸化,从而减少炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、COX-2的分泌。2)本研究初步阐明了甘氨酸通过抑制TLR-NF-κB信号通路从而抑制炎性细胞的激活或活性,阻止其炎症介质的释放,进而阻碍炎症反应过程实现。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良的影响

旨在研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过调控热休克蛋白HSP90的表达对肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)的影响。试验将120羽1日龄健康AA肉鸡预饲1周后随机分成3组:对照组、TD发生组和EGCG处理组。通过向基础日粮中添加药物的方式,分别对TD发生组和EGCG处理组雏鸡饲喂25mg/kg的福美双,诱发TD。从第3日起,对EGCG处理组雏鸡每天腹腔注射10mg/kg的EGCG。14d后,全部扑杀试验鸡。形态学检查肉鸡胫骨生长板发育状况;HE染色法观察生长板软骨细胞分化和血管生成变化;Real-time PCR和Western blot法分别检测HSP90基因和蛋白表达差异。结果显示,TD发生组雏鸡TD症状明显,HSP90基因和蛋白表达量均明显上升。EGCG处理组雏鸡TD症状明显缓解,HSP90基因和蛋白表达量显著下降;生长板软骨细胞分化和血管浸润显著恢复。由此推测,EGCG可能通过下调HSP90基因和蛋白在TD肉鸡软骨细胞中的表达,恢复TD胫骨病变区软骨细胞分化和血管生成,抑制TD发生,提高肉鸡健康状况。     

磷源对福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良及骨骼钙、磷代谢的影响

本试验旨在研究磷酸一二钙(MDCP)和磷酸氢钙(DCP)对福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)及骨骼钙、磷代谢的影响。选取1日龄科宝(Cobb)肉雏鸡120只,试验1～21 d采用2因子设计,按磷源的不同分为2个处理(磷源DCP和MDCP),每个处理60只鸡;试验22～42 d采用2×2因子设计,将每种磷源按福美双的添加水平不同再分为2个处理(福美双水平为0和100 mg/kg),每个处理3个重复,每个重复10只鸡。福美双组在基础饲粮中添加100mg/kg福美双,于22～28 d饲喂,然后换喂对应不含福美双饲粮。结果表明:1)MDCP组肉鸡第35天TD评分相对DCP组有降低的趋势(P=0.09),但磷源对肉鸡第28和42天TD评分影响差异不显著(P>0.05)。福美双显著升高了肉鸡第28、35和42天TD评分(P<0.05)。2)福美双和磷源对肉鸡第35天胫骨灰分、钙和磷含量交互效应显著(P<0.05)。福美双诱导条件下,MDCP组肉鸡第35天胫骨灰分、钙、磷含量显著高于DCP组(P<0.05)。3)DCP组第35天血清甲状旁腺素含量高于MDCP组(P=0.12)。由此可见,相对DCP,MDCP对福美双诱导的TD发生有一定减缓作用,且与肉鸡骨骼钙、磷代谢密切相关。2种磷源对肉鸡最终TD评分影响差异不显著。     

PCV2人工感染对猪肺泡巨噬细胞干扰素信号通路的调控研究

通过建立PCV2亚临床感染模型,探究感染仔猪肺泡巨噬细胞中干扰素的变化及其调控,为PCV2复制和发病机制研究提供补充。30日龄猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性的仔猪15头,随机分成PCV2阴性对照0d组、PCV2感染14d组和PCV2感染28d组。感染后荧光定量PCR方法检测肺泡巨噬细胞中干扰素、模式识别受体和模式识别受体接头分子mRNA水平。结果显示,IFN-β和IFN-γmRNA转录水平在14和28d均显著高于对照组(P0.05);模式识别受体RIG-1、MDA-5、TLR4和TLR9mRNA转录水平在14和28d显著升高(P0.05);DAI mRNA转录水平在14d显著升高(P0.05),但28d迅速下降;TLR3、TLR7和TLR8mRNA转录水平无明显变化。接头分子MAVS、MyD88、IRF3和IRF7mRNA转录水平在14和28d均显著高于对照组(P0.05)。以上结果表明,PCV2亚临床感染仔猪后导致肺泡巨噬细胞内IFN-β和IFN-γ的表达量上调,其上调和PCV2激活的TLR4/TLR9/MyD88和RIG-1/MDA-5/DAI/MAVS/IRF3信号通路有关。     

基于RAGE-TLR4串扰的高糖影响牛肺泡巨噬细胞促炎细胞因子释放的分子机制

本试验旨在研究高浓度葡萄糖对牛肺泡巨噬细胞（BAMs）促炎细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α释放的影响及其机制是否与RAGE-TLR4相关信号通路串扰有关。将BAMs随机分为正常糖组（NG）、高糖组（HG）、高糖+RAGE抑制剂组（H+F）、高糖+TLR4抑制剂组（H+T）及DMSO组,处理12 h后收集上清及下层细胞。采用qRT-PCR和Western blot检测细胞RAGE、TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA及蛋白表达情况,ELISA检测上清TNF-α、IL-1β、IL-6浓度。结果表明,高糖极显著上调RAGE、TLR4、MyD88和NF-κB p65基因、蛋白表达水平以及上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度（P<0.01）;RAGE抑制剂与TLR4抑制剂均极显著抑制高糖引起的RAGE、TLR4、MyD88和NF-κB p65基因、蛋白表达水平上调以及IL-1β、IL-6、TNF-α释放（P<0.01）,即RAGE与TLR4均在激活RAGE/TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路中发挥调控作用。综上所述,高糖能够通过RAGE-TLR4串扰引起牛肺泡巨噬细胞释放促炎细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α,进一步阐明了高糖促进牛肺泡巨噬细胞炎症反应的分子机制。     

紫锥菊通过调控TLR4-NF-κB通路增强免疫抑制鸡的免疫功能

紫锥菊是一种重要的免疫增强剂,常作为替抗药物用于饲料添加剂,但其作用机制有待进一步研究。本试验旨在研究紫锥菊对免疫抑制鸡免疫功能的影响及其机制。将120羽7日龄的雏鸡随机均分为：对照组、环磷酰胺组、紫锥菊组、紫锥菊+环磷酰胺组(联合组)。环磷酰胺组和联合组雏鸡连续3 d胸肌注射生理盐水配制的环磷酰胺溶液(80 mg·kg^-1),同时对照组和紫锥菊组连续3 d注射等量生理盐水,除紫锥菊组和联合组每天饲喂含紫锥菊全草粉末(含量为1%)的基础日粮外,其余各组雏鸡饲喂基础日粮,每天称重并记录,连续饲喂21 d。试验结束时,分析体重及脾脏指数的变化,检测炎性因子(NF-κB、IκB、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ)和TLR家族(TLR2、TLR4、TLR7、MyD88)基因mRNA及蛋白的表达含量。结果显示,紫锥菊处理提高了雏鸡的生长性能,环磷酰胺抑制了雏鸡的生长并显著降低了脾脏系数(P<0.05),且环磷酰胺组脾组织病理变化明显,而在联合组中上述病理变化得到缓解。与对照组相比,环磷酰胺组的NF-κB、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TLR2、TLR4、TLR7、MyD88的mRNA水平均显著下调(P<0.05、P<0.01或P<0.001),而联合组相比于环磷酰胺组,除TLR7外,上述基因mRNA表达量均显著上调(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。此外,紫锥菊的添加显著提高了炎性因子和TLR家族相关蛋白的表达水平。结果表明：紫锥菊可通过调控TLR4/NF-κB通路增强免疫抑制鸡的免疫功能。     

巴戟天多糖对胫骨软骨发育不良的肉鸡生产性能、胫骨指数、胫骨钙磷灰分和血清电解质的影响

目的旨在探究巴戟天多糖（Morinda officinalis How polysaccharides,MOP）对福美双诱导的胫骨软骨发育不良（tibial dyschondroplasia,TD）肉鸡生产性能、胫骨指数、胫骨钙磷灰分和血清电解质的影响。方法选取1日龄健康AA肉仔鸡120只,随机分为3组,每组4个重复,每个重复10只肉鸡。对照组（CON组）饲喂基础日粮;福美双诱导TD组（TD组）饲喂基础饲料,在第4天到第7天的饲料中添加100 mg/kg的福美双进行TD模型建立;巴戟天多糖组（MOP组）在接受TD造模处理后,在第7天到第15天的饲料中添加400 mg/kg的巴戟天多糖。结果与CON组相比,从试验开始到试验第7天,TD组肉鸡的平均采食量和平均日增重显著（P<0.05）降低,料肉比增加（P>0.05）;在试验第7天、第11天和第15天时,TD组肉鸡的胫骨生长板宽度和生长板宽度系数显著（P<0.05）增加,胫骨重量和胫骨长度显著（P<0.05）降低,胫骨重量指数降低（P>0.05）,胫骨灰分含量显著（P<0.05）降低,并且血清中电解质紊乱;与TD组相比,在试验第11天和第15天时,MOP组肉鸡的料肉比有降低的趋势（P>0.05）,MOP组肉鸡的生长板宽度和生长板宽度系数显著降低（P<0.05）,胫骨重量、胫骨长度和胫骨重量指数均显著（P<0.05）提高;在试验第11天时,MOP组肉鸡的胫骨灰分含量显著（P<0.05）提高;随着试验时间的延长,MOP组肉鸡的血清电解质含量趋于平衡。结论饲料中添加巴戟天多糖可以有效缓解和改善由福美双诱导的肉鸡TD症状。     

福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良软骨细胞凋亡

为研究肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)软骨细胞的凋亡分布及凋亡相关基因的表达水平,将80羽1日龄健康AA肉鸡基础日粮饲养1周后,随机分为对照组和处理组,处理组饲喂添加100mg·kg-1福美双的日粮,采用HE染色和TUNEL法分别对肉鸡胫骨生长板软骨细胞的形态学和凋亡情况进行观察,同时采用Real-time PCR方法和免疫组化技术分别对软骨细胞中凋亡相关基因的mRNA转录水平及蛋白质表达水平进行检测。结果显示,福美双诱发TD后第1、2、4和6天,肉鸡生长板软骨栓形成逐渐增大,异常软骨细胞增加,TD病变区软骨细胞,尤其是肥大区软骨细胞凋亡程度明显增加。Real-time PCR检测结果显示,与对照组比较,TD生长板促凋亡基因Bax在试验第1、2、4和6天表达量极显著上调(P0.01);Caspase-3在第1、2和4天表达量极显著增加(P0.01);抗凋亡基因BAG-1表达下调,在试验第1和2天差异极显著(P0.01)。免疫组化结果显示,第1和4天处理组Bax的蛋白表达量明显高于对照组。本研究提示肉鸡TD生长板软骨细胞凋亡与促凋亡基因的表达增强和抗凋亡基因的表达下降有关。     

嗜酸乳杆菌在预防雏鸡溃疡性结肠炎发生中的作用及其机制

为了探索嗜酸乳杆菌在预防溃疡性结肠炎(UC)发生中的作用及其机制,本研究将75只1日龄SPF雏鸡随机分成对照组(C组)、模型组(UC组)和嗜酸乳杆菌预防组(LA+UC组),应用RT-PCR、H.E.染色和ELISA等方法对各组雏鸡结肠组织TLR2和My D88 mRNA表达量和组织学变化,血清中IL-8和IL-10含量进行检测。结果显示,嗜酸乳杆菌预防组雏鸡结肠组织TLR2、My D88 mRNA表达以及血清中IL-8含量均极显著(P0.01)低于模型组雏鸡,显著(P0.05)高于对照组雏鸡;血清中IL-10含量极显著高于模型组和对照组雏鸡。研究表明,嗜酸乳杆菌可以通过调节血清中IL-8和IL-10的含量,预防和缓解雏鸡UC的发生和发展,而这一作用可能是通过TLR2/My D88信号传导通路进行调节。     

马链球菌对树突状细胞Toll样受体和MyD88及细胞因子mRNA表达的影响

为探究马链球菌马亚种(Streptococcus equi subsp.equi,S.equi)对小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow derived dendritic cells,BMDCs)TLR1、TLR2、TLR6、MyD88、IL-1、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA表达的影响,用GM-CSF、IL-4细胞因子刺激小鼠骨髓细胞使其诱导分化成未成熟的BMDCs,感染S.equi后16、20、26h,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测感染组及未感染组细胞TLRs、MyD88和细胞因子mRNA的表达情况。结果显示,S.equi感染BMDCs后16、20、26h,TLR1、TLR2、TLR6、MyD88mRNA的表达量均显著或极显著的高于未感染组(P0.05或P0.01)。S.equi感染DCs后16、26h,IL-1的分泌量较未感染组没有变化(P0.05),IL-10、TNF-α的分泌量显著或极显著增加(P0.05或P0.01)。IL-6在S.equi感染DCs后16h的分泌量显著增加(P0.05),但感染后26h无显著变化(P0.05)。IL-12在S.equi感染DCs后16h的表达没有变化(P0.05),但感染后26h分泌量有所增加(P0.05)。说明S.equi具有调节DCs TLRs、MyD88和细胞因子表达的能力,从而介导机体的免疫应答反应。     

猪CISH基因过表达对IL-6和TNF-α基因mRNA的表达调控研究

为了分析猪细胞因子诱导的含SH2结构域蛋白(CISH)基因对白细胞介素6(IL-6)和α肿瘤坏死因子(TNF-α)等基因表达的调控,深入研究CISH基因的生物学功能,试验采用猪CISH基因过表达质粒pcDNA-CISH瞬时转染PK-15细胞,利用Real-time PCR技术分析了CISH过表达对相关基因表达量的影响。结果表明:在PK-15细胞中,CISH基因过表达并没有引起TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α等基因相对表达量的显著改变;细菌脂多糖(LPS)刺激PK-15细胞后,IL-6、TNF-α和TLR4等基因的相对表达量极显著上调(P0.01);LPS刺激CISH基因过表达的PK-15细胞后,IL-6基因的相对表达量显著上调(P0.05)。说明在LPS的刺激下,CISH过表达可以上调IL-6基因的相对表达量。     

猪MyD88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价

髓性分化因子88(MyD88)作为TLRs/IL-1R信号通路中重要的接头蛋白,在免疫应答和疾病防御中起重要作用,作者拟通过慢病毒介导的RNA干扰技术获得MyD88基因沉默的猪小肠上皮细胞,为致病菌引起肠道疾病机制研究提供有效模型。共构建4个靶向猪MyD88基因的shRNA表达载体和1个MyD88基因高表达载体,通过实时荧光定量PCR方法鉴定瞬时共转染293细胞中MyD88基因转录水平,筛选获得干扰猪MyD88基因效率最高的shRNA表达载体,将其包装成慢病毒载体,用于建立MyD88基因稳定沉默的猪小肠上皮细胞。最终成功获得MyD88基因沉默效率达到69.3%的小肠上皮细胞,达到基因功能分析的要求。MyD88基因稳定沉默猪肠上皮细胞的获得,为猪肠道病原微生物所引起的TLRs/IL-1R信号通路作用机制的研究提供了宝贵材料。