鸡传染性支气管炎可疑病料的病毒分离及初步鉴定

１９份鸡传染性支气管炎（ＩＢ）可疑病料通过ＳＰＦ鸡和鸡胚感染试验、血凝（ＨＡ）试验、气管环培养（ＴＯＣ）感染试验、单克隆抗体（Ｍａｂ）ＥＬＩＳＡ和电镜形态学观察，初步证明其中１３份病料含ＩＳ病毒（ＩＢＶ）．在用其中９份接种８～９周龄ＳＰＰ鸡进行的发病试验中，全部呈现临床症状，其中３份引起病死亡率（６０～８０％），接种后５周从存活鸡采血作ＩＢＶ血凝抑制（ＨＩ）试验，结果均为阳性．     

鸡传染性法氏囊病的快速诊断

应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体及其荧光标记物，对接种ＩＢＤ疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验、斑点酶联免疫吸附试验和琼脂扩散试验三种检测方法的比较，结果表明，鸡接种疫苗后１０天内ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性反应，而ＡＧＰ只在接种后６－８天的样品中检出抗原。２２例人工感当鸡和４０例自然发病鸡组织的检测结果表明，ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的敏感性基本一致，且高于ＡＧＰ，它们的     

腺胃型鸡传染性支气管炎病毒Hu98株的分离鉴定

１９９８年首次从哈尔滨市某鸡场鸡腺胃肿大为特征的病例中分离到ＩＢＶ－Ｈ９８毒株。将该病毒株接种ＳＰＦ鸡胚并传至５代（Ｆ５）,结果接种胚出现规律性死亡和典型胚胎病变特征,ＥＩＤ５０为１０＾－６．４０／０．２ｍＬ。ＩＢＶ－Ｈｕ９８Ｆ５感染ＳＰＦ鸡胚尿囊液经负染电镜观察,可见直径为８０￣１２０ｎｍ、有囊膜和纤突的冠状病毒粒子。用ＩＢＶ－Ｈｕ９８Ｆ５毒株人工感染１日龄ＳＰＦ鸡能引起与自然病例相似的病理组织     

山东省鸡新城疫病毒弱毒株的初步分离

某鸡场饲养的罗曼产蛋鸡群爆发了典型的新城疫,采集病料接种１１日龄ＳＰＦ鸡胚进行病毒分离。经致鸡胚病变,回归试验、血凝和血凝抑制试验结果表明,所分离到的病毒系鸡新城疫病毒弱毒株,定名为ＮＤＶ－Ｓ１。     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ     

鸡传染性支气管炎血凝抑制试验方法标准化的研究

鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗体的血凝抑制（ＨＩ）试验方法经标准化后，检测ＳＰＦ鸡血清ＩＢＶ感染鸡血清以及野外样品的结果表明，具有快速，特异，敏感，稳定等优点。标准化的实现主要通过抗原冻干和鸡红细胞醛化，从而取得较为满意的结果。     

鸡传染性支气管炎血凝抑制试验方法标准化的研究

鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗体的血凝抑制（ＨＩ）试验方法经标准化后，检测ＳＰＦ鸡血清ＩＢＶ感染鸡血清以及野外样品的结果表明，具有快速、特异、敏感、稳定等优点。标准化的实现主要通过抗原冻干和鸡红细胞醛化，从而取得较为满意的结果。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒弱毒株的选育

从南京地区分离的肾病变型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）经ＳＰＦ鸡胚连续传代至６５代时,对雏鸡无致病性,命名为ＩＢＶ－ＡＴ６５,感染鸡胚的ＥＩＫ５０为１０＾－７．６６/０．２mＬ,鸡胚于接种后５１h开始死亡,存活鸡胚表现为发育受阻、卷缩,肾脏有尿酸盐沉积,其尿囊液对１％鸡红细胞凝集反应为阴性。用ＡＴ６５原液０．２mＬ分别于气 管内接种１０日龄ＡＡ鸡（攻毒前经血凝抑制试验检测ＩＢＶ抗体为阴性）,以及攻毒后将     

4株鸡IBD活疫苗对鸡ND免疫抗体的影响

４株不同毒力鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）活疫苗,分别接种３０ｄＳＰＦ公维,４ｄ后再接种鸡新城（ＮＤ）Ｌａｓｏｔａ系活疫苗,同时每组捕杀５只,观察法氏囊损伤情况,另４组用同１天的ＳＰＦ公无接种ＮＤ－Ｌａｓｏｔｑ系疫苗４天后再接种不同毒力的ＩＢＤ疫苗。试验结果表明,４株ＩＢＤ活疫苗对雏鸡法氏囊不同程度损伤,并且对ＮＤ免疫抗体产生有明显抑制作用。     

DNA免疫防制鸡传染性支气管炎的探索研究

ＯＲＦ完整的ＩＢＶ类Ｍ４１株Ｓ１基因ｃＤＮＡ插入真核表达质粒ｐＣＩ ＣＭＶ启动子下游我隆位点，构成ｐＣＩＳ１用于１周龄ＳＰＦ雏鸡的ＤＮＡ免疫试验。试验鸡生疏腿部肌肉注射ｐＣＩＳ１ＤＮＡ１００ｇ，２周后加强免疫一次。二次免疫２周后，代感染ＩＢＶ Ｈ５２株。结果，ＩＢＶ人工感染后第４天气管－泄殖腔棉拭子鸡胚病毒分离阳性者，免疫试验组为１／６，而对照组为６／６，鸡胚病毒中和试验显示，二次免疫后临感染前及     

禽流感RT-PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查     

鸡法氏囊国外弱毒病毒的分离与鉴定（初报）

我们对国外引入的ＩＢＤ弱毒疫苗进行了分离，复制和测定，该病毒可接种ＳＰＦ鸡胚增殖，致难胚死亡，并产生ＩＢＤ病变；在ＳＰＦ鸡胚ＣＦＦ上繁殖，产生ＣＰＥ变化，并可被行异性ＩＢＤ抗血清中和；琼脂扩散与ＩＢＤ（＋）血清有明显的沉淀线，因此说明所分离的毒株是ＩＢＤ病毒，并测得其毒价为１０＾－６ＴＣＩＤ５０。     

腺胃病变型鸡传染病支气管炎病毒分离株（IBV—D971）对SPF？…

用腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株ＩＢＶ－Ｄ９７１毒株接种１日龄ＳＰＦ鸡,可引起６０％死亡。该毒在ＳＰＦ鸡体传２代后,接种１日龄ＳＰＦ鸡,可引起１００％死亡。对人工感染病例进行了系统的病理学观察,主要的眼观病理变化为腺胃胃壁增厚,乳头消失或乳扁平,乳头顶部凹陷坏死,肾肿大,尿酸盐沉积。     

鸡肾型传染性支气管炎抗体研究

将鸡肾型ＩＢＶ ＡＳ分离株的鸡胚尿囊液毒接种２８日龄ＳＰＦ鸡，并采用该毒株制备油乳剂活苗进行二免和三免，采集不同免疫期的鸡血样，用间接酶联免疫吸附试验检测了血清ＩＢＶ抗体产生的动态变化。结果表明，接种８ｄ后，血清抗水平显著升高，在１２ｄ时基本达到峰值，二免、三免两周后鸡群血清抗体水平首免１２ｄ的血清抗体水平平均无明显升高。三免后的血清抗体血凝抑制效价达到６－９１ｏｇ２，暗示了该免疫期的鸡血清可用于     

禽流感病毒人工感染鸡抗体的监测及血凝素分型血清的制备

从英国中心兽医实验室引进禽流感病毒１４种凝素亚型的标准毒株，经９－１１日龄的ＳＰＦ鸡胚增殖，传代后收取感染鸡胚的羊水及尿囊液，经１０００ｘｇ离心１５分种后，收取上清作为免疫原。取８保１２周龄ＳＰＦ鸡分成Ａ，Ｂ两组，进行人工感染鸡的抗体消长规律试验。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

几种法氏囊活疫苗对鸡法氏囊损伤及免疫抑制作用的比较

探讨了鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）活疫苗对鸡新城疫活苗免疫的影响。将四种ＩＢＤ活苗分别接种３０日龄ＳＰＦ公雏,４天后再免疫鸡新城疫ＬａＳｏｔａ系活疫苗,同时法氏囊损伤情况。试验结果表明,所选ＩＢＤ活疫苗对雏鸡法氏囊均有不同程度地损伤,并且诱导产生ＮＤ－ＨＩ抗体的时间被推迟。     

鸡传染性法氏囊病病毒的提纯和鉴定

将临床分离的疑似鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）山东分离株，人工接种４０～５０日龄ＳＰＦ鸡，取死亡鸡法氏囊和脾脏，用匀浆器制备组织悬液，并经低温反复冻融４次，离心取上清液，ＰＥＧ沉淀，再经蔗糖梯密度离心进一步纯化。经电镜观察、吸光度测定和琼脂扩散试验，结果表明，分离物为ＩＢＤＶ。     

提高鸡传染性支气管炎病毒血凝抗原滴度途径及抗原灭活

将７株传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准株（Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈｏｌｔｅ、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｉｏｗａ６０９和Ｔ株）和６株分离株（ＮＩＢＶ、ＧＩＢＶ、Ｍ、ＳＨ、Ｊ和Ｈ株）分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经浓缩后，用魏氏梭菌培养液处理，制备血凝抗原。其中，Ｈ１２０株血凝滴度最高，Ｔ、Ｍ、Ｊ和Ｈ株无血凝性。应用含有不同滴度ＩＢＶ母源抗体的鸡胚增殖病毒制备抗原，效价与用ＳＰＦ鸡胚增殖病毒制备的抗原效价一致。尿囊液经反复冻融后再制备抗原会使血凝价降低。抗原分别用甲醛、高碘酸钠、硼氢化钾和ＳＤＳ灭活，其中甲醛灭活效果最理想。抗原对氯仿敏感，对乙醚稳定。适宜浓度的Ｎａ＋、Ｍｇ２＋可显著提高抗原的血凝性