复方乙肝解毒丸抗DHBV的研究Ⅱ．治疗效果及病理形态观察

用ＤＨＢＶ阳性血清经腹腔感染雏鸭后，药物试验组与对照组ＤＨＢＶ感染率分别为６７．６１％、６５．５２％。经复方乙肝解毒丸治疗２个月后，采集血清作ＤＨＢＶ－ＤＮＡ斑点杂交试验。结果，药物试验组与对照组转阴率分别为３４．０４％、７．８９％。两组有显著差异。鸭乙肝病毒与人乙肝病毒同属嗜肝ＤＮＡ病毒，本实验结果为临床治疗乙肝患者提供了可靠依据。     

鸭乙型肝炎病毒的致病性及致癌性研究──Ⅲ．单克隆抗体夹心ELISA检测血清中鸭乙型肝炎病毒表面抗原的研究

以５Ｂ８株抗ＤＨＢｓＡｇ特异性单克隆抗体作为包被抗体和酶标抗体，首次建立了检测血清中ＤＨＢｓＡｇ的单抗夹心ＥＬＩＳＡ．对纯化ＤＨＢｓＡｇ的最小检出量为１０ｎｇ／ｍｌ．对雏鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒等９种禽类常见的病毒病抗原及人乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）均不发生反应，且能被多克隆的兔抗ＤＨＢｓＩｇＧ及５Ｂ８株单抗本身所阻断。应用本试验方法调查江苏省部分地区麻鸭ＤＨＢＶ的感染率分别为：高邮２４．５％、常州２１．７％、仪征４０．３％、启东５０．０％。１日龄雏鸭静脉接种ＤＨＢＶ后，经本法检测，结果ＤＨＢｓＡｇ阳性率从４０％上升到７９％，６个月后又下降至６９％。     

夹心ELISA和斑点杂交试验检测鸭血清中鸭乙型肝炎病毒的比较

用单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ和斑点杂交试验分别对４６例鸭血清样品中的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）和鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ进行平行检测，并根据夹心ＥＬＩＳＡ测定的Ｐ／Ｎ值和斑点杂交试验的反应斑点进行薄层扫描所测定的峰面积值，比较了１９例带毒鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ和ＤＨＢＶＤＮＡ的相对含量。结果表明，两种试验的结果判定具有高度一致性。ＤＨＢｓＡｇ与ＤＨＢＶＤＮＡ在带毒鸭血清中呈并存关系，但其含量相关不显著（Ｐ＞０．０５）。     

鸭乙型肝炎病毒的致病性及致癌性研究

以５Ｂ８株抗ＤＨＢｓＡｇ特异性单克隆抗体作为包被抗体和酶标抗体，首次建立了检测血清中ＤＨＢｓＡｇ的单抗夹心ＥＬＩＳＡ，对纯化ＤＨＢｓＡｇ的最小检出量为１０ｎｇ／ｍｌ，对雏鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒等９种禽类常见的病毒病抗原及人乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）均不发生反应，且能被多克隆的兔抗ＤＨＢｓＩｇＧ及５Ｂ８株单抗本身所阻断。应用本试验方法调查江苏省部分地区麻鸭ＤＨＢＶ的感染率分别为：高邮２４．５％、常     

鸭自然感染传染性法氏囊病病毒的调查

用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心阻断ＥＬＩＳＡ试验对采自三种不同鸭群的３８０份血清进行ＩＢＤＶ抗体检测，抗体阳性率分别为，农村散养鸭１００％，农场圈养鸭２９．９％，市场贩运鸭９５．４％，总阳性率为９５．５％，抗体效价为１２～１０４。这一结果不仅表明在我国ＩＢＤＶ传染已到了非常高的程度，而且揭示了鸭在ＩＢＤ病原生态和传播中可能起重要作用。     

鸭自然感染传染性法氏囊病病毒的调查

用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心阻断ＥＬＩＳＡ试验对采处三种不同鸭群的３８０份血清进行了ＩＢＤＶ抗体检测，抗体阳性率分别为：农村散鸭１００％，农场圈养鸭２９．９％，市场贩运鸭９５．４％，总阳性率为９５．５％，抗体效价为１＾２～１０＾４，这一结果不仅表明在我国ＩＢＤＶ传染已到了非常高的程度，而且揭示了鸭在ＩＢＤ病原生态和传播中可能起重要作用。     

黄曲霉毒素B1和乙型肝炎病毒在鸭肝炎,肝癌发生,发展过程中的意义

以ＤＨＢＶ－ＤＮＡ斑点杂交检测鸭血清中病毒，分别给予一定量的ＡＦＢ１，定期剖杀观察肝脏变化及肝癌发生，并在饲料中加硒观察了ＡＦＢ１诱癌的预防效应，实验结果ＤＨＢＶ阳性实验组的肝脏病变重于ＤＨＢＶ阴性实验组：ＤＨＢＶ阴性加ＡＦＢ１组病变重于ＤＨＢＶ阳性对照组，ＤＨＢＶ阴性加ＡＦＢ１线病变重于ＤＨＢＶ阴性对照组，而ＤＨＢＶ阳性高毒组与ＤＨＢＶ阳性高毒加硒组之间，以及ＤＨＢＶ阴性高毒组与ＤＨＢＶ阴性高毒     

家禽血清,卵黄和牛乳清中HBV标志物与人HBV—DNA的关系

应用反向间接血凝试验（ＲＰＨＡ）、酶免疫测定（ＥＩＡ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）测定了家禽血清、卵黄和牛乳清中ＨＢＶ标志物及人ＨＢＶ－ＤＮＡ。经ＲＰＨＡ测定发现，ＨＢｓＡｇ阳性率分别为４８／２０５（鸡血清），９／３１（鸭血清），３１／１０７（鸡卵黄）和５／３５（牛乳清）；在ＥＩＡ测定中，ＨＢｓＡｇ的阳性率和滴度均低于ＲＰＨＡ法，而且还发现其他ＨＢＶ标志物（ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｅＡｂ和ＨＢｃＡｂ）阳性的样品。对其中阳性样品应用ＰＣＲ测定ＨＢＶ－ＤＮＡ，结果全部阴性。此外，在ＲＰＨＡ测定中，经热处理的样品中５６．９９％由阳性转阴性；ＲＰＨＡ－ＨＩ测定中，人的阳性对照组明显地被抑制，而畜禽的阳性样品几乎均不能被抑制。根据上述结果，提示存在于家禽血清等样品中的ＨＢＶ标志物可能是由非特异性因素和／或其他交叉抗原所引起，而与人ＨＢＶ无关。     

黄曲霉毒素B_1和乙型肝炎病毒在鸭肝炎、肝癌发生、发展过程中的意义

以ＤＨＢＶ－ＤＮＡ斑点杂交检测鸭血清中病毒。分别给予一定量的ＡＦＢ１，定期剖杀观察肝脏变化及肝癌发生。并在饲料中加硒观察对ＡＦＢ１诱癌的预防效应。实验结果ＤＨＢＶ阳性实验组的肝脏病变重于ＤＨＢＶ阴性实验组；ＤＨＢＶ阴性加ＡＦＢ１组病变重于ＤＨＢＶ阳性对照组；ＤＨＢＶ阴性加ＡＦＢ１组病变重于ＤＨＢＶ阴性对照组。而ＤＨＢＶ阳性高毒组与ＤＨＢＶ阳性高毒加硒组之间，以及ＤＨＢＶ阴性高毒组与ＤＨＢＶ阴性高毒加硒组之间无明显差异。提示硒在本实验中无明显预防效应。     

中药复方治疗感染DHBV麻鸭的研究

本研究以人工感染鸭乙型肝炎病毒（ Ｄ Ｈ Ｂ Ｖ）的麻鸭为实验模型，用两组中药复方进行体内抗病毒实验研究。结果表明：１实验结束时，两个治疗组麻鸭的平均体重增长值显著高于对照组（ Ｐ＜ ０００１），而平均肝重显著低于对照组（ Ｐ＜ ０００１），肝系数也显著小于对照组（ Ｐ＜ ０００１）；２两个治疗组麻鸭随着服药时间的延长， Ｄ Ｈ Ｂ Ｖ 转阴率持续增加，实验结束时转阴率均分别显著高于对照组（２９２７％ 与３０５６％ ８１１％ ， Ｐ＜ ００５）；而且未出现 Ｄ Ｈ Ｂ Ｖ 转阴后又转阳现象。提示这两组中药复方不仅具有抗病毒的作用，而且药物安全、药效稳定，且有较好的治疗效果；建议试用于临床治疗乙型肝炎。     

禽鸟源传染性腔上囊病病毒分离株对鸡的致病性试验

用鸡、鸭、麻雀３种不同源性传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）分离株人工感染８０日龄的ＳＰＦ鸡，初步试验发现，这些病毒均能使接种鸡的腔上囊明显萎缩，组织切片见淋巴滤泡萎缩，坏死，从人工感染的鸡腔上囊组织中可检测和分离到ＩＢＤＶ。各试验组的腔上囊指数值分别为：鸡２．８３，鸭３．１４，麻雀３．６４，对照组５．１１。经统计学分析（ｔ检验）３个攻毒组与对照组间均有显著差异。     

应用葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测鸭肝炎病毒的研究

用提纯的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）免疫家兔制备高免血清，常规方法提取ＩｇＧ，与１％葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）阳性菌悬液混合，以ＰＨ７．２０．２ｍｏｌ／ＬＰＢＳ作缓冲液，制成鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）ＳＰＡ协同凝集试验（ＳＰＡ－ＣｏＡ）诊断试剂，同时制备阴性对照试剂。用ＳＰＡ－ＣｏＡ检测人工感染致死的雏鸭肝脏、含ＤＨＶ强毒的鸭胚液、适应鸡胚的疫苗毒鸡胚尿囊毒的检出率均为１００％。用ＳＰＡ－ＣｏＡ检测强毒时，样品     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。     

用 Digoxigenin 标记核酸探针检测 EDS-76 病毒核酸的研究

用ＥＤＳ７６病毒标准ＡＶ１２７株和分离株（Ｂ９６株）感染鸭胚，提取病毒核酸，分别经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切，获得图形和大小相似的酶切片段。分别进行ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ单酶切，也得到相似结果。病毒ＤＮＡ经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切后，与ＰＵＣ１９质粒载体重组，并转化到ＥｃｏｌｉＪＭ１０１中，筛选出一个插入片段（Ｇ片段）约为２７ｋｂ的重组质粒。用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｍｉｎ标记ＥＤＳ７６ＤＮＡＧ片段（ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切片段）及含该片段的重组质粒分别制备探针，对ＥＤＳ７６病毒ＤＮＡ进行斑点杂交，两种探针均为阳性，而对照组ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＤＶ正常鸭胚尿囊液的核酸为阴性。且后一种探针的敏感性高于前者，它的ＤＮＡ检出限量为４ｐｇ水平。结果表明，两种探针具有高度的特异性、敏感性。     

减蛋综合征病毒末端片段的克隆及细胞内DNA重组

采用９～１０日龄非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２毒株,经差速离心法浓缩纯化后,提取病毒基因组ＤＮＡ。采用碱变性法除去病毒基因组共价结合的末端蛋白（ＴＰ）。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解纯化的ＥＤＳＶ基因组ＤＮＡ。经低熔点琼脂糖凝胶电泳后,回收Ｃ、Ｄ、Ｅ片段。克隆到ｐＵＣ１９载体的ＨｉｎｄⅢ和ＳｍａⅠ双酶切位点及ＨｉｎｄⅢ位点上,经蓝白斑筛选和单、双酶切鉴定,获得了ｐＵＨＣ、ｐＵＨＤ、ｐＵＨＥ重组质粒,其中ｐＵＨＣ含有末端片段。将ＥＤＳＶＳａｌⅠ水解产生并回收的大片段与ｐＵＨＣ在９５℃水浴中变性,６５℃复性后,用钙离子介导法,共转染５０％～７０％的单层鸭胚成纤维细胞,转染后３６ｈ开始产生细胞病变（ＣＰＥ）。４８ｈ后将病变细胞反复冻融,经尿囊腔接种９～１０日龄鸭胚,回收的尿囊液能凝集鸡红细胞,这种血凝性能被ＥＤＳＶ高免血清抑制,电镜下观察到腺病毒样颗粒。     

传染性法氏囊病病毒的生态学与流行病学研究

血清学调查结果表明,麻雀、鸭、鹅等均可自然感染传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）,其血清阳性率分别为７．４％（４／５４）,９５．５％（３６３／３８０）和９．４％（１１／１１７）。从鸭和麻雀分离到的ＩＢＤＶ可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞,并产生ＣＰＥ,对ＳＰＦ鸡有致病性。病毒核酸和结构蛋白的电泳分析结果表明,鸡源、鸭源和麻雀源ＩＢＤＶ均有２条核酸带,５条蛋白带,毒株间的病毒核酸及结构蛋白电泳迁移率无显著差异,但其结构蛋白的相对含量不尽一致。经鉴定,鸡源、鸭源和麻雀源ＩＢＤＶ均属血清Ⅰ型,为同源病毒。本研究结果提示,鸡并非是ＩＢＤＶ的唯一自然动物宿主,非鸡禽鸟类宿主的存在可引起ＩＢＤ的传播和续源流行,也为ＩＢＤＶ的变异提供了特殊的生态条件,成为诱导ＩＢＤＶ变异的另一重要因素。     

光敏生物素标记EDSV—DNA探针检测鸡减蛋综合症（EDS）的研究

应用光敏生物素标记ＥＤＳＶ－ＤＮＡ与ｐＵＣ１９重组质粒ＤＮＡ做探针，检测人工发病减蛋综合症蛋鸡的粪便，蛋，输卵管样品，以新城疫病毒（ＮＤＶ），传染性病毒（ＩＢＤＶ），传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ），包涵体肝炎病毒（ＩＢＨＶ）作对照。实验结果显示：探针能特异地检出ＥＤＳ病鸡粪便，输卵管，蛋清样品中的病毒，与ＮＤＶ，ＩＢＤＶ，ＩＢＶ及ＩＢＨＶ均呈阴性反应。探针灵敏度达１０ｐｇＥＤＳＶ－ＤＮＡ。     

兔病毒性出血症蜂胶佐剂组织灭活苗的免疫效果

用ＰＭＶＲＶＨＤ和ＶＲＶＨＤ分别免疫家兔，用Ｅ－玫瑰花环形成试验测定细胞免疫水平（Ｔｃ），用微量血凝抑制试验（ＨＩ）进行体液免疫水平测定。并于免疫后期（第１６５ｄ和第１８７ｄ），用ＲＶＨＤ强毒对不同家兔分别进行攻击试验。结果发现：ＰＭＶＲＶＨＤ组（Ａ组）家兔Ｅ－玫瑰花环形成率显著高于ＶＲＶＨＤ组（Ｂ组）（Ｐ＜０．０１）；Ａ组家兔血清ＨＩ值极显著地高于Ｂ组（Ｐ＜０．０１）。同时，试验组家兔的细胞免疫先于体液免疫出现。在第１８７ｄ的攻击试验中，Ａ组家兔全部健活，Ｂ组家兔死亡２只，其余５只则有不同程度的发热表现。结合细胞免疫和体液免疫的测定结果，认为ＰＭＶＲＶＨＤ对家兔的免疫效果比ＶＲＶＨＤ更好。     

传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆和鉴定

以鸡胚成纤维细胞培养ＩＢＤＶ弱毒疫苗株Ｄ７８，经蔗糖密度梯度离心纯化，电镜下见典型ＩＢＤＶ粒子。用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒基因组，低熔点胶回收，琼脂糖凝胶电泳，可见ＩＢＤＶ典型双节段基因组。根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列，设计并合成了１对特异扩增ＩＢＤＶＶＰ２基因的引物。以ＩＢＤＶ基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出了１．５ｋｂ的ｃＤＮＡ产物，将ＰＣＲ产物适当处理后与经ＳｍａⅠ酶切的ｐＵＣ１９质粒平端连接，转化大肠杆菌ＤＨ５α，在含Ａｍｐ、Χ－ｇａｌ和ＩＰＴＧ的琼脂平板上培养，产生大量白色菌落。挑取白色菌落，经质粒大小比较分析初步筛选到一重组质粒。以重组质粒ＤＮＡ为模板作ＰＣＲ检测和部分酶切分析证实，该质粒为含Ｄ７８ＩＢＤＶＶＰ２基因的重组ｐＵＣ１９     

传染性法氏囊病病毒的生态学研究：非鸡禽鸟类自然感染传染性法…

用传染性法氏囊病病毒单克隆抗体夹心阻断ＥＬＩＳＡ对麻雀，鸭，鹅进行了ＩＢＤＶ血清学调查，麻雀的阳性率为７．４％，鸭的阳性率为９５．５％，鹅的阳性率为９．４％。表明ＩＢＤＶ传播已非常广泛，提示麻雀，鸭，鹅特别是鸭在ＩＢＤＶ生态和传播中可能 起重要作用。