口蹄疫病毒Asia—I型灭活的研究

本研究将适应ＢＨＫ２１细胞培养的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）亚洲Ｉ型（Ａｓｉｓａ－Ｉ）用胺类衍生物作灭活剂进行灭活试验。灭活毒经细胞连续传代检测未产生致细胞病病作用；经接种实验动物观察，无致细胞病作用且有良好的免疫原性。     

口蹄疫嵌合病毒疫苗的研究

口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）ＶＰ１（１３２－１５９位残基）的Ｇ－Ｈ环是病毒粒子表面的主要特征，它在疫苗效力，抗原变异和细胞结合中起着主要作用。我们用ＦＭＤＶ的感染性ｃＤＮＡ构建一种Ａ血清型病毒，在该病毒中，其Ｇ－Ｈ环被Ｏ或Ｃ血清型病毒的同源序列取代。这种嵌合病毒的复制滴度高，并表现与野毒相似的噬斑形态。由此证明，Ｇ－Ｈ环可在血清型之间交换。单克隆抗体分析表明，环内所含抗原表位可被转移至嵌合体，并保持由Ａ     

口蹄疫灭活二联苗的免疫研究

将口蹄疫灭活细胞毒按一定比例配成的ＦＭＤ灭活二联苗免疫豚鼠制备的阳性血清，经常量细胞中和试验，能完全抑制细胞病变的发生，联苗免疫后２６天，豚鼠获得了对病毒感染的抵抗力，能有效地抵抗Ｏ．Ａｓｉａ－Ｉ的单独感染和两型毒的同时混合感染。     

应用生物技术控制口蹄疫病毒

１０年前，人们就曾预言生物技术将取代传统的流行病学方法来控制口蹄疫（ＦＭＤ）的发生，但迄今为止这一目的还未完全达到，尽管如此，生物技术仍然提供了一种极敏感和特异的ＦＭＤ诊断方法，近２０年来，ＦＭＤ的世界性分布仍然未有多大变化，仍是影响动物产品（包括动物）国际贸易的主要疾病之一，应用生物技术将能提供一种有效的基因工程疫苗来控制ＦＭＤ及其他病毒病的发生，但目前为止，控制和消灭ＦＭＤ仍然依赖于传统的流行     

悬浮培养生产口蹄疫病毒灭活工艺研究

采用单独使用二乙烯亚胺（BEI）灭活剂30℃、26℃灭活以及二乙烯亚胺-甲醛（BEI-FA）联合灭活3种方法对悬浮培养生产的猪口蹄疫O型ZK/93病毒液进行灭活,考察和评价各种方法对该毒株146S的影响及灭活安全性。根据对3批口蹄疫病毒灭活后检测结果来看,单独使用BEI 26℃灭活方法虽然对146S的损失率小,但存在一定的安全隐患,未经过大量试验证实及确认之前不应使用。而经BEI-FA联合灭活方法获得的抗原安全性检验符合规定,但该方法对口蹄疫抗原146S的损失率较高,不宜推广和使用。与上述两种方法相比,用BEI灭活剂30℃灭活28 h仍是最佳的灭活方法。     

悬浮培养生产口蹄疫病毒灭活工艺研究

采用单独使用BEI灭活剂30℃灭活、单独使用BEI灭活剂26℃灭活及BEI—FA联合灭活等三种方法对猪口蹄疫O型ZK／93毒株进行灭活,考察和评价各种方法对该毒株146s的影响及灭活安全性。根据对三批口蹄疫病毒灭活后检测结果来看,单独使用BEI,26℃灭活方法虽然对146S的损失率小,但存在一定的安全隐患,未经过大量试验来证实及确认之前应不能使用该方法。而经BEI—FA联合灭活方法获得的抗原灭活安全陛检验符合规定,但该方法对口蹄疫抗原146S的损失率较高,不宜推广和使用。与上述两种方法相比,用BEI灭活剂30℃灭活28h仍是最佳的灭活方法。     

猪细小病毒灭活苗免疫豚鼠和猪抗体反应比较

猪细小病毒灭活苗对预防由ＰＰＶ引起的母猪繁殖障碍效果良好，Ｊｏｏ等（１９８４）报告了灭活苗接种豚鼠可产生抗体反应，本研究旨在观察豚鼠接种ＰＰＶ灭活苗后的抗体产生规律及特异性。我们用１３批ＰＰＶ灭活苗免疫３９只ＰＰＶ阴性豚鼠和猪，每批次各３只，免疫后阳性率１００％，平均ＨＩ价豚鼠为３２０－１２８０，猪为２０－３２０。     

口蹄疫病毒完整病毒粒子定量方法的研究进展

口蹄疫疫苗的有效抗原成分为完整的口蹄疫病毒粒子(146S),疫苗的效力与疫苗中含有的146S具有极大的相关性。因此对疫苗的生产过程及产品进行146S的定量检测是非常重要的环节。目前对146S定量的方法主要是超速离心的方法,除此之外,ELISA检测也越来越受到关注,同时很多研究人员也在积极探索其他更为简便快捷的检测方法。作者主要对各种146S的定量方法作一综述。     

口蹄疫病毒的研究进展

口蹄疫是发生在动物体内的一种顽固的急性、热性、高度接触性传染病,口蹄病毒群体庞大、复制突变率,是导致口蹄疫发生的根源所在.文章对口蹄疫病毒的基因组结构、致病毒力及免疫学研究进展等方面展开综述,为今后科学有效地预防口蹄疫提供理论依据.     

口蹄疫病毒基因工程疫苗研究进展

口蹄疫 (FootandMouthDisease ,FMD)是偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病 ,被国际兽医局列为头号A类传染病。该病传播途径多、传播速度快 ,曾多次在世界发生大流行。虽然该病的死亡率不高 (幼畜除外 ) ,但造成动物生产性能下降 ,扑杀动物花费大量的人力、物力和财力 ,影响国际贸易 ,经济损失惨重。如 1997年我国台湾、2 0 0 0年日本和韩国、2 0 0 1年英国暴发的FMD可以说给该地区或该国畜牧经济以致命的打击[1] 。为此 ,世界各国非常重视FMD的研究。口蹄疫病毒 (FootandMouthDiseaseVirus ,FMDV)属于小RNA病毒科 ,口蹄…     

口蹄疫病毒病毒样颗粒研究进展

口蹄疫病毒病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是不含口蹄疫病毒RNA的空衣壳结构,由口蹄疫病毒的4种结构蛋白体外自组装形成的,形态上与天然病毒粒子相似,具有很强的免疫原性和生物学活性。文章介绍了口蹄疫病毒衣壳的组装、口蹄疫病毒VLPs在国内外的研究进展和影响VLPs形成的因素,并对VLPs在疫苗研制等方面的应用前景作了展望。     

口蹄疫病毒衣壳蛋白氨基酸突变对病毒热稳定性的影响

口蹄疫是世界范围内广泛流行的一种偶蹄动物的烈性传染病,其病原为口蹄疫病毒(FMDV),它对热比较敏感,当温度高于30℃时,病毒衣壳容易解离为五聚体亚单位而影响疫苗的免疫保护效果。因此,改善病毒的热稳定性,制备热稳定优良的口蹄疫疫苗具有重大的应用价值。在实验室建立的口蹄疫病毒型内嵌和全长感染性克隆的基础上,在结构蛋白引入1个或2个氨基酸突变,分别构建了2种基因修饰的口蹄疫病毒全长重组质粒。全长质粒经NotⅠ线化后分别转染表达T7RNA聚合酶的BSR/T7细胞以拯救重组病毒。间接免疫荧光和电镜分析表明,成功拯救到2株口蹄疫重组病毒。重组病毒经RT-PCR和序列测定证实只有1株重组病毒所含的耐热突变可以稳定遗传。热失活试验显示,拯救病毒与亲本病毒的耐热特性基本一致。结果表明在结构蛋白上引入V2090A-S2093F-H30568R的突变,并对口蹄疫病毒的热稳定性并没有明显的影响,为未来发展热稳定的口蹄疫疫苗提供了一定的参考。     

口蹄疫病毒3D蛋白对DNA疫苗免疫效果的影响

将携带O型FMDV China99株P1-2A、部分2B及3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDV China99株3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素(PHA)刺激后的增殖活性，以间接ELISA方法检测血清FMDV特异抗体变化，并以微量中和试验检测中和抗体水平。结果表明，FMDDNA疫苗与3D蛋白共同免疫豚鼠后，抗体水平没有明显提高，攻毒后的保护率为25％。     

口蹄疫病毒3D蛋白对表位多肽免疫效果调节作用的研究

为了研究口蹄疫病毒(FMDV)重组蛋白3D对病毒表位抗原的免疫调节功能,笔者克隆了Asia 1型FM-DV的3D蛋白基因,并实现了重组蛋白在E.coli的表达及纯化.将纯化的重组蛋白3D与重组抗原按1∶2混合,并与等体积的ISA 206佐剂混合,制备免疫原(每毫升含50 μg3D重组蛋白和100 μg重组抗原).按每只豚鼠1 mL剂量经后腿肌肉多点接种250～300 g健康豚鼠5只,免疫后28 d用相同剂量的免疫原进行加强免疫;分别于免疫后0、21、28和42 d采血检测血清中和抗体效价,并进行淋巴细胞增殖试验.于加强免疫后14 d用103的50％豚鼠感染量(GPID50)的Asia1型FMDV进行攻击,评价免疫原效力.同时,设立重组抗原/ISA 2061(每毫升含100 μg重组抗原)、Asia 1型灭活疫苗(1mL)和PBS/ISA 206(1 mL)作为对照.结果表明,3D重组蛋白能显著提高表位重组抗原的中和抗体水平和淋巴细胞的增殖水平(P＜0.05),但与灭活疫苗组没有差别(P＞0.05);PBS对照组未检测到中和抗体和淋巴细胞增殖.结果提示,重组蛋白3D可显著提高重组表位抗原的免疫潜能,是一种十分重要的免疫调节蛋白,对开发新型疫苗具有重要的意义.     

生物矿化的口蹄疫病毒样颗粒疫苗的免疫原性评价

生物矿化技术可以增强口蹄疫(foot-and-mouth, FMD)病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)的耐热性,但并无试验数据支撑矿化FMD VLPs用于临床的可行性。本研究旨在评价矿化FMD VLPs疫苗在牛和猪上的免疫原性。用VLPs和矿化VLPs免疫猪,采用液相阻断ELISA(LPBE)检测猪血清中的特异性抗体滴度,并经酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测免疫猪外周血淋巴细胞(PBLs)经体外刺激后分泌的特异性IFN-γ。用矿化A型VLPs、矿化O型VLPs、矿化的A型和O型二价VLPs分别免疫牛,采用LPBE、中和试验、夹心ELISA检测血清中的特异性抗体、中和抗体以及IL-4和IFN-γ的含量。结果显示,VLPs与矿化VLPs免疫猪的血清抗体水平无显著差异,相对于VLPs,矿化VLPs免疫猪的PBLs分泌的IFN-γ水平高于VLPs免疫猪(P<0.05);3种疫苗免疫牛血清中IL-4和IFN-γ水平均高于PBS组,矿化二价疫苗与相应的矿化单价疫苗免疫牛的血清特异性抗体和中和抗体效价均无显著差异。综上所述,矿化VLPs对牛和猪均具有良好的...     

豚鼠对不同剂量猪细小病毒灭活苗的抗体反应

我研究所研制的猪细小病毒(PPV)AEI灭活苗对预防因PPV引起的母猪繁殖障碍病有良好的效果。该疫苗的效力检验以豚鼠为最易感。本文采用PPV灭活苗的不同剂量,分别为1ml二次、0.5ml二次、0.5ml一次和1ml一次,免疫PPV HI阴性豚鼠,观察豚鼠抗体反应的情况。现报告如下。一、材料和方法 1、材料:7批PPV AEI灭活苗,按本所“猪细小病毒AEI灭活疫苗的制造和检验试行规程”制做,经检验质量合格。