促进铁皮石斛原球茎中多糖和生物碱积累研究

以铁皮石斛原球茎为试材,为优化原球茎培养和提高有效物质的积累,研究了培养液中不同pH对原球茎生物量及有效物质含量的影响。同时,在培养初期向培养液中分别添加不同浓度的诱导子(壳聚糖、普鲁兰多糖)以及2种诱导子的混合液,以未加入诱导子的培养基作为对照,对原球茎生物量及有效物质含量进行了测定。结果表明:当培养液pH为5.8时,原球茎生长最好,且多糖(4.93g·L~(-1))和生物碱(3.15mg·L~(-1))生产量达到最高。30mg·L~(-1)壳聚糖和200mg·L~(-1)普鲁兰多糖单独处理,有利于原球茎中多糖和生物碱的积累。但当壳聚糖浓度为15mg·L~(-1),普鲁兰多糖浓度为100mg·L~(-1)混合处理后,发现原球茎中多糖和生物碱的积累量明显提高,多糖含量达到322.8mg·g-1 DW,生产量达到6.75g·L~(-1),而生物碱含量达到242.7μg·g-1 DW,生产量达到5.07mg·L~(-1)。因此,通过调节培养条件可有效地促进铁皮石斛原球茎中多糖和生物碱积累,为铁皮石斛产品生产提供了一种新的材料。     

不同氮源对铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的影响

以铁皮石斛为试材,以1/2MS培养基为基本培养基,添加不同种类的附加氮源20mmol/L,研究了不同氮源对铁皮石斛原球茎悬浮培养增殖、多糖含量及蛋白质含量的影响。结果表明:最有利于铁皮石斛原球茎悬浮培养增殖的是甘氨酸,硝态氮次之,谷氨酸最差,甚至出现了负增长;在多糖积累方面,硝酸钙对铁皮石斛原球茎多糖积累最为明显,赖氨酸等不利于铁皮石斛原球茎的多糖积累;硝酸钾、硫酸铵有利于铁皮石斛原球茎蛋白质的积累,尿素等其它氮源则不利于铁皮石斛原球茎蛋白质的积累。综合分析发现,硝酸钙最利于铁皮石斛原球茎悬浮培养生长。     

天然添加物对铁皮石斛类原球茎增殖、分化及生根的影响

以云南软脚铁皮石斛为试材,研究了不同天然添加物对其类原球茎增殖、分化及小苗生根的影响。结果表明:高浓度的香蕉汁抑制类原球茎的增殖,而高浓度的马铃薯汁促进类原球茎的增殖,铁皮石斛类原球茎增殖最适培养基为MS+6-BA 1mg/L+NAA 1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L+活性炭2g/L+马铃薯汁200g/L,接种60d后类原球茎增殖倍数为6.8,继续培养30d分化率达97%。培养基中添加香蕉汁、马铃薯汁均有利于铁皮石斛小苗生根,最适生根的天然添加物为马铃薯汁100g/L。     

铁皮石斛原球茎高效增殖体系的构建

以铁皮石斛T4种群原球茎为试材,研究了原球茎团块直径、接种密度、不同激素配合及继代周期对原球茎的增殖和长势的影响,以期构建铁皮石斛原球茎的高效增殖体系。结果表明:在铁皮石斛原球茎的增殖过程中具有明显的群体效应,适当增大原球茎团块直径和接种密度有利于提高增殖率;不同浓度的激动素(KT)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)与萘乙酸(NAA)配合试验中,NAA 0.02mg/L+KT 0.5mg/L能更有效地促进原球茎的增殖和生长;铁皮石斛原球茎增殖培养的适宜继代周期是50d。     

铁皮石斛组培苗生长的影响因素研究

以铁皮石斛组培苗为材料,研究不同蔗糖浓度对铁皮石斛原球茎(PLB)生长的影响,6-BA用量对铁皮石斛增殖芽生长的影响,不同糠源及添加物香蕉对铁皮石斛壮苗、生根的影响。结果表明:当蔗糖30g/L最有利于铁皮石斛PLB增殖,最适合PLB的培养基为MS+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L。6-BA对铁皮石斛丛生芽形态建成有着很重要的作用,有利于促进芽的分化,适合继代的培养基为MS+BA 4mg/L+NAA0.1mg/L+CW5%+蔗糖30g/L。香蕉对铁皮石斛组培苗的根系生长具有显著的促进作用,以50 g/L葡萄糖为糖源更有利于铁皮石斛壮苗生长,适合生根苗生长的培养基为1/2MS+香蕉70g/L+活性炭0.1%+葡萄糖50g/L。     

五种果蔬提取物对铁皮石斛茎叶分化苗促根效果的影响

为探究不同果蔬提取物对铁皮石斛原球茎分化苗的促根效果,选用100 g/L的香蕉、马铃薯、苹果、番茄、椰子5种果蔬提取物对铁皮石斛原球茎分化苗进行诱根研究.结果表明:5种提取物对铁皮石斛原球茎分化苗均具有促进根系生长的作用,其中以100 g/L的香蕉提取物诱导根效果最佳,生根时间30 d,平均生根条数8.7条、平均根系长度达6.4 cm;其次是马铃薯和苹果提取物;番茄与椰子提取物的促根效果相对较差.     

铁皮石斛的种子培养

以铁皮石斛成熟种子为外植体,研究原球茎的诱导、增殖、分化和生根的最佳培养条件。结果表明:1/2 MS基础培养基最适合铁皮石斛的种子培养,45 d时原球茎诱导率达到95%;原球茎增殖的最佳培养基为1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+20%马铃薯提取液,每代增殖16倍,原球茎形态好、变异少;原球茎团于1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.25 mg/L+20%马铃薯提取液的培养基上可诱导丛芽分化,于MS+NAA 0.5 mg/L+20%香蕉汁+活性炭5g/L的培养基上易于诱导不定根的形成,60 d后可形成健壮的完整小植株。     

石斛原球茎的组织培养研究进展

石斛是名贵的中草药之一,含有多糖、生物碱、氨基酸和微量元素等多种成分,具有增强免疫、抗肿瘤、抗疲劳、降血糖和养阴生津等多种生物活性。现对影响石斛原球茎增殖和分化的培养基、植物生长调节剂、金属元素与附加物、碳源和多胺、培养方式等因素以及原球茎的保存和有效成分积累进行了综述;总结了石斛原球茎多糖的生物活性作用;并对今后的研究重点进行了展望,建议应该在寻找影响石斛原球茎生长速度和生物产量的各种理化因素上进行深入研究。     

不同搅拌转速和通气量对桑黄深层发酵培养的影响

探讨在20L搅拌式发酵罐中,转速和通气量对桑黄菌丝生物量、胞外多糖产率、溶氧以及菌丝形态的影响。结果表明,实验范围内,转速为150r/min时,桑黄菌丝体生物量最大(12.65g/L),胞外多糖得率最高(2.99g/L),相对溶氧下降最快,菌球小球状、较紧密、丝状体比例小;通气量为1∶0.65vvm,桑黄菌丝体生物量最大(12.69g/L),胞外多糖得率最高(3.00g/L),相对溶氧下降最快,菌球大小均匀、紧密、生长良好。     

香菇液体菌种发酵条件的优化

对香菇ZHX-1液体培养得到的菌丝球和胞外多糖含量的影响因素进行了试验。在单因素试验的基础上,采用正交试验设计,结果表明,最佳液体发酵条件为玉米粉21 g/L,酵母膏5 g/L,KH_2PO_4 1 g/L,MgSO_4 0.5 g/L,pH4.5,培养温度25℃,摇床转速150 r/min,接种量8.5%,装液量100 mL/250 mL,培养7 d,增菇激活酶的添加量0.2%。在此优化条件下,香菇菌丝球的生物量为2.54 g/L,胞外多糖的含量为2.34 g/L。     

铁皮石斛优质试管苗繁育技术研究

以野生铁皮石斛为试材,采用限根培养法,研究了铁皮石斛种子非共生萌发特性及优质试管苗繁育技术。结果表明:授粉120d的种子达到生理成熟,能够顺利萌发;授粉140d种子达到形态成熟,萌发率可达98.51%;低温黑暗限制保存原球茎可控制其生长;在特定容器中用限根培养基MS+0.10mg·L~(-1) 6-BA+0.3mg·L~(-1) NAA+香蕉泥80g·L~(-1)培养小苗可得到优质试管苗;把试管苗移栽到松树皮中,成活率可达97.62%,该研究为铁皮石斛产业化育苗提供了新方法。     

不同激素配比对铁皮石斛组培丛生芽增殖的影响

以铁皮石斛为试材,以MS为基本培养基,研究了不同激素配比对铁皮石斛组培丛生芽增殖的影响。结果表明:铁皮石斛丛生芽增殖的培养条件为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+土豆汁100g/L+蔗糖30g/L,90d增殖系数达7.00,丛生芽芽高、茎径、含水量和叶绿素含量均高于其它处理。     

大苞鞘石斛原球茎悬浮培养研究

以大苞鞘石斛类原球茎为材料,通过悬浮培养,研究基础培养基、添加物和激素对其原球茎增殖及多糖含量的影响。结果表明:适合大苞鞘石斛原球茎悬浮培养的基本培养基为MS和B5培养基,增殖系数分别为4.31和4.03,多糖含量分别为7.08%和7.12%;添加物为香蕉+椰子汁时,增殖系数和多糖含量最高,分别为3.91和9.97%;适合原球茎悬浮培养的激素组合为0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA。     

铁皮石斛人工繁育技术

以铁皮石斛商品瓶苗和盆栽苗茎段为试材,添加不同浓度6-BA、NAA,诱导茎段腋芽、原球茎和不定根,建立再生体系,快速繁殖铁皮石斛组培苗,以期为秦岭淮河一线以北地区人工繁殖铁皮石斛提供参考依据。结果表明:外植体宜采用70%酒精浸泡20 s,0.1%升汞浸泡8 min消毒;MS+6-BA 3.0~5.0 mg·L^-1+NAA 0.1~1.0 mg·L^-1适合腋芽分化和增殖,分化率92%~100%;1/2MS+6-BA 2.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1+土豆泥15%适合原球茎诱导增殖,增殖倍数7.7;1/2MS+NAA 0.3 mg·L^-1生根率为100%;以松针土移栽,成活率83%。     

遮荫对一年生铁皮石斛生长特性、光合特性及多糖含量的影响

以1a生铁皮石斛为试材,采用人工遮荫方法,研究了不同光照强度对铁皮石斛生长特性、光合特性及多糖含量的影响,以期探明光强对铁皮石斛生长特性和品质的影响。结果表明:在55%透光率的条件下,铁皮石斛的株高、茎粗、净增鲜重值最大,长势最好;在透光率为43%时,更利于铁皮石斛多糖的积累。     

铁皮石斛丛生芽增殖培养条件的优化

为筛选出铁皮石斛从生芽继代增殖的最适培养基和培养条件,以MS为基本培养基,研究比较了活性炭、植物激素、有机添加物以及温度和光照等因素对铁皮石斛生长状况的影响.结果表明:丛生芽继代增殖的最佳配方为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+香蕉100 g/L+活性炭0.5 g/L+蔗糖30 g/L,丛生芽长势好,60 d增殖系数达到7.16;最适培养温度为25℃,最佳的光照强度为2 000 lx.     

人参悬浮细胞系的建立及生长特性研究

在建立人参悬浮细胞系的基础上,研究了碳源、氮源、磷源及植物生长调节物质对人参悬浮培养物的影响。结果表明:MS+2.0mg/L 2,4-D+2.0mg/L NAA+0.4mg/L BA为最适培养基;接种量10g/100mL,19℃,100r/min转速条件下,人参悬浮细胞系生物量积累最大。     

茯苓菌丝体液体培养条件的研究

通过正交试验,筛选出培养茯苓菌丝体的适宜培养基配方:葡萄糖25g,玉米浆10mL,KH2PO41.5g,MgSO40.75g,VB15mg,水1000mL。确定了摇瓶培养茯苓菌丝体适宜的接种量为10%,装液量为50mL/150mL的三角瓶。测定了发酵过程中菌丝体生物量、pH值、胞外多糖及胞内多糖含量的变化曲线。     

铁皮石斛类原球茎空气干燥法超低温保存中的脱水蛋白分析

 用空气干燥法将铁皮石斛类原球茎脱水至不同含水量, 进行超低温保存和热稳定蛋白的SDS-PAGE 分析, 并进行脱水蛋白的Western-blot 检测。结果表明: 在本试验条件下, 含水量以g/ g DM表示时,铁皮石斛类原球茎脱水时间(x) 对含水量(y) 的回归方程式为y = - 0.1208 x + 9.9636。含水量下降为0.1～0.5 g/ g DM时, 冻后存活率达到最大值。当含水量达1.0 g/ g DM时, 热稳定蛋白的含量明显增加, 经免疫检测其中分子量分别为28.7 和34.3 kD 的两个热稳定蛋白为脱水蛋白。认为含水量是铁皮石斛超低温保存成功的关键因素, 也是引起脱水蛋白大量积累的重要条件。     

不同培养条件对金钗石斛原球茎增殖的影响

本试验研究了基本培养基、培养天数及培养方式、激素浓度对金钗石斛原球茎增殖的影响,采用方差分析方法来探讨不同培养条件与原球茎增殖的影响关系。结果表明:B 5培养基为最佳培养基;4个培养天数之间存在极显著差异,培养期为30 d时显示最好;4种培养方式之间存在显著差异,固体培养和液体悬浮培养是较好的培养方式;原球茎最佳增殖激素浓度为6-BA 0.5 m g/L+NAA 0.2 m g/L。