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以刺山柑为试材,研究比较了改良SDS提取法、RNApure Plant Plus Reagent法、RNAplant Plus Reagent法和RNAprep Pure Plant Kit法提取总RNA的效果,以期寻找一种适于野生刺山柑叶片高质量总RNA最佳提取方法。结果表明:4种方法提取的总RNA均可见28S和18S2条电泳谱带,RNAprep Pure Plant Kit法获得的RNA图谱条带清晰、明亮、稳定,28S rRNA亮度约是18SrRNA的2倍,OD260/OD280为2.00,产率为175.3μg/g,除RNAprep Pure Plant Kit法能够从叶片中提取到完整性好、纯度高及产率高的总RNA外,其它3种方法提取的总RNA均存在降解及DNA和蛋白等污染,经cDNA-SRAP分析检测,此方法获得的RNA反转录后能扩增出清晰稳定的多态性条带,能够满足后续试验的要求。进一步采用RNAprep Pure Plant Kit法从刺山柑幼苗整株、根、茎及叶中能够获得高质量的总RNA,因此,RNAprep Pure Plant Kit法适合刺山柑总RNA的提取。 相似文献
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简便高质量的食用菌总RNA提取方法 总被引:3,自引:0,他引:3
STE法是针对食用菌多糖含量高而设计的一种提取食用菌总RNA的有效方法。本研究以灵芝、香菇和白腐真菌TR16菌株的菌丝体为材料,采用STE法提取其总RNA,同时以Trizol法作对照。结果表明:采用STE法提取的三种菌丝的总RNAA260/A280比值在1.80~2.10范围内,A260/A230略大于2.00;而Trizol法提取的总RNAA260/A280比值小于1.80,A260/A230小于1.90,明显比STE法效果差;总RNA电泳检测表明:STE法的3条带(28S rRNA、18SrRNA和5SrRNA)清晰,无拖尾,无杂带,效果比Trizol法好;将STE法提取的总RNA进行反转录后合成双链cDNA,进行预扩增,电泳显示呈弥散状;再进行选择性扩增,有相同或相异的条带。进一步表明STE法提取的总RNA质量较高,可以满足后续分子生物学研究的要求。 相似文献
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分蘖洋葱叶片RNA提取方法的比较和分析 总被引:1,自引:1,他引:0
以新鲜的分蘖洋葱叶片为材料,比较了Trizol法、Trizol改进法、SDS法、SDS改进法以及柱式植物RNA提取法提取总RNA的效果。结果表明:Trizol法和Trizol改进法所提取的RNA得率很低,且不能有效除去叶片中的多糖成分;SDS改进法能够有效的去除分蘖洋葱叶片中的多糖,提取的RNA中28S RNA亮度约为18S RNA的2倍,OD260/OD280值介于1.7~2.2之间,但RNA的得率偏低,约为56.32μg/g;柱式植物RNA提取法提取的RNA 28S、18S、5S条带清晰,完整性好,RNA的得率最高,为123.58μg/g,完全适合于分蘖洋葱进一步的分子生物学研究。 相似文献
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《现代园艺》2020,(15)
以新疆阿魏叶片为材料,采用3种不同的方法分别提取其总RNA,用核酸蛋白检测仪、琼脂糖凝胶电泳方法检测其浓度、纯度及完整性,旨在建立提取新疆阿魏总RNA的最适方法,为后续深入研究新疆阿魏生物合成途径及机制奠定基础。结果表明:3种方法均能提取出新疆阿魏叶片总RNA。试剂盒法提取的总RNA质量最好,28S RNA亮度是18S RNA的2倍,条带清晰,操作简单,耗时短;Trizol法提取的RNA质量次于试剂盒法,且过程中无法判断次级代谢产物对RNA提取的影响,Trizol裂解液存在毒性物质;改良CTAB法提取的总RNA质量较差,无法满足下一步试验的要求,操作复杂,耗时较长。因此,试剂盒法为提取新疆阿魏RNA最佳方法。以试剂盒法提取的总RNA为模板进行PCR检测,得到的扩增条带清晰,与目的片段大小一致,进一步证明此方法提取的总RNA质量能够满足后续试验的要求。 相似文献
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葡萄总RNA提取方法的研究 总被引:63,自引:3,他引:63
针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改进SDS/酚法、异硫氰酸胍法和市售总RNA提取试剂盒等不同的提取方法,3种改进方法均能从葡萄幼嫩叶片中提取到总RNA。其中改进的SDS/酚法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能够从成熟的叶片和完熟果实的果皮中获得质量高、完整性好的总RNA,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8~2.0之间,A260/A230大于2.0,且总RNA产率高,其中幼叶总RNA产率为261.20μg/g,成熟叶产率为191.40μg/g,完熟果皮产率为31.50μg/g,完全适于进行DDRT-PCR、Northernbolt和cDNA文库构建等研究。且该方法具有快速、简单、有效的特点。 相似文献
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通过对比改良SDS-酚法、改良CTAB法和改良Trizol法3种RNA提取方法,提取"赤霞珠"(‘Cabernet Sauvignon’)葡萄芽、叶片和果皮RNA的质量及浓度,并进一步分离、纯化得到较高质量的RNA。结果表明:改良SDS-酚法与改良CTAB法适用于芽和叶片的提取,可以获得较好质量、高浓度的总RNA,其28S与18S亮度极高,5S清晰可见,完整性较好;改良Trizol操作环节较少,省时,质量好,条带锐利,可清晰看出28S与18S亮度比为2∶1,虽提取的样品浓度较低,但足以供下一步研究使用。 相似文献
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为给巨大口蘑cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)等后续试验提供高质量的RNA,以巨大口蘑子实体为试验材料,筛选最适的巨大口蘑总RNA提取方法。采用Trizol法、CTAB-LiCL法和试剂盒法提取巨大口蘑总RNA,并对所提取的总RNA浓度、A260/A280、A260/A230以及凝胶电泳效果等指标进行比较分析。结果表明,3种方法都可以提取巨大口蘑子实体总RNA,CTAB-LiCl法提取总RNA的A260/A280为1.92,A260/A230为2.25,质量浓度为235μg/g,说明其完整且纯净;而Trizol法和试剂盒法提取总RNA的A260/A230均小于2.0,说明提取RNA中存在蛋白质、酚类等杂质,且RNA纯度低,其质量浓度分别为147μg/g、89μg/g。CTAB-LiCl法提取的巨大口蘑总RNA浓度高,纯度也较理想,凝胶电泳效果好,是进行后续相关研究的较佳选择。 相似文献
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彩色马铃薯试管苗总RNA提取方法的改进与分析 总被引:1,自引:0,他引:1
以彩色马铃薯品系03-1的试管苗为材料,分别采用苯酚法和Trizol法提取马铃薯总RNA,通过对前人的操作和提取方法进行改进,旨在寻求一种低成本、操作简单、省时,适宜彩色马铃薯试管苗总RNA提取,且RNA质量能直接用于后续病毒检测研究的方法。结果表明:2种方法在操作改进后依然均能得到马铃薯试管苗的总RNA,经琼脂糖凝胶电泳检测,都可获得28S1、8S和5S rRNA 3条带,并对所得的总RNA进行马铃薯PVY病毒的检测,均可特异扩增出目标片段;Trizol法较苯酚法更简单省时,且所得总RNA完整性更强、纯度更高。 相似文献
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适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法 总被引:10,自引:2,他引:8
以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8~2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。 相似文献
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利用PCR技术及扫描电镜技术对茎尖脱毒生姜组培苗进行病原检测。用细菌16SrRNA通用引物对生姜组培种苗根部和固体培养基混合提取的基因组DNA作为模板进行16SrRNA扩增,不能扩增出16S rRNA;Trizol提取生姜组培苗根部和茎段RNA经凝胶电泳检测无明显RNA目的条带;生姜组培苗茎段组织经扫描电镜观察组培苗茎段中无呈球形、杆状、卵圆形、丝状、冠状及蝌蚪形等规则形状的病毒颗粒,只见表皮、微管等组织。研究认为,PCR、RT—PCR和扫描电镜是茎尖脱毒生姜组培苗病原检测的有效手段。 相似文献
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盆栽和地栽牡丹光合特性的比较 总被引:10,自引:0,他引:10
以盆栽牡丹和地栽牡丹‘洛阳红’为试材,对其净光合速率(Pn)季节变化及春季大风铃期(花前)和叶片放大期 (花后)的光合特性进行了比较研究,探讨不同栽培方式对牡丹光合生理特性的影响。结果表明:叶片放大期,盆栽牡丹的光饱和点(LSP)和光补偿点(LCP)分别约为923和109 μmol﹒m-2﹒s-1,表观量子效率(AQY)为0.0173,地栽牡丹的LSP和LCP分别约为 1 089和45 μ mol﹒m-2﹒s-1,AQY 为0.0206。两个时期Pn日变化均呈单峰型曲线,峰值在10﹕00左右,且盆栽牡丹比地栽牡丹分别降低了32.8﹪和39.3﹪。盆栽牡丹和地栽牡丹Pn在春季4月分别达到最大值7.16和10.02 μmol﹒m-2﹒s-1,9月降至最低值。叶绿素含量也有不同程度的降低,大风铃期盆栽牡丹比地栽牡丹降低了15.6﹪,叶片放大期则降低了20.4﹪。盆栽牡丹较低的光合速率可能是其生长不良的主要原因之一。 相似文献