间接ELISA检测猪流行性腹泻病毒的抗体水平

本研究以猪流行性腹泻病毒细胞培养物中提纯的抗原,组织毒兔获得的高兔血清建立了间接ＥＬＩＳＡ检测ＰＥＤＶ抗体水平。结果表明：包被怕浓度为１：２００００,酶标羊抗猪ＩｇＧ浓度选用１：２５０为测定抗ＰＥＤＶＩｇＧ抗体的最达工作浓度。田间检测结果与临床发病预期结果一致。     

酶标SPA-Western-blot法鉴定猪IgG的研究

用健康二花脸母猪的新生仔猪，随机分为两组：出生后即刻隔离人工哺喂葡萄糖盐水（ＧＳ组）及自然哺乳组（ＰＣ组）。采集出生后２４小时的仔猪血清样品，用酶标ＳＰＡ－Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ法鉴定其中的ＩｇＧ。结果，ＰＣ组仔猪出现阳性反应，在非还原状态ＳＰＡ与ＩｇＧ结合，在还原状态下，ＳＰＡ与ＩｇＧ的重链结合；ＧＳ组仔猪呈阴性反应。表明，酶标ＳＰＡ－Ｗｅｓｔｅｒ－ｌｂｏｔ法鉴定猪ＩｇＧ具有简便、省时、省力、灵敏、准确的优点，值得推广     

ELISA鉴别检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒抗体水平的研究

猪腹泻症是一类严重影响养猪业发展的疾病 ,其中尤以病毒性腹泻难以防治。引起猪病毒性腹泻的主要病原有 :猪流行性腹泻病毒 (ＰＥＤＶ)、猪传染性胃肠炎病毒 (ＴＧＥＶ)和轮状病毒 (ＲＶ)。在生产实践中 ,这三种病毒往往在同一个猪场混合感染的情况比较多。本研究针对三种病毒混合感染的特点 ,采用ＥＬＩＳＡ检测猪ＰＥＤＶ、ＴＧＥＶ和ＲＶ抗体水平 ,为这三种病的合理预防提供依据。1　材料和方法1 .1　羊抗猪ＩｇＧ酶标记抗体的制备1 .1 .1　猪ＩｇＧ的提取 :采集健康母猪的初奶 1 0 0ｍｌ,按常规方法分离乳清 ,然后结合饱和硫酸铵沉淀法…     

酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１：１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的家访工为１：２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳     

广东东莞地区猪传染性胸膜肺炎的血清学调查

为了解广东东莞地区猪传染性胸膜肺炎的感染情况,对未免疫该病的猪群采集血清,应用ELISA方法进行猪传染性胸膜肺炎抗体水平监测.结果发现,猪群总体抗体水平达20.06％,说明部分猪群已受感染,应加以重视.     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用

将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明, Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高,至第３５ 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高,血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。     

应用酶标SPA Dot-ELISA同时检测牛羊血吸虫病和肝片吸虫病

采用给雄性家兔注射黄牛、水牛、山羊ＩｇＧ混合液（１∶１∶１）制备的兔抗黄牛、水牛和山羊ＩｇＧ连接酶标ＳＰＡ，解决了酶标ＳＰＡ与牛羊血吸虫和肝片吸虫免疫复合物相结合的技术关键，并制成了可同时用于牛羊血吸虫病和肝片吸虫病诊断的酶试剂。建立了Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ同时检测牛羊血吸虫病和肝片吸虫病技术，能测出人工感染１～１５０条虫体７～４２ｄ病畜抗体，阳性检出率达１００％。     

Dot─ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１∶１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１∶６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳性率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测结果表明：６１份１９９１年进口美国猪血清阳性率为０％，１８２份１９９５年进口加拿大猪血清阳性率为４．９４％。本法不需特殊仪器，适用于基层兽医部门和猪场对该病的血清学诊断和流行病学普查     

Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测     

单克隆抗体捕获ELISA检测鸡多杀性巴氏杆菌IgM抗体

应用抗鸡ＩｇＭ单克隆抗体建立了检测鸡抗多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）血清中特异性ＩｇＭ抗体的单克隆抗体捕获ＥＬＩＳＡ,其敏感性、特异性、重复性优于间接ＥＬＩＳＡ。用于检测鸡抗Ｐ．ｍ．的特异性ＩｇＭ抗体发现：鸡在注射免疫Ｐ．ｍ．灭活苗后第４天即可检测到ＩｇＭ抗体,并且上升较快,峰值在第２周为１：５１２０;鸡在口服免疫Ｐ．ｍ．弱毒活苗后ＩｇＭ抗体上升缓慢,峰值在第４周左右,滴度较低为１：３２０;鸡在由不同途径感染不同的Ｐ．ｍ．强毒后第８天时,ＩｇＭ抗体滴度都明显上升。同时应用间接ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ抗体滴度进行比较。本项研究对建立检测鸡抗其它病原微生物特异性ＩｇＭ抗体方法具有借鉴意义。     

河南省商丘地区猪传染性胸膜肺炎醮血清流行病学调查分析

为掌握商丘地区传染性胸膜肺炎的流行情况与流行规律,采用正向间接血凝试验（IHA）方法对商丘地区不同类型猪群进行猪传染性胸膜肺炎抗体水平检测。结果表明,猪传染性胸膜肺炎野毒感染在商丘地区普遍存在。不同类型猪群血清抗体阳性率在15．96％-39．68％之间．总体抗体阳性率为23．16％。     

禽流感抗体斑点—ELISA诊断技术的研究

以混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,用自制的禽流感全病毒抗原和酶标抗体,建立了禽流感抗体斑点 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测法,其抗原最适包被量为 ０．０６μｇ／点;血清抗体最佳稀释度为 １１００;酶标抗体作 １２００ 稀释;出现明显清晰的斑点者判为禽流感抗体阳性。该方法对 Ｓ Ｐ Ｆ鸡血清及新城疫、传染性法氏囊病等其它 １１ 种鸡疫病阳性血清均为阴性,对不同亚型特异性的禽流感病毒（ Ａ Ｉ Ｖ）分型血清、琼扩（ Ａ Ｇ Ｐ）阳性血清及血凝抑制（ Ｈ Ｉ）阳性而 Ａ Ｇ Ｐ疑似的血清样品均呈阳性;对人工接种 Ａ Ｉ Ｖ 的 Ｓ Ｐ Ｆ鸡第 ３ 天即能检出抗体阳性,第 ５～１１７ 天可全部检出。与间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法比较,不仅其特异性、敏感性、重复性相一致,而且结果可用肉眼判定,更适合现地禽流感抗体监测及流行病学调查。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和试验和单克隆抗体阻断酶联免疫吸附试验对８１头美国进口猪轿清作猪传染性胃肠炎抗体检测。ＳＮ试验同７份阳性血清，检出率为８．６４％，Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于Ｓ     

青海互助猪传染性胸膜肺炎的血清学检测

用猪传染性胸膜肺炎间接血凝试验（IHA）,对采自青海省互助县某猪场饲养的70份互助猪的血清,进行了猪传染性胸膜肺炎血清抗体的检测。结果：检出29份阳性血清。阳性率为41．43％,表明：青海省互助猪的猪群中存在猪传染性胸膜肺炎的流行。     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ。确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗体的最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ,４℃冰箱过夜;用含０．５％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的磷酸盐缓冲液,３７℃封闭６０分钟;待检血清最佳稀释度为１８０～１６４０,作用６０分钟;酶标抗体作１２０００稀释,作用６０分钟。根据对５２份ＳＰＦ鸡血清的检测结果制定了判定标准。     

间接夹心ELISA检测新城疫病毒抗原

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒ＩｇＧ为包被抗体，兔抗ＮＤＶ ｖｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体，酶标记羊抗兔ＩｇＧ为指示抗体，建立了检测ＮＤＶ的间接夹心ＥＬＩＳＡ，并分别以兔抗ＮＤＶ鸡胚毒纯化ＨＮ糖蛋白，Ｆ糖蛋白ＩｇＧ为第二抗体进行了比较试验，并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。     

天津部分猪场副猪嗜血杆菌病与猪传染性胸膜肺炎的流行病学调查

为了解天津部分猪场副猪嗜血杆菌病(HPs)和猪传染性胸膜肺炎(PCP)的流行情况,利用间接血凝试验对采自9个规模猪场的178份猪血清样品进行副猪嗜血杆菌抗体检测,对采自8个规模猪场的166份猪血清样品进行猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抗体检测。结果表明:副猪嗜血杆菌阳性率为18.54%(33/178),其中断奶仔猪和保育阶段猪阳性率为23.58%(25/106);猪传染性胸膜肺炎的阳性率为21.08%(35/166),其中断奶仔猪阳性率为20.93%(9/43),育肥猪阳性率为27.66%(13/47),种猪阳性率为21.62%(8/37)。说明天津地区部分猪场的副猪嗜血杆菌病和猪传染性胸膜肺炎呈地方性流行。     

青海省猪传染性胸膜肺炎的血清学调查

采用猪传染性胸膜肺炎间接血凝(IHA)试验,对来自青海省3个规模化猪场的209份血清,进行了猪传染性胸膜肺炎血清抗体检查。结果,共检出119份阳性血清,阳性率为56.94%,表明青海省部分猪场中存在猪胸膜肺炎放线杆菌的感染。     

应用ELISA法检测PPV抗体

猪细小病毒 (ＰｏｃｉｎｅＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ,简称ＰＰＶ)主要引起母猪繁殖障碍 ,临床主要表现为产仔数减少、产木乃伊、死胎、弱仔及流产。对于该病的诊断方法有病毒诊断和抗体诊断。由于酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)具有灵敏、准确、快速的优点 ,所以本文主要是应用ＥＬＩＳＡ检测ＰＰＶ抗体。1　材料与方法1 .1　材料4 0孔聚苯乙烯微量反应板。ＰＰＶ提纯病毒 ,由本所实验室提供。抗原 (包被用 ) :ＰＰＶｓ- 1毒接种生长良好的 1～ 2日龄ＳＴ细胞所获得的细胞病毒液 ,经过灭活后得到。辣根过氧化物酶 (ＨＲＰ)ＲＺ≥ 3 .0 ,购于中科…     

SPA／SPG融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达

葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）和链球菌Ｇ蛋白（ＳＰＧ）的ＩｇＧ结合区编码基因合后，克隆到肠杆表达载体ＰＧＥＸ，ＳＰＡ／ＳＰＧ融合蛋白（ＳＰＡＧ）得到高效表达。可溶性ＳＰＡＧ－ＧＳＴ产物可被谷胱甘肽亲和柱一次性纯化。用琼扩和ＥＬＩＳＡ试验测定了表达产物与不同种属动物血清反应的性能。ＳＰＡＧ－ＧＳＴ与所有ＳＰＡ、ＳＰＧ各自反应的动物ＩｇＧ结合，对小鼠ＩｇＧ的反应优于ＳＰＡ或ＳＰＧ。在所测试的２３种动物血清中