应用酶联免疫吸附试验检测牛伊氏锥虫病抗体的研究

1980年我们采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了马伊氏锥虫病抗体,并研究了人工接种伊氏锥虫马的抗体消长规律。此后,牛炳亨等用ELISA检测人工感染牛2头,沈杰等用ELISA检测阳性牛血清8头。鉴于各地对抗原的制备及稀释度、受检血清稀释度、标记物的制备与纯化方法均不一致,对此,我们又做了一些比较研究,     

酶联免疫吸附试验对绿脓杆菌抗体的检测和对马血清中抗体滴度的测定

用酶联免疫吸附试验(ELISA)对抗绿脓杆菌血清学的一种共同抗原(原始内毒素蛋白质)。蛋白酶和弹性蛋白酶的免疫球蛋IgM和IgG抗体的检测。对马血清中绿脓杆菌抗体滴度的测定。利用辣根过氧化物酶标记兔抗马IgM和IgG抗体作为酶标记抗体结合物。利用5氨基水杨酸(5—Aminosalicylic(?)acid)和H_2O_2作为底物。以免疫马、新生驹和72匹健康赛马的血清作为ELISA和被动血球凝集研究的抗绿脓杆菌抗体。通过ELISA,免疫马IgG抗体滴度的变化是清楚的。在新生驹中,出生后第一天,IgM和IgG抗体的数量主要是来自初乳,同时指出,新生驹的抗体水平开始低然后增加。抗绿脓杆菌原始内毒素蛋白质,蛋白酶和弹性蛋白酶的抗体,几乎存在于所有被研究的健康赛马中。     

应用Dot-ELISA检测禽白血病病毒抗原的研究

以鸽抗鸡劳氏肉瘤病毒(RSV)血清IgG作为包被抗体及酶标抗体的双抗体夹心法Dot-ELISA,检测禽白血病病毒抗原,其特异性及敏感性与澳大利亚ELISA(用兔抗AMV-P_(27)血清IgG作为包被抗体及酶标抗体)相同。可用以检测卵清中禽白血病病毒抗原及用鸡胚或鸡胚细胞生产的各种疫苗中污染的禽白血病病毒抗原。     

梅花鹿结核病间接ELISA方法的建立

为了建立鹿结核病的快速检测方法,试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔,制备兔抗梅花鹿IgG抗体,辣根过氧化物酶(HRP)进行标记,通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基因,并与pET-22b(+)质粒连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达和纯化38 ku蛋白,以38 ku蛋白作为包被抗原,以HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体作为二抗,建立间接ELISA方法。利用建立的间接ELISA方法对结核菌素皮肤试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行验证。结果表明：对梅花鹿血清IgG进行纯化,得到大小分别约为50 ku和25 ku的蛋白质;制备的HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体可特异性识别梅花鹿血清IgG,在抗体浓度稀释比例为1∶20 000时仍有很好的结合效果;38 ku蛋白作为抗原的最佳包被浓度为1μg/mL,被检梅花鹿血清的最佳稀释比例为1∶100,HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体的最佳稀释比例为1∶10 000;间接ELISA方法能够准确区分结核菌素皮肤试验确定的阳性和阴性梅...     

兔抗O型口蹄疫VLPs酶标抗体的制备及初步应用

为制备兔抗O型口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)的酶标抗体,进一步建立O型口蹄疫病毒的ELISA检测方法,通过原核表达、体外纯化和组装O型口蹄疫VLPs,免疫家兔制备兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清,并采用亲和层析法纯化IgG,改良过碘酸钠法制备兔抗O型口蹄疫VLPs的酶标抗体(rabbit anti-type O foot-and-mouth disease IgG-HRP)。结果显示,兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清效价达1∶4 096,纯化后的IgG纯度达90%,效价达1∶512 000。表明获得了高纯度的兔抗O型口蹄疫VLP的酶标抗体,可用于O型口蹄疫的ELISA检测。     

鸽毛滴虫感染Dot-ELISA检测方法的建立

为了制备兔抗鸽IgG抗体-HRP,建立斑点酶联免疫吸附试验定性检测鸽毛滴虫抗原的检测方法,将纯化的鸽IgG加入佐剂免疫兔子,获取纯化的兔抗鸽IgG抗体;采用简易过碘酸钠法标记兔抗鸽IgG,获取兔抗鸽IgG抗体-HRP;同时将鸽毛滴虫用超声波粉碎加入佐剂后多次免疫健康鸽获取鸽抗鸽毛滴虫高免血清(一抗);然后在2×106个/mL的鸽毛滴虫抗原量下,用不同浓度的一抗抗体、兔抗鸽IgG抗体-HRP进行试验;并对70个临床样品进行检测。结果显示,在2×106个/mL的鸽毛滴虫抗原量下,一抗与兔抗鸽IgG-HRP最佳工作浓度分别为1∶100和1∶500;70个样品中,48个镜检为阳性的样品用Dot-ELISA检测有44个呈阳性,阳性符合率为91.7%;22个镜检为阴性的样品用Dot-ELISA检测有12个呈阴性,阴性符合率为54.5%;Dot-ELISA检测与镜检结果的总符合率为80%。结果表明,本试验成功地建立了鸽毛滴虫感染的Dot-ELISA检测方法。     

牛赤羽病胶体金抗体检测试纸条的研制

研究旨在制备一种现场快速筛查牛赤羽病的免疫层析试纸条。通过胶体金标记赤羽病病毒N蛋白,将兔抗牛IgG和兔抗N蛋白多克隆抗体分别喷涂于NC膜上作为检测线（T）和质控线（C）。结果显示,牛赤羽病毒阳性抗体血清稀释度为1∶512时,检测线仍显色;且与牛病毒性腹泻病毒、牛结核病、布鲁氏菌病、牛巴氏杆菌病、地方流行性牛白血病毒和蓝舌病毒的阳性血清均无交叉反应;使用试纸条和商品化ELISA试剂盒同时检测40份田间牛血清样品的结果符合率为92.6%。研究表明,试纸条适用于基层养殖户对牛赤羽病的筛查。     

鹿流行性出血病病毒双抗夹心ELISA方法的建立

为建立鹿流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,用纯化的抗EHDV特异性单克隆抗体包被ELISA板,用兔抗EHDV IgG作为夹心抗体,IgG作为夹心抗体建立EHDV双抗夹心ELISA方法,并对该方法的特异性和敏感性进行了试验.用ELISA分别检测EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、水疱性口炎病毒(VSV)、赤羽病病毒...     

猫血清IgG的纯化及酶标兔抗猫二抗的制备

采用辛酸-硫酸铵法和Sephadex G-150分子筛层析法纯化猫血清IgG,SDS-PAGE电泳检测;用纯化的IgG免疫新西兰兔,制备兔抗猫IgG抗血清,并用上述方法提纯兔抗猫IgG,改良过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶,即获得兔抗猫IgG的酶标抗体。     

多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立

建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑.以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为检测抗体,HRP标记的驴抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA方法,检测试验犬(...     

鹅卵黄IgG的纯化及兔抗鹅IgG酶标抗体的制备

采用三氯甲烷去脂、无水Na2S04盐析、DEAE23纤维素层析相结合的方法纯化鹅卵黄IgG,SDS-PAGE检测表明,所得鹅卵黄IgG纯度可达93%;用纯化的IgG免疫家兔,抗血清经双向琼脂扩散,证明兔抗鹅IgG抗血清效价约1:64,免疫电泳试验检测,证明得到了特异性抗血清,提取兔抗血清的IgG,用辣根过氧化物酶标记,制备了兔抗鹅IgG的酶标抗体,酶标抗体的效价为1:6400.     

兔抗鹅IgG酶标抗体的制备及初步应用

为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅 IgG抗血清效价约 1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。     

大熊猫IgG双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

为建立大熊猫IgG的定量双抗体夹心ELISA检测方法(DAS-ELISA),本研究纯化了大熊猫血清中IgG,并将其作为免疫原分别免疫家兔和豚鼠,制备兔抗和豚鼠抗大熊猫IgG高免血清,经优化DAS-ELISA反应条件,建立了以纯化的兔抗大熊猫IgG作为捕获抗体和豚鼠抗大熊猫IgG高免血清作为检测大熊猫IgG的定量DAS-ELISA 检测方法.该方法能检测1.5625μg/mL～100 μg/mL的大熊猫IgG,大熊猫IgG含量(Y)与DAS-ELISA检测OD值(X)之间呈良好的线性关系,Y=4.7186X+0.044,相关系数为0.9911,该方法特异性强,稳定性好,能用于大熊猫IgG的定量检测.     

牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA检测方法的标准化研究

用纯化牛病毒性腹泻病毒免疫蛋鸡制备出的卵黄抗体作为包被抗体,采用自制的单抗为一抗,建立牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法。通过试验确定,抗牛病毒性腹泻病毒卵黄抗体最佳包被浓度为1:50;McAb最适稀释浓度为1:10,HRP-羊抗鼠IgG工作浓度为1:800。通过引入牛病毒性腹泻病毒质控血清进行质控检验,该方法所得检测结果均在质量控制范围内,达到预定标准化要求。标准化的抗原捕获ELISA方法具有特异、灵敏、可靠、方便、快捷等特点,可广泛应用推广,为我国牛病毒性腹泻病毒监测提供了行之有效的技术手段。     

鸭黄病毒多克隆抗体的制备及鉴定

本试验旨在建立鸭黄病毒多克隆抗体.将鸭黄病毒在鸡胚中增殖,收集尿囊液,检测尿囊液中增殖的鸭黄病毒EID50为1.8×105/mL.制备免疫原.制定免疫程序,用此免疫原免疫家兔.免疫程序实施完毕后,收集兔抗鸭黄病毒血清,用间接ELISA的方法测定兔抗鸭黄病毒多克隆抗体的量显示,多克隆抗体的量随免疫天数的增加而增多.用饱和硫酸铵盐析其中的IgG,检测其含量为20.3mg/mL.该研究为进一步建立鸭黄病毒病的ELISA检测方法奠定了实验基础.     

牛β-酪蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

以牛β-酪蛋白标准品为免疫原,免疫健康的新西兰大白兔,制备了兔抗牛β-酪蛋白的多克隆抗体。经亲和层析纯化后,用SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色检测抗体的纯度,经ELISA法测定β-酪蛋白抗体的效价为1∶1600。Western-blot分析发现,制备的抗体与β-酪蛋白可以发生特异性结合,表明成功制备了纯度较高和特异性较好的牛β-酪蛋白多克隆抗体,为乳腺生物反应器的研究提供了有效的工具。     

牛β-酪蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

以牛β-酪蛋白标准品为免疫原,免疫健康的新西兰大白兔,制备了兔抗牛β-酪蛋白的多克隆抗体。经亲和层析纯化后,用SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色检测抗体的纯度,经ELISA法测定β-酪蛋白抗体的效价为1∶1600。Western-blot分析发现,制备的抗体与β-酪蛋白可以发生特异性结合,表明成功制备了纯度较高和特异性较好的牛β-酪蛋白多克隆抗体,为乳腺生物反应器的研究提供了有效的工具。     

牛β-酪蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

以牛β-酪蛋白标准品为免疫原,免疫健康的新西兰大白兔,制备了兔抗牛β-酪蛋白的多克隆抗体.经亲和层析纯化后,用SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色检测抗体的纯度,经ELISA法测定β-酪蛋白抗体的效价为1∶1600.Westernblot分析发现,制备的抗体与β-酪蛋白可以发生特异性结合,表明成功制备了纯度较高和特异性较好的牛β-酪蛋白多克隆抗体,为乳腺生物反应器的研究提供了有效的工具.     

检测犬免疫球蛋白G的夹心ELISA方法的建立

为建立犬免疫球蛋白G(Ig G)的检测方法,本研究以兔抗犬Ig G Fc段多克隆抗体为包被抗体,过氧化酶标记的兔抗犬Ig G(全分子)多克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA定量检测方法,并采用Protein A方法从犬血清中纯化犬Ig G作为ELISA检测标准品。该检测方法与小鼠、兔、马、牛、鸡及羊常见动物血清均无交叉反应,特异性好;最低检测下限可以达到4.8 ng/m L,敏感性较高。以本研究建立的ELISA方法检测犬细小阳性血清和阴性血清,阳性血清Ig G含量明显高于阴性血清;检测转染犬源化抗体序列重组质粒的细胞培养液上清,重组质粒在96 h表达量达到峰值。本研究为进一步建立稳定表达犬源化抗体的细胞系提供了特异性的定量检测方法。     

上海地区马梨形虫病和伊氏锥虫病的血清学调查

为了解上海地区马梨形虫病和伊氏锥虫病的存在情况,我们从上海地区选择9家马场,共采集马血样219份,分别采用商品化ELISA试剂盒和平板凝集试剂盒检测马梨形虫病和马伊氏锥虫病抗体。结果显示,219份血清中,马梨形虫病抗体阳性血清有64份,分布于8家马场,平均阳性率为29.2%;马伊氏锥虫病抗体阳性血清有6份,分布于3家马场,平均阳性率为2.7%。调查数据表明,上海地区马梨形虫病感染率较高,需要加强对该病的防控,同时也要对马伊氏锥虫病进行监测。