旋毛虫P53ES重组蛋白对小鼠的免疫保护作用

为进一步探讨旋毛虫P53基因原核表达重组蛋白的免疫保护作用,本实验采用纯化的重组蛋白作为抗原免疫小鼠,免疫剂量为50μg/100μL,每隔10d免疫1次,共3次。末次免疫后10d,每只小鼠以200条旋毛虫肌幼虫攻虫。分别检查感染后7d小鼠肠道内成虫数量、体外培养雌虫所产新生蚴数量以及感染后35d肌肉荷虫量。结果显示:小鼠肠道内成虫、新生蚴和肌幼虫的减虫率分别为61.9%、53.45%和71.48%,表明旋毛虫表达P53基因的重组蛋白对小鼠产生了较好的免疫保护效果。     

几种旋毛虫抗原PAPS诊断液的效果比较试验

将几种旋毛虫抗原以同一浓度（0.6mg/mL）与PAPS微球交联,制成诊断试剂,进行旋毛虫阳性血清检测效果比较试验。结果显示,成虫、成虫ES、新生幼虫、肌幼虫B峰4川抗原均出现非特异性反应,而肌幼虫、肌幼虫ES、肌幼虫A峰抗原具有很高的敏感性,三者效价均达1:640。将此3种抗原所制得的诊断试剂对几种寄生虫阳性血清进行交叉试验,显示肌幼虫ES抗原对血吸虫、锥虫、弓形虫、肺吸虫、牛肝片吸虫、羊肝片吸虫阳性血清均不出现交叉反应,而肌幼虫A峰抗原、肌幼虫抗原对牛、羊肝片吸虫均出现交叉反应,对其他血清则不出现。表明肌幼虫ES抗原效果最佳,特异性最好,有很高的应用价值。     

旋毛虫期特异性基因的筛选与鉴定

对旋毛虫新生幼虫 期特异性基因进行筛选与鉴定,结果表明:对新生幼虫cDNA文库进行核酸杂交筛选，获得7个阳性克隆，其大小在1.4 kb左右；用放射性同位素α³²P标记cDNA探针后，与旋毛虫成虫、肌幼虫、新生幼虫、成虫/新生幼虫cDNA文库质粒DNA进行Southern印迹杂交，结果与成虫/新生幼虫、新生幼虫cDNA文库质粒DNA有杂交而与成虫、肌幼虫cDNA文库质粒DNA不杂交，因此该探针是新生幼虫期所特有的cDNA片段。     

旋毛虫新生幼虫cDNA文库构建及其特异性基因的筛选与鉴定

构建旋毛虫新生幼虫cDNA文库并对旋毛虫新牛幼虫期特异件基因进行筛选与鉴定,筛选出期特异性的基因片段.用λZAPⅡExpress载体成功地构建了旋毛虫新生幼虫的cDNA文库,并用放射性同位素a-38P标记cDNA探针对筛选出的阳性克隆进行鉴定.所构建的cDNA文库容量为1.92×106,重组效率为98.6%,所有的克隆片段都在0.5～2.0 kb之间,筛选获得7个阳性克隆,其大小在1.4 kb左右;用放射性同位素a-32P标记cDNA探针后,与旋毛虫成虫、肌幼虫、新生幼虫及成虫/新生幼虫cDNA文库质粒DNA进行Southern印迹杂交,结果与新生幼虫和成虫、新生幼虫cDNA文库质粒DNA有杂交而与成虫、肌幼虫cDNA文库质粒DNA不杂交.该基因是新生幼虫期所特有的cDNA片段.     

旋毛虫不同发育时期排泄分泌物抗原在免疫学诊断中的应用研究

[目的]系统了解并比较旋毛虫不同发育时期排泄分泌物(ES)抗原的免疫学特性,探索可用于临床检测出栏猪旋毛虫感染的血清学诊断技术。[方法]分别以旋毛虫肠道期10 h肌幼虫(10 h ML)、肠道期30 h成虫(30 h Ad)、3 d成虫(Ad3)、6 d成虫与新生幼虫混合(Ad6+NBL)以及肌幼虫(ML)五个不同发育时期的ES作为包被抗原,应用ELISA方法,检测感染不同剂量、不同天数的猪血清中的抗旋毛虫抗体Ig M和Ig G水平,绘制抗体消长规律曲线并进行数据分析。[结果]10 h ML ES和ML ES作为包被抗原适合检测不同感染剂量、感染35 d之前的猪抗旋毛虫Ig M抗体,低剂量感染10 d左右可以检出,高剂量感染5 d也可以检出;Ad3 ES作为包被抗原对高剂量感染35 d之前的猪抗旋毛虫Ig M抗体检测敏感;Ad3和ML的ES作为包被抗原可检测不同剂量、感染35 d之后的猪抗旋毛虫Ig G抗体,其中Ad3 ES抗原检测低剂量感染的效果优于ML ES抗原。[结论]肠道期肌幼虫、成虫和肌幼虫的ES抗原可用于检测旋毛虫的早期感染,成虫和肌幼虫的ES抗原可用于检测出栏猪的旋毛虫感染。本研究为进一步合理有效利用旋毛虫不同发育时期的ES抗原,建立更有效的检测屠宰动物旋毛虫感染的方法提供了重要理论基础和参考。     

五种旋毛虫抗原对猪的免疫保护作用研究

本实验研究了旋毛虫肌幼虫可溶性粗抗原、排泄分泌抗原（ＥＳ）、表面抗原（ＳＡ）及成虫ＥＳ、ＳＡ５种抗原对猪的免疫保护作用。结果５种抗原对猪均具有一定程度的免疫原性，可诱导猪体产生对攻击感染的抵抗力（减虫率），其中肌幼虫粗抗原为５５．２０％；肌幼虫ＥＳ为４２．５６％，肌幼虫ＳＡ为７２．２１％；成虫ＥＳ为３２．９２％；成虫ＳＡ为４２．１７％。免疫５种抗原后用肌幼虫“Ｂ”抗原、新生幼虫可溶性抗原及成虫可溶性抗原进行ＥＬＩＳＡ检测，均可测出血清抗体应答反应，其中以相应抗原测出的抗体应答较强烈。免疫５种抗原后猪外周血液中Ｂ淋巴细胞减少，Ｔｈ及Ｔｓ增加，Ｔｈ／Ｔｓ比值降低，呈暂时的细胞免疫抑制现象。     

中国旋毛虫分离株成虫和新生幼虫基因文库的构建及筛选

利用λＺＡＰⅡ载体构建了中国分离株Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌａｓｐｉｒａｌｉｓ及Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌａｎａｔｉｖａ成虫和新生幼虫ｃＤ－ＮＡ基因文库,检测结果表明,所克隆的ｃＤＮＡ片段分布在０．２～２．０ｋｂ之间,表明２个ｃＤＮＡ基因文库对ｍＲＮＡ的覆盖面很大。利用ＲＡＰＤ技术,以肌幼虫基因文库作对照,采用７０个单引物及２０对复合引物对以上２个文库进行筛选扩增,结果：（１）共获得２条Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ及４条Ｔ．ｎａｔｉｖａ的成虫与新生幼虫特异性基因片段,鉴于成虫与新生幼虫是旋毛虫的２个侵袭性阶段,其所特有的特异性基因片段极有可能就是这２个时期虫体的侵袭性因子基因,即所要寻找的强保护性抗原基因,从而为后续研究奠定了基础;（２）发现１条Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ种特有的基因片段,这一特异性基因片段为虫种鉴定提供了物质条件;（３）发现旋毛虫同种不同分离株（中国分离株及法国分离株）间ｃＤＮＡ文库扩增图谱完全相同,进一步证实了旋毛虫种内基因的低流动性     

旋毛虫p53糖蛋白抗原研究进展

旋毛虫p53糖蛋白是旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原的主要抗原组分之一,具有肌幼虫期特异表达特性,主要定位在肌幼虫β-杆细胞.不同旋毛虫种p53糖蛋白氨基酸序列相对保守,但抗原性有差异,在同一种内变异极少,具有种及属特异性抗原表位.论文就旋毛虫p53糖蛋白抗原的分子结构、不同发育时期的特异性表达、抗原性等方面的研究进展进行综述...     

旋毛虫感染性第一期幼虫分泌丝氨酸蛋白酶

寄生性蠕虫通过产生许多种具有不同生物学活性的蛋白质以刺激宿主的应答。这些蛋白质的一个重要组分便是由许多种线虫和吸虫如曼氏分体吸虫和肝片进吸虫产生的蛋白酶,其在虫体侵人和移行进入宿主组织、吸血及其它生物学活动中起作用。旋毛虫在其生活史的各个时期也产生许多种蛋白质,其中,有些被鉴定为过氧化物酶和重要的抗原。但有关旋毛虫的蛋白水解酶尚未见报道。旋毛虫感染性第一期幼虫在宿主消化酶作用下被释放出来后侵入小肠绒毛而转移到小肠。新生第一期幼虫经小肠侵入肠系膜淋巴或血．液,通过组织,最终侵入骨胳肌形成保姆细胞。…     

旋毛虫Serpin基因在不同发育时期的mRNA表达水平变化及虫体表达特性

为研究旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin),基因在不同发育时期的mRNA表达水平变化,本研究应用实时荧光定量PCR技术对不同发育时期的虫体的Serpin在mRNA表达水平进行检测。同时利用鼠抗重组蛋白血清对Serpin在旋毛虫成虫、新生幼虫、成囊前期幼虫及肌幼虫中进行定位,以鉴定该Serpin基因的表达特性。研究结果显示,在成虫时期,3 d时表达量明显高于6 h和5 d的表达量(P﹤0.05);成囊前期表达量很低,其中18 d时表达量最低(P﹤0.05);肌幼虫时期在26 d、38 d和48 d均有大量表达(P﹤0.05)。免疫荧光染色结果表明,Ts Serpin蛋白在5 d成虫期的体表表达;在新生幼虫和14 d成囊前期幼虫的体内体表均有表达;38 d肌幼虫时期明显可见表皮及体内均有表达。本实验为探究旋毛虫在宿主体内免疫逃避机制奠定基础。     

蜜蜂幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR检测方法的建立

为建立新型高灵敏度的幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR (droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,针对幼虫芽孢杆菌16S rRNA基因设计特异性引物和探针。通过对反应体系优化,建立幼虫芽孢杆菌ddPCR检测方法,并对方法的灵敏度、线性关系、特异性及重复性进行评估。结果:建立的方法与其他6株非幼虫芽孢杆菌无交叉反应,具有良好的特异性;线性关系良好(R^2=0. 991 4);灵敏度为2. 9 copies/μL; ddPCR检测的相对标准偏差(RSD)在0. 93%～5. 27%,重复性好。试验表明本研究建立的ddPCR方法可以对幼虫芽孢杆菌进行绝对定量检测。     

羊狂蝇幼虫药物防治试验及最佳防治时间的选择

本文依据对我省黄河谷地的贵德县和高原腹地的玉树县两个不同海拔、气候地区羊狂蝇成蝇出现及消失时间等活动规律的观察结果,选用阿维菌素和伊维菌素药物的不同剂型,分别在9月上旬和10月中旬选择自然感染羊狂蝇幼虫的绵羊200只;采用注射液口服、泼背和片剂口服的方法,对羊狂蝇幼虫进行药物驱除的效果比较试验。结果表明:9月上旬驱虫组效果达100%,而10月份驱虫组效果不理想。     

工蜂胎对小鼠非特异性免疫功能的影响

通过碳粒廓清实验,研究了工蜂胎对机体免疫功能的影响。结果表明:工蜂胎能显著提高ICR小鼠碳粒廓清指数、胸腺质量指数和脾指数。与对照组相比,差异显著(p<0.05)或极显著(p<0.01)。表明工蜂胎具有显著提高机体的非特异性免疫功能的作用。上述药理作用以蜂王胎为对照,结果发现,工蜂胎与蜂王胎的差异不显著(p>0.05)     

黑腹胃蝇三龄幼虫形态学和成虫行为方式研究

2008―2010年,对寄生于新疆卡拉麦里与普氏野马同域生活的家马体内的黑腹胃蝇(Gasterophilus pecorum)进行了实验室培养和野外行为观察。将收集到的920只3龄幼虫进行室内培养,结果成功化蛹35个(3.80%),化蛹期为13～27 d,巅峰期为18～20 d(42.86%);17个(48.57%)个体羽化,羽化期为15～27 d,巅峰期为21～22 d(22.86%)。在这些羽化的成蝇当中雄性占11.76%,雌性占88.24%,雄雌比为0.13;其存活期为2～8 d,较大存活率发生在第4-6天(58.82%)。3龄幼虫体长（13.2±7.0） mm,体宽（5.1±4.0） mm,体质量（241±30） mg。相关性分析表明,幼虫的体长、体宽和体质量与成蝇的性别无相关性。交尾行为没有在野外或者靠近的马体的周围环境中发现,羽化初期有梳理和寻求寄主行为。黑腹胃蝇的卵在马的体表和植物茎叶上也均未发现。     

Digestibility and safety of dry black soldier fly larvae meal and black soldier fly larvae oil in dogs

Two trials were conducted to assess the acceptance, safety and digestibility of diets containing various inclusion levels of partially defatted black soldier fly (Hermetia illucens) larvae (BSFL) meal and BSFL oil by dogs. In trial 1, 5 extruded diets were evaluated for acceptance in adult Beagle dogs (n = 20; 10 male, 10 female) during a 48-hr period. Diets contained graded levels of BSFL meal (5.0%, 10.0%, and 20.0%), or graded levels of BSFL oil (2.5% and 5.0%), and all diets were well accepted. Thus, a digestibility trial (trial 2) was run with 56 adult dogs (16 male, 40 female) allocated into 7 dietary treatments; dogs were offered an extruded control diet containing no BSFL meal or oil, or extruded diets where BSFL meal partially replaced poultry by-product meal and corn meal at dietary levels of 5%, 10%, or 20% inclusion, or diets with BSFL oil partially replacing poultry fat at a 1:1 ratio at levels of 1%, 2.5%, or 5% inclusion. The treatment diets were fed for 28 d, during which time dogs were monitored for health (via physical examinations, clinical observations, and blood chemistry and hematology) and ingredient evaluation (via body weight, feed consumption, stool observation, and fecal nutrient apparent total tract digestibility). There were no significant differences in body weight or food consumption between treatment groups (P > 0.05) and daily observations indicated that the general health of the animals was maintained throughout the study. Stool quality was maintained at 3.2 to 3.4 (on a 5-point scale with a score of 1 being watery diarrhea and a score of 5 being hard, dry, and crumbly) per treatment group over the fecal observation period (days 22 to 27), indicating a well formed, sticky stool. All group mean hematology and blood chemistry parameters remained within normal limits for dogs. Apparent total tract digestibility of dry matter, protein, fat, and calories was not affected by treatment (P > 0.05). In general, amino acid digestibility was not impacted by treatment although some minor changes were observed. Apparent total tract digestibility was high for all nutrients examined. Overall, it was concluded that BSFL meal and BSFL oil are well tolerated by dogs and their consumption results in no impact to physiology that would be concerning. Based on these data, BSFL meal and oil did not affect general health and could be included safely in dog diets.     

工蜂对卵和幼虫性别识别能力的观察与研究

本研究通过改变雄性卵与幼虫的孵化和哺育状态，观察工蜂对这些卵和幼虫的接受情况，探讨工蜂对卵和幼虫性别的识别能力。结果表明，工蜂对卵和大龄幼虫性别的识别能力较强，而对1-3日龄小幼虫的性别的识别能力较弱。     

PCR检测感染早期小鼠血液中旋毛虫幼虫的研究

为了研究PCR检测感染小鼠血液中旋毛虫DNA的敏感性,应用旋毛虫1.6 kb重复序列为扩增靶序列对旋毛虫(T1)、乡土旋毛虫(T2)、布氏旋毛虫(T3)、伪旋毛虫(T4)和南方旋毛虫(T7)肌幼虫DNA进行PCR扩增,并检测小鼠感染20、100、300条T1肌幼虫后不同时间的外周血.结果表明,T1、T4和T7肌幼虫可扩增出特异性目的条带(510 bp),而T2和T3无扩增产物;1、0.04和0.02条T1、T4和T7肌幼虫均能扩增到清晰的目的条带(510 bp).20条幼虫感染小鼠后5 d～6 d,PCR阳性率均为7.69%;100条幼虫感染小鼠后5 d～12 d可检出旋毛虫DNA,其中感染后5 d～7 d的阳性率分别为30.77%、38.46%及30.77%;300条幼虫感染小鼠后5 d～15 d可检出旋毛虫DNA,感染后7 d的阳性率为61.54%,感染后6 d与8 d～10 d的阳性率均为53.85%. 3组旋毛虫感染小鼠PCR阳性率间的差异有统计学意义(p<0.01),PCR阳性率随感染剂量的增加而升高(p<0.01),100条与300条感染小鼠感染后不同时间的PCR阳性率与检测时间有相关性(p<0.01).以上实验结果表明PCR检测感染小鼠血液中旋毛虫DNA的敏感性与感染程度和检测时间有关,对感染早期旋毛虫抗体阴性宿主有一定诊断价值.     

Variability in germination and in temperature and storage resistance among Paenibacillus larvae genotypes

There are several methods for cultivation of Paenibacillus larvae, the causative agent of American foulbrood (AFB) in honey bees. Protocols for detection of sub-clinical levels of the bacterium from honey and bee samples include heat treatment of samples. The main objective of this study was to investigate if there is variability in temperature resistance among P. larvae genotypes, potentially leading to biased diagnose and disease monitoring. The variation in germination and proliferation ability among type collection (N = 4) and field isolates (N = 4) of P. larvae representing four different genotypes was investigated. Results demonstrate a significant variability between P. larvae genotypes in germination rate on solid media as well as in endospore resistance to heat treatment and storage. It is concluded that strains of different genotypes should be included in evaluation of standard laboratory protocols for cultivation of P. larvae to avoid bias in disease monitoring and quantification of the pathogen.     

青海虫草蝠蛾幼虫空间分布型及抽样技术的研究

运用青海蝠蛾幼虫3年的调查资料，通过Iwao平均拥挤度、Taylor幂法则和聚集度指标等7种方法，分析测得青海虫草蝠蛾幼虫的空间分布型为聚集分布。确定了最佳抽样方法为“Z”字型抽样。     

门源草原毛虫幼虫发育特性的研究

通过野外调查和室内研究相结合的方法,研究了青海高寒草甸地区优良牧草的主要害虫门源草原毛虫幼虫的发育特性.结果表明,门源草原毛虫幼虫虫龄划分为雄虫6龄,雌虫7龄.头壳宽与摄食量为显著的直线相关关系;而头壳宽与体重,虫龄与头壳宽、体长、体重均呈显著的指数关系;头壳宽与体长,虫龄与摄食量呈显著的幂函数关系.草原毛虫的相对生长率随虫龄增大只是略有上升,生长率较恒定.门源草原毛虫一生取食紫羊茅植物的食量约为1 700 mg(干重).草原毛虫的相对生长速率(RGR)为0.03～0.08 mg/(d·mg),相对取食速率(RCR)为14.9～1.2 mg/(d·mg),近似消化率(AD)为23%～95%,净转化效率(ECD)和毛转化效率(ECI)分别为0.28%～11%和0.26%～4.2%.