嗜水气单胞菌的随机扩增多态DNA分型

用 4 5条随机引物对不同来源的 9株嗜水气单胞菌进行了 DNA指纹分析 ,其中 10条引物呈现良好的多态性和稳定性。建立的随机扩增多态 DNA(RAPD)反应的最佳条件 :模板 DNA 2 0 ng,随机引物 0 .8μm ol/ L ,d NTP 15 0μmol/ L,Mg2 3.5 mm ol/ L,Taq酶 2 .0 U;95℃预变性 5 min,94℃变性 6 0 s,36℃退火 70 s,72℃延伸 12 0 s,4 0个循环。初步建立了嗜水气单胞菌的 RAPD指纹图谱 ,分析了 9株嗜水气单胞菌之间的遗传距离。据此将 9株菌归为 3个组 ,为该菌的分型提供了新的方法。     

罗非鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定

北京某鱼场饲养的罗非鱼陆续发病死亡,其体表鳞片局部出血,肝、胰、脾脏肿大坏死,肠腔积水等,从病死及濒死罗非鱼的肝、胰脏中分离到 ４ 株细菌,经形态学、生理生化特性及血清凝集试验,鉴定为嗜水气单胞菌。４ 株细菌均能致死小鼠和鲢鱼。药敏试验表明,４ 株细菌对环丙沙星、蒽诺沙星高度敏感,而对青霉素和红霉素不敏感。     

1株甲鱼嗜水气单胞菌的分离和鉴定

从发病甲鱼体内分离到1株病原细菌,经微生物学鉴定表明为甲鱼嗜水气单胞菌.     

鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定

从陕西省甘养殖场送检的病鱼中分离到1株革兰氏阴性杆菌，培养特征观察笔生化特性分析结果证实为嗜水气单胞菌；小鼠和金鱼致病性试验证实分离菌具有致病性；药敏试验结果表明该菌对链毒素、万古霉素等高度敏感，对羧苄青霉素、氟哌酸等不敏感。用该菌制成灭活免疫金鱼保护力可达到80％以上。     

巨蜥源嗜水气单胞菌分离株的病原特性分析

从 3批均以呼吸道症状和出血性胃肠炎为主要特征的死亡巨蜥中获得 3株嗜水气单胞菌。其培养性状及生化特性基本一致 ,均可产生β-溶血环。分离株对小鼠有较强的致病性 ,对PG、COS、VAN、CIP、NOR、CAR耐药。 3个菌株具有相同的菌体 (O)抗原血清型 ,该血清型与嗜水气单胞菌参考菌株 J1不同。应用丁胺卡那霉素和火焰消毒笼舍可有效防治上述菌株所导致的巨蜥疾病     

嗜水气单胞菌研究进展

嗜水气单胞菌属于弧菌科气单胞菌属,在自然界分布广泛,可以感染多种水生及陆生动物并引起不同的疾病,是一种重要的人—兽—鱼共患病病原菌,本文概述了嗜水气单胞菌的分类地位和生物学性状,并对其鉴定方法、致病因子和由其引起的疾病进行了综述。     

一株嗜水气单胞菌噬菌体的分离鉴定与生物学特性

本试验以嗜水气单胞菌CVCC-4002为宿主从鲤鱼内脏中分离得到一株噬菌体,命名为BLCC16-001,用PEG8000浓缩、超速离心获得高纯度的噬菌体进行电镜观察.测定噬菌体宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、热稳定性、pH稳定性及噬菌体体外杀菌效果.结果表明:电镜下,噬菌体BLCC16-001头部直径约6...     

嗜水气单胞菌GYK1株培养基的优化

在营养肉汤培养基的基础上,经过一系列嗜水气单胞菌GYK1株培养试验,结果证明,成本价格较低的蔗糖、酵母膏可以代替葡萄糖、牛肉膏,从而降低培养基原料成本;添加少量的K2HPO4和微量元素溶液(Mg2+、Fe2+、Zn2+、Mn2+)可明显提高培养液的活菌数;通过正交试验得到低成本、高得率的适合嗜水气单胞菌GYK1菌株生长的培养基配方,该培养基组成(g/L):蛋白胨10.0、酵母膏10.0、蔗糖15.0、K2HPO42.28;NaCl 5.0微量元素(硫酸镁0.1,硫酸亚铁0.04,硫酸锌0.00375,二氯化锰0.0021)。24 h摇瓶培养,菌液中的最高活菌数可达316×108cfu/mL,比营养肉汤培养基活菌数(151×108cfu/mL)提高100%以上。     

聚合酶链反应(PCR)法检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因

根据已报道的鱼源嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶基因序列设计和合成了 1对可扩增目的片段长度为 893bp的引物 ,建立了检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因 PCR方法。脱脂奶平板产溶蛋白圈的 10株鱼源嗜水气单胞菌株以及 ATCC796 6检测均为阳性 ,检测的灵敏度可达 2 .0× 10 - 3g/ L的模板 DNA。表明 PCR法在分子水平快速、特异检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶并可作为流行病学调查的手段     

嗜水气单胞菌粘附特性的研究

不同来源的６株嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）对１０种不同红细胞的血凝试验表明，Ｊ－１株能凝集所有的１０种红细胞，而与其他菌株的血凝谱有所不同。血凝图式有２种：人、鸡、麻雀的红细胞凝集快，呈大小不等的絮状；而鲫鱼、绵羊、猪、小鼠、兔、鸭、犬的红细胞凝集慢，且呈均匀颗粒状。这两种血凝均能被Ｄ－甘露糖抑制，但不能被Ｊ－１株Ｒ菌毛抑制。组织粘附试验显示，Ｊ－１株能粘附小鼠和鲫鱼的肠组织和肠绒毛。将提纯的Ｒ菌毛预处理肠组织，或用Ｄ－甘露糖或木瓜蛋白酶消化的Ｒ菌毛抗血清Ｆａｂ片段预处理菌体，都不能抑制上述的粘附作用。Ｊ－１株对ＨＥｐ－２细胞显示强粘附，菌体随机粘附在细胞上，有少数侵入细胞浆内。其余５株菌的粘附特性与Ｊ－１株不尽相同。所有６株菌对草鱼肠组织及肠绒毛、ＥＰＣ细胞（鲤鱼乳头状上皮瘤细胞系）均无粘附性。     

鳝鱼嗜水气单胞菌外毒素的分离纯化及活性研究

为探讨嗜水气单胞菌的致病机理,经饱和硫酸铵分级盐析、Sephadex G-75葡聚糖凝胶层析和PEG6000浓缩,获得层析纯的外毒素。对纯化外毒素的溶血价、溶血谱、毒素稳定性及对小鼠的致病性等生物学性状进行研究。结果表明:该纯化外毒素对多种动物红细胞有溶血作用;对小鼠有较高的致死率;溶血活性的最适pH值为5~7;对热不稳定,37℃处理3 d可保持活性,14 d后基本失活,56℃处理2 min及100℃处理1 min即基本丧失活性。     

Dot-ELISA法检测致病性嗜水气单胞菌

在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16S rRNA基因检测72株气单胞菌分离株.结果显示致病性嗜水气单胞菌检测阳性率分别如下:Dot-ELISA法90.3％(65/72)、脱脂奶平板法75％(54/72)、aer基因PCR法94.4％(68/72)、16S rRNA PCR法81.9％(59/72),Dot-ELISA与其他3种方法的符合率分别为79.2％(57/72)、91.6％(66/72)、81.9％(59/72).在ECPase54兔抗血清制备后的2、4、6、12、18个月,用Dot-ELISA检测72株分离株,检测结果重复性好.结果表明Dot-ELISA法敏感、特异、实用,可用于鱼类致病性Ah的临床诊断.     

企鹅源嗜水气单胞菌的分离鉴定

从上海某水族馆因血痢、厌食、消瘦而死亡的秘鲁帝企鹅的心脏、肝脏中分离到2株细菌SH051237和SH060104,其培养性状及生化特性基本一致,经生化试验、VITEK试验等鉴定为嗜水气单胞菌.动物试验表明,分离株对小鼠均具有较强的致病性,且从死亡鼠回收到相应细菌.结果表明,分离到的菌株为致病性嗜水气单胞菌.     

北极狐嗜水气单胞菌的分离与鉴定

从北极狐脏器中分离到一种革兰氏阴性杆菌 ,经培养特征、形态、生理生化、致病力测定及药敏试验证实为嗜水气单胞菌 ,确定该菌为引起狐致死的病原菌     

3株嗜水气单胞菌弱毒株的毒力相关特性分析

对健康鲫鱼和水体环境中分离的3株嗜水气单胞菌NJ-4、NJ-13和CS-13的毒力相关特性进行分析。采用PCR技术检测该菌5种主要毒力基因：气溶素（aer）、细胞毒性肠毒素（act）、细胞兴奋性肠毒素（alt）、温敏胞外蛋白酶（eprCAI）和丝氨酸蛋白酶（ahp）,并进行溶血性、溶蛋白性、细胞毒性、细胞黏附特性和主要外膜蛋白（MOMP）图谱分析,以及斑马鱼致病性试验。结果显示：NJ-4不合上述5种毒力基因,NJ-13只含有ahp基因,CS-13仅具备aer基因。3个菌株培养上清均不溶血、不溶蛋白;NJ-4和CS-13培养上清不能致细胞病变,NJ-13上清对细胞的毒力效价达1：128;而强毒株BSK-10培养上清的溶血价、溶蛋白效价和细胞毒力效价分别为1：128、1：256和1：256。NJ-4、NJ13和CS-13对HEp-2细胞有一定的黏附能力,但与强毒株BSK-10相比,黏附能力较弱。NJ-4、NJ-13和CS-13的培养液上清均不致斑马鱼死亡,菌体有一定致病作用,对斑马鱼的LD50超过10^8CFU／mL;而BSK-10培养上清和菌体致病性均很强,菌体对斑马鱼的LD50小于10^5CFU／mL。NJ-4、CS-13的MOMP条带与BSK-10相似度很高,而与NJ-13有一定差别,可能与菌株的来源有一定关系。结果表明,3株细菌均属弱毒株,特别是NJ-4的毒力最弱。     

嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的纯化及特性分析

为阐明嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的性质及其在致病过程中的作用，试验以我国分离的嗜水气单胞菌J-1株为研究对象．纯化了其弹性蛋白酶．并对该酶进行热稳定性、蛋白酶抑制剂抑制作用、金属离子影响和致病性等特性分析。结果表明．嗜水气单胞菌J-1株的培养上清经35％～60％硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析，可获得纯化的弹性蛋白酶．SDS-PAGE显示单条带．相对分子质量约38000。该酶对热稳定，EDTA可抑制其活性，PMSF对其无影响，金属离子铜、锌、钴等抑制其活性。说明此酶属于热稳定金属蛋白酶。腹腔注射纯化的弹性蛋白酶能致死小鼠．其对小鼠的LD50为6．4μg（0．2mL）．表明该酶是一种直接致病因子。