脂肪酶产生菌的分离、鉴定及其发酵条件优化

从被废油长期污染的土壤中分离出一株酶活力大于5 U/mL的菌株,经16S rRNA鉴定,确定为铜绿假单胞菌属,命名为Pseudomonas aeruginosa B6。经发酵优化,取得其最佳发酵培养基与条件:葡萄糖0.4%、酵母粉0.7%、硫酸铵0.7%、七水硫酸镁0.1%、磷酸氢二钾0.1%;接种量为9.5%;起始pH值为6.5;温度为30℃,为脂肪酶发酵生产奠定了基础。     

土壤中脂肪酶产生菌的筛选、鉴定及发酵条件的优化

从上海地区富含油性的土壤中,以橄榄油为唯一碳源进行富集培养、以罗丹明B为指示剂的平板进行初筛,摇瓶复筛得到产脂肪酶菌株51-43。通过对51-43进行形态学观察,以及18S rDNA特征片段比较分析,初步确定51-43为黑曲霉(Aspergillus niger)。通过单因素实验和正交实验,对黑曲霉51-43产脂肪酶的发酵条件进行优化。确定其最优发酵条件为:蛋白胨2.35%,小麦粉1%,K2HPO40.1%,MgSO4.7H2O 0.05%,CaCl20.01%,NH4Cl 1%,Tween-80 0.5%,橄榄油1%,pH 7.0。此培养基在28℃,160 r/min的条件下发酵培养72 h,脂肪酶水解活力达到19.28 U/mL,是初始发酵培养基条件下所得脂肪酶酶活的2.21倍。     

产脂肪酶菌株的筛选、鉴定及响应面法优化发酵条件

从土壤中分离纯化出高产脂肪酶的菌株,通过在360nm紫外光下比较罗丹明B(Rhodamine B)筛选培养基中荧光圈的大小后得到7株菌株。利用对硝基苯酚-分光光度法测定目的菌株的酶活大小对菌株进行复筛,最终得到一株酶活较高的菌株Youzh-1,经细菌形态观察,16S rRNA序列分析,确定其为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens strain ORTB3)。对此菌株进行发酵条件的优化,首先对发酵条件进行单因素的优化,在单因素实验的基础上对Youzh-1设计Box-Behnken实验进一步优化培养基最终得到最优发酵条件为葡萄糖18.825g/L、牛肉膏25.98g/L、,氯化钠10g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、橄榄油乳化液12ml/ml,在温度41℃、pH6的条件下进行发酵实验验证,经过测定发现其脂肪酶粗酶酶活为79.87U/ml,相比初始酶活37.67U/ml提高了112%。这为脂肪酶的工业化生产提供了理论依据。     

米黑根毛霉脂肪酶的克隆表达及发酵条件优化

米黑根毛霉脂肪酶RML是一种重要的工业用酶,具有非常广泛的应用前景。本研究将人工合成的RML基因rml克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建pPIC9K-rml诱导型表达载体。表达载体经线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,并使用抗生素G418筛选、三丁酸甘油酯-MM板及PCR方法筛选阳性重组工程菌。工程菌发酵液经SDS-PAGE分析、三丁酸甘油酯板鉴定,表明脂肪酶RML在毕赤酵母中获得高效表达,且蛋白分子大小与预期一致。进一步优化了发酵条件,包括对培养基组分、诱导剂浓度和发酵温度等的优化。优化后的培养基组成为：甘油4.0%,（NH4）2SO45.000 g/L,CaSO40.465 g/L,K2SO49.100 g/L,MgSO4.7H2O7.450 g/L;培养条件为：pH值6.0,生长阶段温度30℃,诱导阶段采用22℃低温诱导,诱导期每24 h补加甲醇浓度为3%。优化后,发酵液中的RML活力最高达到116 U/ml,比优化前提高了3.14倍。     

Burkholderia cepacia S31细菌高产位置非特异性脂肪酶的发酵条件优化

从油脂污染的土壤中分离获得了1株高效产脂肪酶的细菌S31,经鉴定为Burkholderia cepacia(洋葱伯克霍尔德菌)。B.cepacia S31所产脂肪酶具有活性高、耐高温、耐有机溶剂和位置非特异性水解甘油三酯等优良特性。为了进一步提高S31菌株的产酶量,对该菌产酶的发酵条件进行优化。通过单因子试验筛选出最佳碳源为麸皮,最佳氮源为蛋白胨,最佳诱导物为Tween-80。通过对培养基各组分及外部培养条件因素的正交试验,确定S31菌产脂肪酶的摇瓶发酵最优条件为:以20 g.L-1麸皮、10 g.L-1蛋白胨、40 g.L-1Tween-80、0.5 g.L-1MgSO4和2 g.L-1K2HPO4为培养基(pH 7.0),250 mL三角瓶装40 mL培养基,3%接种量,30℃、180 r.min-1培养66 h可获得最理想的酶产量,达283.6 U.mL-1,比优化前提高2.73倍。     

耐甲醇脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

[目的]筛选耐甲醇脂肪酶产生菌,并对其酶学性质进行研究。[方法]采用培养基中添加不同浓度甲醇（0、5%、10%、15%、20%）的方法筛选甲醇耐受性脂肪酶产生菌,形态学和ITS序列分析确定菌株的种属关系,硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose FF纯化脂肪酶,并对纯化的酶进行耐甲醇试验和酶学性质研究。[结果]筛选到183株脂肪酶产生菌,菌株SXL-107对浓度20%甲醇具有较好耐受性,脂肪酶活力达104 U/ml;ITS同源性分析确定该菌为Galactomyces geotrichum;经过纯化的SXL-107脂肪酶在浓度10%甲醇溶液中作用48 h后,剩余酶活为96.15%;该酶最适温度为40℃,pH为7.0,50℃温浴60 min仍有80%的酶活力,在pH 4.0~9.0间稳定,微量的Mg2＋、K＋和Zn2＋对该酶有激活作用,Mn2＋和CO2＋有抑制作用,分子量约为66 kDa。[结论]筛选到一株耐甲醇能力较强的脂肪酶产生菌,为该酶在生物柴油中的应用奠定基础。     

葡萄糖氧化酶产生菌发酵条件优化研究

[目的]探讨黑曲霉发酵产葡萄糖氧化酶的最佳发酵条件。[方法]研究不同培养基成分及发酵条件下黑曲霉产葡萄糖氧化酶的活性。[结果]培养基最佳成分为及浓度为：葡萄糖100g/L,有机氮源为4g/L蛋白胨,无机氮源为3g/L硝酸钠;最佳发酵条件为28℃,pH值6,发酵周期72h。[结论]通过优化,黑曲霉发酵产葡萄糖氧化酶的活性明显提高。     

耐酸性α-淀粉酶产生菌的发酵条件优化

[目的]优化耐酸性α-淀粉酶产生菌的发酵条件。[方法]在筛选出的耐酸性α-淀粉酶产生菌的基础上,对其培养基C、N含量、接种龄、接种量、初始pH值、摇瓶转速及温度等发酵条件进行优化。[结果]耐酸性α-淀粉酶产生菌最佳发酵条件为接种龄14 h,接种量8%,初始pH值5.5,发酵温度35℃,转速150 r/min,接种菌液量25 ml,培养基中C、N的含量分别为1.0%。[结论]在优化条件下,酶活力达到31.4 U/ml,比未优化时提高了65.3%。     

产脂肪酶细菌的筛选及发酵培养条件的优化

为给扩大脂肪酶的生产源提供基础资料,对富含油脂的67份土壤样品进行了产脂肪酶细菌的筛选及目标菌株发酵培养条件的优化试验。结果表明:筛选分离出15株脂肪酶产生菌,经过对其发酵液脂肪酶活力的比较,菌株D9-1发酵液脂肪酶活力最高。目标菌株D9-1产脂肪酶最佳培养条件:最适氮源为1%蛋白胨,最适碳源为1%橄榄油,表面活性剂为1%OP-10,最适发酵温度30℃,摇床转速为170 r/min,发酵培养时间为24 h。     

洋葱伯克霍尔德菌0107产脂肪酶发酵条件优化研究

[目的]对洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）0107产脂肪酶发酵条件进行优化。[方法]探讨碳源、氮源、诱导物和pH值等条件对产脂肪酶的影响。[结果]较为合适的培养基组成为玉米粉1.50%,蛋白胨1.50%,橄榄油1.00%,K2HPO40.20%,MgSO40.05%。较优化的培养条件为：起始pH值9.0,30℃培养60h,酶活达9.15U/ml,与初始相比酶活提高1.7倍。酶的最适pH值和温度分别为8.5和所60℃,70℃保温2h酶活稳定,这些性质都有利于对动植物油脂的转酯化。[结论]该研究为洋葱伯克霍尔德菌0107所产酶的广泛应用奠定了基础。     

Fermentation Performance and Characterization of Cold-Adapted Lipase Produced with Pseudomonas Lip35

Strain of Pseudomonas Lip35 producing lipase was isolated in a refrigerator. Lipase production and characterization of this strain were investigated under different conditions. The Pseudomonas was cultivated in shaking flasks in a fermentation medium in various nutritional and physical environments. Lipase production has been influenced by the presence of yeast-extract, soybean powder, NaCl, and Tween-80. Maximum lipase productivity was obtained when the physical environment of the fermentation medium was optimal for 67 h. The production of lipase reached 58.9 U mL-1 The lipase of Pseudomonas Lip35 can be considered to be inducible, but the inducer had little influence on the production of lipase.The lipase was characterized and showed high lipolytic activity from pH 7.5-8.0. The optimum temperature was observed at 20℃ and the thermal inactivation of lipase was obvious at 60℃. The lipase activity was inhibited by K+, stimulated by Ca2+, and thermostability decreased in the presence of Ca2+, therefore the lipase was Ca2+-dependent cold-adapted enzyme.     

毕赤酵母产人源丁酰胆碱酯酶的发酵条件优化

测定不同条件下重组毕赤酵母的蛋白表达量及酶活力,优选毕赤酵母分泌表达人源丁酰胆碱酯酶的发酵条件。在单因素试验的基础上,采用响应面法优化表达条件,确定了毕赤酵母分泌表达人源丁酰胆碱酯酶的最佳发酵条件:发酵时间4.8d,甲醇浓度13.90%,甘油浓度2.1%。使用最佳发酵条件对毕赤酵母进行培养,最终得到的人源丁酰胆碱酯酶的表达量为368.2mg/L,表达量提高了27%。     

Fermentation Performance and Characterization of Cold-Adapted Lipase Produced with Pseudomonas Lip35

Strain of Pseudomonas Lip35 producing lipase was isolated in a refrigerator. Lipase production and characterization of this strain were investigated under different conditions. The Pseudomonas was cultivated in shaking flasks in a fermentation medium in various nutritional and physical environments. Lipase production has been influenced by the presence of yeast-extract, soybean powder, NaCI, and Tween-80. Maximum lipase productivity was obtained when the physical environment of the fermentation medium was optimal for 67 h. The production of lipase reached 58.9 U·mL^-1. The lipase of Pseudomonas Lip35 can be considered to be inducible, but the inducer had little influence on the production of lipase. The lipase was characterized and showed high lipolytic activity from pH 7.5-8.0. The optimum temperature was observed at 20℃ and the thermal inactivation of lipase was obvious at 60℃. The lipase activity was inhibited by K＋, stimulated by Ca^2＋, and thermostability decreased in the presence of Ca^2＋, therefore the lipase was Ca^2＋ -dependent cold-adapted enzyme.     

响应面法优化桔青霉PA-33菌株的发酵工艺

【目的】优化桔青霉Penicillium citrinum PA-33发酵培养基和发酵条件,以提高桔青霉PA-33的抗菌活性。【方法】采用单因素试验确定桔青霉PA-33发酵所需最适基础培养基、碳氮源和无机盐,并利用响应面法设计确定最适发酵培养基配方;在发酵条件单因素试验基础上,采用三元二次通用旋转组合设计和频率分析法优化其最适发酵条件组合。【结果】经优化后,最佳发酵培养基配方为马铃薯汁液219.91 g·L-1、甘露醇34.11 g·L-1、黄豆粉6.25 g·L-1;最适发酵条件为装液量50 mL、接种量3.5%(φ)、发酵温度28℃,摇床转速150 r·min-1、发酵时间12 d。优化后发酵液对大肠埃希菌Escherichia coli的抑菌圈直径为28.99 mm,较优化前抑菌圈直径(18.73 mm)增加了10.26 mm。【结论】采用响应面法、三元二次通用旋转组合设计和频率分析法优化发酵工艺,显著提高了桔青霉PA-33发酵液的抗菌活性,为该菌株的抗菌活性物质的分离以及工业化生产提供依据。     

脱盐盐渍辣椒发酵工艺优化及风味品质研究

以盐渍辣椒为原料,采用正交试验优化脱盐盐渍辣椒发酵工艺,用HS–SPME–GC–MS方法测定脱盐盐渍辣椒发酵前后挥发性成分的变化。结果表明:盐渍辣椒脱盐后,其氯化钠、总糖、总酸、还原糖、氨基酸态氮含量均有显著降低(P0.05);脱盐盐渍辣椒发酵的适宜工艺为接种6%的植物乳杆菌菌液,添加4%蔗糖,发酵5 d;脱盐盐渍辣椒接种发酵后,其酯类、醛类物质相对含量分别较发酵前增加了24%、448%,醇类、烯烃类相对含量分别降低了18%、31%,接种发酵使辣椒中的酯类和醛类物质增加。