北京地区南瓜病毒病病原种类鉴定

为明确北京地区南瓜病毒病种类及其主要侵染病原,2016~2017年在北京周边采集疑似感染病毒的南瓜病样84份,并根据南瓜上的6种病毒特异性引物对其进行反转录PCR(RT-PCR)检测。结果表明:共有79份南瓜病样检测显示阳性,其中黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的检出率最高,为52.38%;其次是小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV),检出率分别为44.01%、14.29%,其他病毒暂未检出。此外,16.67%的样品受2种病毒复合侵染,CMV和ZYMV复合侵染占7.14%,ZYMV和WMV复合侵染占9.52%。北京地区南瓜上优势病毒种类为CMV,且存在病毒复合侵染现象。     

重庆南瓜病毒病病原ELISA 检测及CMV 变异分析

 利用7 种植物病毒的抗体,对采自重庆7 个区县的67 份南瓜病毒病样品进行了抗原直接包被酶联免疫吸附分析（ACP-ELISA）检测。检测结果表明,在这67 份样品中,至少59 份感染了所要检测病毒,其中,感染黄瓜花叶病毒 (Cucumber mosaic virus, CMV)、烟草花叶病毒 (Tobacco mosaic virus,TMV)、番茄花叶病毒 (Tomato mosaic virus, ToMV)、芜菁花叶病毒 (Turnip mosaic virus, TuMV)、蚕豆萎蔫病毒2 号 (Broad bean wilt virus 2, BBWV-2)、马铃薯Y 病毒 (Potato virus Y, PVY)和马铃薯X 病毒(Potato virus X, PVX) 的样品分别为80.60%、77.61%、74.63%、82.09%、76.12%、83.58%和55.22%。在检测呈阳性的59 份样品中有93.22%的样品受到2 种以上病毒的复合侵染,而受7 种病毒复合侵染的样品高达60.00%,表明在南瓜上病毒复合侵染现象相当严重。进一步对54 份受CMV 侵染的南瓜样品检测发现,CMV 亚组Ⅰ (CMVⅠ) 病毒侵染的样品有49 份,占90.74%,CMV 亚组Ⅱ (CMVⅡ) 病毒侵染的样品为11 份,占20.37%;其中6 份（11.11%）样品检测到CMVⅠ和CMVⅡ的复合侵染。以免疫捕获反转录PCR (IC-RT-PCR) 扩增了一个CMVⅠ分离物 (CMV-CQ) 近全长CP 基因并进行序列分析,结果证实其属于CMV 亚组Ⅰ型,其核苷酸序列与国内CMVⅠ型赤豆分离物 (CMV-RB) 的同源性最高,为98.1%。     

新疆石河子及新湖籽用西葫芦病毒病分子检测

以新疆石河子以及新湖总场籽用西葫芦为研究对象,通过观察田间症状并采用RT-PCR方法,研究了籽用西葫芦发病情况。结果表明:籽用西葫芦病毒病田间症状主要表现有花叶型、黄化型、畸形和蕨叶型4类,其中花叶型最普遍。检测出的病毒主要有黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)、小西葫芦黄瓜花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)和番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV-W),4种病毒的总检出率分别为33.3%、84.8%、75.8%和21.2%;其中,样品受2种及以上病毒复合侵染检出率达66.7%,主要以ZYMV+CMV、ZYMV+WMV、ZYMV+CMV+WMV+PRSV-W复合侵染为主。     

冬瓜人工接种5种病毒后的症状观察

选择5种在葫芦科作物上常见的病毒病原：小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV ）、西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus,WMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、番木 瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）、南瓜花叶病毒（Squash mosaic virus,SqMV）,人工接种子叶 期的冬瓜幼苗,观察分析5种病毒在冬瓜上的症状差异。结果表明：这5种病毒均可侵染冬瓜,且不同病毒在冬瓜 上的发病时间、发病率及症状存在明显差异：显症最早的是SqMV,最迟的是WMV;发病率普遍较低,都在30 %以下 ,ZYMV的发病率仅为4 %。     

重庆辣椒病毒病病原初步鉴定和分析

利用斑点免疫杂交法（Dot-ELISA）和RT-PCR法对重庆地区发生的辣椒病毒病的病原进行了鉴定和优势病毒分析。利用5种常见蔬菜病毒的血清对采自重庆8个区县的152份辣椒病毒病样品进行Dot-ELISA检测,结果表明,共有118份辣椒样品检测呈阳性,其中,黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）的侵染最普遍,总检出率高达57.89%;番茄花叶病毒（Tomato mosaic virus,ToMV）的总检出率最低,为22.52%;烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus,TuMV）和蚕豆萎蔫病毒2号（Broad bean wilt virus 2,BBWV-2）的总检出率分别为30.26%、36.18%和24.34%。在118份阳性样品中,有66.10%的样品受两种及以上病毒复合侵染,其中33.33%的样品受到CMV和TuMV复合侵染,有26.27%的样品受3种病毒复合侵染。设计5种病毒的特异性引物,随机选取16份阳性样品进行RT-PCR扩增,克隆测序结果表明扩增片段确实是5种病毒的相应序列,且RT-PCR与ELISA检测结果基本吻合。检测结果表明CMV是重庆地区辣椒上的优势病毒种类,且该地区辣椒上病毒复合侵染现象普遍。本文首次报道了ToMV和TuMV侵染辣椒。     

四川省攀西地区南瓜、甜菜和辣椒部分病毒种类的ELISA检测

利用马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）和马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）的多克隆抗体,以及烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、蚕豆萎蔫病毒2号（Broad bean wilt virus 2,BBWV-2）及芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus,TuMV）的单克隆抗体,采用抗原直接包被ELISA法对四川省攀枝花、西昌和德昌地区的南瓜、甜菜和辣椒上采集的病毒病样品进行了检测。结果表明,在87份样品中PVY的侵染最普遍,总检出率达74.71 %|CMV、TMV、TuMV、BBWV-2和PVX的总检出率分别为12.64 %、13.79 %、22.99 %、10.34 %和14.94 %。在87份样品中,仅发现TuMV、PVX及PVY的单独侵染|其余25份样品均检测到2种以上病毒的复合侵染,总检出率为34.72 %。表明攀西地区蔬菜上病毒复合侵染现象普遍,PVY是该地区蔬菜上的优势毒原。     

河南、甘肃和新疆西瓜甜瓜病毒检测

从河南、甘肃和新疆等3个地区采集表现疑似病毒病症状的西瓜和甜瓜叶片样品共132份,采用双抗体夹心酶联免疫吸附(DAS-ELISA)法和反转录PCR(RT-PCR)对其进行病毒检测,以期了解这3个地区的西瓜甜瓜病毒种类及分布,旨在为当地西瓜和甜瓜病毒病的防控提供参考。结果表明:瓜类蚜传黄化病毒(Cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)的检出率最高,为57.1%,其次为小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV),检出率分别为45.6%、38.9%,黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和甜瓜蚜传黄化病毒(Melon aphid-borne yellows virus,MABYV)的检出率较低,分别为20.0%、17.5%,而番木瓜环斑病毒西瓜株系(Papaya ring spot virus-watermelon strain,PRSV-W)和南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,Sq MV)未检出,河南和新疆发现MABYV尚属首次。本试验发现在河南通许危害西瓜甜瓜的病毒有ZYMV、WMV、CABYV、MABYV,在甘肃瓜州为ZYMV、CMV、CABYV,在新疆鄯善为ZYMV、WMV、CMV、CABYV、MABYV。其中21.2%的样品受到2种病毒的复合侵染。另外,3个地区的病毒优势种各不相同,鄯善县的优势种为CABYV,通许县的优势种是WMV,瓜州县的优势种是CMV。     

北京顺义西瓜病毒病的检测

以北京市顺义地区疑似病毒病症状的西瓜植株上典型的发病叶片和果实为试材,采用反转录PCR(RT-PCR)方法对叶片和果实的4个部位(瓜皮、瓜瓤、果蒂和瓜柄)共5个样品进行病毒检测,以期了解引起西瓜病毒的种类,为西瓜病毒病的防控提供参考。结果表明:在西瓜上共检测到了3种病毒,分别为西瓜花叶病毒2号(watermelon mosaic virus-2,WMV-2)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)和小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)。从5个样品中均检测到了WMV-2,从瓜皮、瓜瓤和果蒂上检测到了ZYMV,从瓜瓤和果蒂上检测到了CMV。从同一个果实的不同部位检测到了这3种病毒,说明果实中的病毒为复合感染,从叶片和果实中均检测到了WMV-2,说明WMV-2为北京顺义西瓜田间病毒的优势种。     

重庆地区侵染抱子芥和茎瘤芥的病毒及其株系的分子鉴定

为了明确当前重庆地区抱子芥和茎瘤芥病毒病的病原种类和株系,在重庆13个区县的18个乡镇采集疑似病毒感染的样品进行病毒RT-PCR检测和株系分析。结果表明:在57份抱子芥样品中,黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)和芸薹黄化病毒(Brassica yellows virus,BrYV)的检出率分别为31.58%、85.86%、49.12%、59.65%和77.19%,其中87.72%的样品受两种及以上病毒的复合侵染,45.61%的样品受3种病毒的复合侵染;在41份茎瘤芥样品中,CMV、TuMV、PVX和BrYV的检出率分别为36.59%、73.17%、75.61%和70.73%,其中80.49%的样品受两种及以上病毒的复合侵染,51.22%的样品受3种病毒的复合侵染。对各检出病毒分离物CP基因进行扩增、序列测定和系统发育分析,明确抱子芥和茎瘤芥中TuMV分离物归属于TuMV的World-B组;CMV分离物归属于CMV亚组Ⅰ;PVX分离物归属于PVX的X3株系;BrYV和TMV与已报道的病毒株系CP基因核苷酸序列具有很高的相似性,存在一定的地域相关性,BrYV为重庆地区首次报道。     

葫芦科作物3种主要病毒的多重RT-PCR方法的建立

小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellowmosaic virus,ZYMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是危害葫芦科作物最严重、最广泛的3种病毒。研究建立了以18SrRNA为内标检测ZYMV、CMV和WMV侵染葫芦科作物3种主要病毒的多重RT-PCR方法,并对影响多重RT-PCR扩增的退火温度、Taq聚合酶浓度、dNTPs浓度和镁离子浓度4种主要因素进行优化;对多重RT-PCR的灵敏性进行了测定,并与单重RT-PCR灵敏性进行比较。结果表明:最佳的退火温度、Taq聚合酶量、dNTPs浓度和Mg2+浓度分别为60.7℃、1.0U、0.8mmol/L和2.5mmol/L。多重RT-PCR各病毒的灵敏度与单重RT-PCR相同。     

番茄病毒病综合防控技术

正番茄病毒病是番茄生产上一种毁灭性病害,在种植区发生危害逐年加重,直接影响番茄的产量、果实品质及上市供应期长短。番茄病毒病主要有烟草花叶病毒(简称TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草卷叶病毒(TLCV)、苜蓿花叶病毒(AMV)等,可通过汁液、蚜虫等进行传染。1症状识别番茄病毒病在田间主要表现为5个主要类型:1)花叶型。叶片上出现黄绿相间或深浅相间斑驳,叶脉透明,叶片增厚、叶略有皱缩,植株     

广西辣椒病毒病调查及病原种类初步鉴定

对广西9个市县辣椒病毒病的发生情况进行初步调查,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)鉴定75份辣椒疑似病毒病样本的8种常见蔬菜病毒。结果表明,桂南、桂中地区辣椒病毒病发生普遍较桂西、桂北地区的严重。共有71份辣椒样本检测呈阳性,其中辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,Chi VMV)的侵染最普遍,总检出率最高,达63.38%,为广西辣椒的优势病原种类;甜椒叶脉斑驳病毒(Pepper vein mottle virus,PVMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMo V)、辣椒环斑病毒(Chilli ring spot virus,Chi RSV)的侵染也很普遍,总检出率分别为56.34%、43.66%、35.21%和33.80%。在71份阳性样本中,有87.32%的样本受2种及2种以上病毒的复合侵染,受2种或3种病毒复合侵染的分别占32.39%和29.58%;2种病毒复合侵染类型中,以ChiVMV+CMV、PVMV+PMMo V复合侵染最普遍,均占21.74%;3种病毒复合侵染类型中,以Chi VMV+CMV+PVMV复合侵染最普遍,占23.81%。     

新疆伽师县甜瓜病毒病种类鉴定

于2019和2021年对新疆伽师县12个乡镇进行厚皮甜瓜（通常称伽师瓜）病毒病进行调研采样，采用两步法RT-PCR鉴定西瓜花叶病毒（watermelon mosaic virus,WMV）、黄瓜花叶病毒（cucumber mosaicvirus,CMV）、小西葫芦黄化花叶病毒（zucchiniyellowmosaicvirus,ZYMV）、黄瓜绿斑驳花叶病毒（cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）、南瓜蚜传黄化病毒（cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV）和甜瓜蚜传黄化病毒（melon aphid-borne yellows virus,MABYV），并对WMV基因组进行分析。结果表明，伽师瓜病毒病发生较普遍，症状包括花叶、畸形、坏死和褪绿黄化等。采集的37份样品中，病毒的检出率为21.6%(8/37)，其中WMV的检出率最高，为18.9%(7/37),CMV和ZYMV次之，没有鉴定到CGMMV、CABYV和MABYV，复合侵染更普遍。不同WMV分离物的F2/R2(P1+HC-Pro)、F4/R4(P...     

BTH诱导西瓜甜瓜抗病毒病研究

为了考察S-甲基苯基(1,2,3)噻二唑-7-硫代羧酸酯(benzothiodiazole,BTH)诱导西瓜对小西葫芦黄花叶病毒(Zuccini yellow mosaic virus,ZYMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)与甜瓜对黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的抗病效果,分别在接种ZYMV、WMV、CMV前喷施BTH。结果表明:在接种ZYMV、WMV、CMV前3d用25μg/mLBTH处理西、甜瓜,4周后植株的病情指数减少,相对防效分别为55.6%、56.8%、78.2%;进一步研究发现,经BTH处理后,诱导时间的长短对病情指数有一定的影响;BTH对病毒病的防治效果优于病毒A、病毒K、宁南霉素、芸薹素内酯。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒核酸试纸条检测技术的建立

以黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)阳性样品为研究对象,根据其外壳蛋白基因设计3条引物和2条探针,探针5′端分别用生物素和荧光进行标记;利用这套引物和探针在59℃进行RT-PCR恒温扩增90min,扩增产物用核酸试纸条进行检测。用其它5种同样侵染葫芦科作物的植物病毒作为对照进行试验,以期确定试纸条检测方法的特异性。将梯度稀释后的总RNA作为模板进行检测,以确定该方法的灵敏度。结果表明:该试验建立的核酸试纸条检测方法对CGMMV具有特异性,能够有效区分CGMMV及同样侵染葫芦科作物的黄瓜花叶病毒(CMV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄花叶病毒(ToMV)和小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV);同时该方法也具有较高的灵敏度,可检测低至24.300ng·μL~(-1)的总RNA。因此该试验建立的核酸试纸条法可用于CGMMV的快速检测。     

新的外检对象—南芥菜花叶病毒（ArMV）

在新公布的《中华人民共和国进境植物检疫危险性病、虫、杂草名录》中,南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,异名:Raspberry yellow dwarf;Rhubarb mosaic virus)被列为二类检疫危险性病毒,现将其介绍如下: 一、病毒性状该病毒属线虫传球体病毒组,病毒粒体为等径多面     

江苏莲藕主产区黄瓜花叶病毒病发生分布调查

由黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)等引起的病毒病害是限制莲藕产量和品质的重要因素之一。采用酶联免疫吸附法(ELISA),调查了江苏省莲藕主产区CMV的发生分布状况。调查结果表明,43份莲藕样品中共检测到28份阳性样品,侵染率达65.12%,其中扬州宝应、邗江及苏州吴中地区的检出率依次为75%、58.6%和100%;表现黄化、花叶及皱缩花叶症状的莲藕叶片中CMV的检出率达100%,黄斑、皱缩、斑驳以及无症莲藕叶片中也均有检出,表明CMV在江苏莲藕上发生普遍,且可能产生多种症状类型。     

怎样防治番茄病毒病更有效

1杜绝病毒来源和再次侵染这是防病最关键的因素。我国番茄病毒主要是烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)。TMV存活在病株残体、种子、土壤和粪肥中,通过打杈、绑蔓等农事操作,以及植株叶片的互相摩擦,造成反复侵染,从而加重和扩大病害;CMV广泛存在于多种蔬菜和杂草上,这种病毒主要靠蚜虫刺吸口针多次探吸和取食汁液而传播,该病毒与TMV复合侵染时,病情就特别严重。减少病毒初侵染源和再次侵染要从以下方面做起。①清洁田园番茄采收完后及时清除病残体,在远离田块、水源处烧毁或挖坑深埋,减少下茬及来年毒源;育苗前苗床彻底清除枯枝…     

广西辣椒病毒的sRNA深度测序和RT-PCR鉴定

采用小RNA(sRNA)深度测序技术，结合RT-PCR技术对广西9个辣椒主产区具有典型病毒病症状的病样进行检测，共发现10种病毒，其中小米椒内源RNA病毒1(Capsicum frutescens endornavirus 1,CFEV 1)、辣椒潜隐病毒2(pepper cryptic virus 2,PCV 2)、烟草轻型绿花叶病毒（tobacco mild green mosaic virus,TMGMV）和辣椒黄脉病毒（pepper vein yellows virus,PeVYV）是在广西辣椒上首次发现，且CFEV 1在中国是首次发现。10种病毒在75份辣椒病样中的总检出率为8.00%～66.67%，前5位依次为辣椒脉斑驳病毒（chilli veinal mottle virus,ChiVMV,66.67%）、甜椒脉斑驳病毒（pepper veinal mottle virus,PVMV,62.67%）、黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV,41.33%）、CFEV 1(32.0%)以及PCV 2(26.67%)。ChiVMV、PVMV、CMV和C...     

利用siRNA高通量测序和RT-PCR技术鉴定引起茄子斑驳紫花病的病毒种类

为了明确引起茄子斑驳紫花病的病毒种类,利用小干扰RNA(si RNA)高通量测序技术,结合生物信息学方法寻找茄子样本中的病毒序列,发现存在烟草轻型绿花叶病毒(Tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)和番茄斑驳花叶病毒(Tomato mottle mosaic virus,ToMMV)。为了验证该结果,对待测样品中TMGMV和ToMMV的外壳蛋白(coatprotein,CP)全长基因进行RT-PCR扩增和系统进化分析,分别得到500bp的TMGMV-CP和482bp的ToMMV-CP特异性条带,与GenBank中TMGMV和ToMMV序列相似性分别达到98%～100%和100%,说明待测样品中确实存在TMGMV和ToMMV。对采自山东、河南、辽宁、河北等地的23份疑似斑驳紫花病茄子样品,分别采用特异性引物524-F/R和ToMMV-F/R进行检测。结果显示,所有样品中均含有TMGMV,20份样品中含有ToMMV,复合侵染检出率为86.96%。对茄子、番茄和辣椒幼苗的致病性检测显示,接种后茄子花表现出与田间相同的症状,茄子、番茄和辣椒的叶片表现典型的病毒侵染症状,在接种发病组织中检测到病毒ToMMV和TMGMV。结果表明,茄子斑驳紫花病样中鉴定出TMGMV和ToMMV两种病毒。