碱解法快速提取菠菜基因组DNA方法的优化

为了优化碱解法提取菠菜基因组DNA的方法,并为大批量育种材料的分子标记筛选奠定基础,本试验以菠菜幼嫩叶片为试材,以PCR扩增效果为主要依据,研究NaOH浓度、水浴温度与方法、吐温20浓度对菠菜DNA提取质量的影响。结果表明:以0.4 mol/L NaOH为提取液研磨后沸水浴1 min提取的菠菜DNA的PCR扩增效果明显好于常温处理。样品不经研磨、可直接用PCR扩增仪99℃、4 min代替沸水浴加温并省去离心步骤,此时以0.4 mol/L NaOH+0.5%吐温20为提取液时PCR扩增效果最佳。提取DNA的A260/A230比值较高时PCR扩增效果较好,因此A260/A230比值是评价提取DNA质量的最优指标。本试验优化了碱解法简便快速提取菠菜DNA的技术规程,达到了理想的PCR扩增效果。     

广东猕猴桃基因组DNA提取方法比较

为了从富含多糖和多酚等次生代谢物质的猕猴桃叶片中分离出高质量的基因组DNA，以8个不同种（品种）猕猴桃幼叶为试验材料，采用改良SDS冰浴法、改良CTAB冰浴法及陈大明SDS液氮法对-20℃保存的猕猴桃叶样中DNA的提取效果进行了比较研究。结果表明，改良SDS冰浴法提取的DNA提取率最高，琼脂糖凝胶电泳谱带明亮清晰；改良CTAB冰浴法提取的DNA纯度较高；陈大明SDS液氮法提取的DNA纯度和提取率都较差。     

甘蔗基因组DNA提取方法的研究

试验是以甘蔗的嫩叶为材料,通过对前人的CTAB提取方法进行改良,以探索更好的甘蔗基因组DNA提取方法。通过改良最后得到的CTAB提取方法Ⅲ具有成本低、操作简单、省时等特点,并且得到的DNA经核酸蛋白质分析仪、琼脂糖凝胶电泳及RAPD检测分析表明方法Ⅲ提取得到的DNA完整性好,纯度高,可以直接用于各种分子标记。     

一种适于PCR扩增的蓖麻基因组DNA提取方法

报道了一种从蓖麻叶片中提取DNA的改良SDS方法,该方法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测,获得的DNA条带较亮且无明显拖尾现象。利用ISSR引物对提取的蓖麻基因组DNA进行PCR检测,能够获得清晰稳定的条带。说明该方法提取的蓖麻基因组DNA能够满足PCR反应的需要。     

梨基因组DNA提取方法比较研究

通过添加Vc对传统的CTAB法进行改进,结果表明:在磨样时,1 g鲜样中添加0.10 g的Vc提取的DNA质量最高;最佳提取材料是嫩芽,其次是新梢和成熟叶片。     

一种棉花DNA快速提取方法

本研究以棉花子叶为材料,探索一种适用棉花批量SSR-PCR分析的DNA快速提取方法。本方法只需要两次加液,两次高温水煮即可完成。紫外检测结果表明,所得DNA浓度较好,纯度较差,含有较多蛋白质。但SSR分析结果显示,可以扩增出相应的带型,且清晰易辨,准确可靠。相比常规CTAB法,具有操作简便,成本低,效率高,且无毒,无污染的优点,适用于大量棉花样品的SSR-PCR分析。     

油菜品种DNA提取方法优化

根据种子纯度检验的行业特点,改进了油菜幼苗的研磨方法,发现在液氮预冷的离心管中使用玻璃棒掏碎的方法更适合油菜品种的样品粉碎。该方法既显著提高了油菜幼苗的研磨效率,又保证了DNA提取的量,能有效地避免传统研磨方法提取DNA为空管的现象,同时具有安全、无污染的特点,从而提高了检测的准确性和工作效率。     

果树基因组DNA的提取和PCR扩增测序方法

为避免多年生果树组织中的多糖和酚类物质影响基因组DNA的提取质量,在CTAB提取缓冲液中加入2%PVP-40和2% β-巯基乙醇,以改进的CTAB提取方法从苹果嫩叶中提取基因组DNA.所得DNA样品D260nm/D280nm比值为1.98～2.05,纯度高.当用DNA样品和设计的特异引物进行PCR扩增时,其PCR产物只出现一条清晰电泳谱带,质量满足测序要求,采用DNA纯化试剂盒纯化后可直接用于测序.该方法已成功用于"国光"和"金冠"苹果的基因组DNA测序,是一个操作简便、快捷和高效的方法,非常适用于果树基因组DNA的提取和测序.     

适于SSR分析的茶树高质量基因组DNA提取方法

对野生型、过渡型和栽培种茶树分子遗传多样性研究中遇到的DNA提取问题进行了试验,针对茶树组织内富含多酚、多糖、色素及次生代谢物质的特点,以茶树嫩叶为试材,采用改良CTAB法获得了高质量的茶树基因组DNA。运用本方法提取的茶树总DNA作为模板用多条EST-SSR引物和自身开发的基因组SSR引物进行PCR扩增并用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测条带,结果表明,改良后的方法适用于不同类型的茶树叶片DNA提取,所得DNA带型完整,质量较高,扩增SSR产物条带清晰,证实所提DNA适用于后续的SSR分析。     

高质量枣树基因组DNA提取方法的研究

主要针对枣树组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题，本研究比较了常规CTAB法、TE3D法和改良CTAB法3种方法的处理效果。结果表明：常规CTAB法提取DNA难以去除植物组织中的多糖类杂质；TE3D法提取DNA多糖杂质少，但产率低、易降解、褐化严重；而改良CTAB法提取DNA量大(1000ng／μl左右)，产率高，可达120μg DNA／g新鲜组织，无明显降解，杂质少，A260/A280比值1．80左右，通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析，完全满足实验要求。并进一步对改良CTAB法的关键步骤作出具体分析讨论。     

藏茴香总DNA提取方法探究

本试验取藏茴香叶片制成干样、鲜样,采用SDS法、CTAB法、改良SDS法、改良CTAB法、试剂盒法五种提取方法对其总DNA进行提取,比较DNA样品的纯度、得率、完整度等指标,以期获得优质高效的藏茴香总DNA的提取方法。试验结果如下:材料选用藏茴香叶片干样所提取的总DNA效果好。用试剂盒法和改良CTAB法提取的藏茴香总DNA样品质量优良、完整性好、纯度高,明显优于其他方法;使用改良CTAB法和试剂盒法所提取的藏茴香DNA进行PCR检测,获得了明亮清晰的扩增图谱;从成本方面考察,试剂盒法远高于其他方法。因此,改良CTAB法提取藏茴香干样总DNA效果最佳。     

三种水稻基因组DNA快速提取方法的比较

用分子标记辅助选择进行精细定位和遗传改良时,首先就需要大批量提取植物DNA,作为PCR反应的模板。水稻基因组DNA常用的简易提取方法有碱处理法和高温水煮法等,本文改进了常规的CTAB方法,提出另一种简便的高质量DNA提取方法,称“简化法”,并比较了这三种方法提取的DNA在数量、质量上的差异,以及作为PCR模板时扩增效果,确定了在精细定位和遗传改良时“简化法”是一种较优的方法。     

适合RAPD分析的三种玉米基因组DNA提取方法比较

本文通过对3种玉米基因组DNA提取方法的比较得出，DNA提取时采用一次氯仿／异戊醇抽提方法，得到的DNA质和量都较为理想，并且能够达到RAPD实验的要求。     

以PCR为目的的大豆叶片DNA提取方法的比较研究

模板DNA的质量直接影响PCR扩增的结果,而不同提取方法及其缓冲液的成份与浓度对提取DNA的质量有重要影响。本文以5个栽培大豆品种的叶片为材料,比较分析了SDS与CTAB两种提取方法以及不同浓度CTAB提取缓冲液对所提取的DNA质量的影响,并通过PCR进行检验。实验结果表明：用1％(W/V)、2％(W/V)浓度的CTAB提取缓冲液和1．25％(WV)SDS提取缓冲液所提取的大豆叶片DNA的质量较好,均能满足PCR扩增模板的需求,其中以1．25％(W／V)SDS提取得到的大豆叶片DNA质量最好,以其为模板扩增的效果最佳,而4％浓度的CTAB不适宜提取大豆叶片DNA。     

芝麻DNA和RNA同步提取方法

高质量的DNA和RNA是分子生物学实验顺利进行的基础。本文首次针对CTAB法提取芝麻DNA和RNA的效果进行了研究,在此基础上改进了提取程序和相关技术参数,总结出一套可同步提取高质量芝麻DNA与RNA的方法。利用该方法提取的DNA及RNA经RAPD、SSR、SRAP、DDRT—PCR、AFLP、cDNA—AFLP等分子试验验证,质量好,符合后续试验的要求。这套方法为顺利开展芝麻分子生物学研究奠定了基础。     

单粒棉花种子DNA快速提取方法

本研究以棉花干种子为材料,探索一种适用棉花品种SSR分析的DNA快速提取方法。先采用SDS提取液进行一步裂解,并将RNA的去除操作融入抽提过程,从而简单快速的获得高质量棉种基因组DNA。紫外检测与琼脂糖凝胶电泳检测结果均表明,所得DNA纯度高,完整性好。另外,SSR分析结果也显示,扩增带型清晰易辨,重复性与稳定性好。相比常规的以棉花幼苗叶片为材料的DNA提取法,本方法在降低实验成本的同时大大提高了工作效率。     

三种从马血中提取基因组DNA方法的比较研究

选择一种快速、简便、经济的从马血液中提取基因组DNA的方法。分别采用了常规酚—氯仿抽提法、简易酚—氯仿快速抽提法和V—gene Biotechnology Limited试剂盒三种方法从马血中提取DNA,并利用琼脂糖凝胶电泳技术和紫外分光光度计,比较各方法提出DNA的浓度和纯度,且利用PCR扩增技术检测DNA的实用性。结果表明,常规酚—氯仿抽提法适合从马血中大量提取DNA。     

鹿茸基因组DNA提取方法的比较研究

本研究旨在建立一种稳定、高效的鹿茸药材DNA提取方法,以满足后续的鹿茸DNA条形码鉴定方法需求。采用2种试剂盒、改良的CTAB法以及SDS法对市场上5个厂家共8批次的鹿茸药材进行基因组DNA的提取,参考2015版《中华人民共和国药典》四部通则9107考察了样品量、水浴温度、水浴时间3个因素。实验结果表明4种方法均可以从鹿茸药材中提取出基因组DNA,其中天根试剂盒提取效果最佳,改良的CTAB法提取效果较差;通过方法学考察得出使用天根试剂盒,提取条件为样品量70 mg、水浴温度56℃,水浴时间6 h时提取效果最佳。本研究优化得到的天根试剂盒提取鹿茸DNA方法操作简便,提取DNA浓度、质量优良,能够用于后续的DNA条形码鉴定中。     

适合AFLP分析用的节瓜基因组DNA提取方法的研究

本研究以CTAB法为基础,采用以下5种处理提取节瓜叶片基因组DNA:A、PVPP(3%)+抗坏血酸(100 mmol/L);B、β-巯基乙醇(3%)+抗坏血酸(100 mmol/L):C、PVPP(3%)+半胱氨酸(5%);D、PVPP(3%)+β-巯基乙醇(3%);E、抗坏血酸(100 mmol/L)+半胱氨酸(5%).实验结果表明:在5种处理中,C处理提取的DNA质量最高,其溶液呈无色透明状,经核酸蛋白仪测定其OD260/OD280为1.8～2.0;经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,节瓜叶片基因组DNA带型清晰、完整、无降解,蛋白、多糖、酚类及RNA等去除比较彻底;经AFLP分析,酶切彻底,PCR扩增后的带型清晰稳定,重复性好,说明C处理提取的节瓜基因组DNA完全满足AFLP分析的要求.     

河北核桃叶片DNA提取方法的比较

以13个河北核桃优系(罗汉头、南安庄、艺核1号、C12、J16、M3、H12、C15、M10、MB、C13、M9、A7)的叶片为材料,比较了高盐低pH法(2%PVP40,3%PVP40)、SDS法(0.5%,1%,1.5%)和CTAB法(2%,3%)提取基因组DNA的效果,旨在筛选出适合河北核桃DNA提取的最佳方法,为进一步开展河北核桃的分子群体遗传研究奠定基础。通过紫外分光光度计法和琼脂糖凝胶电泳等方法对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的纯度和质量。结果表明,几种提取方法均能提取到核桃叶片的基因组DNA,其中含3%PVP40的高盐低pH法所提取的DNA浓度适中,蛋白质、RNA、多糖等去除彻底,无降解且OD260/OD280值为1.86,确定3%PVP40的高盐低pH法为河北核桃叶片DNA提取的最适方法。