硒对氟中毒鸡睾丸组织caspase-3 mRNA表达的影响

为探讨硒对氟中毒鸡睾丸组织caspase-3 mRNA表达的影响,将8日龄海兰褐雏鸡180只随机分为3组:Ⅰ组为正常对照组,饲喂全价日粮;Ⅱ组为高氟组,全价日粮中添加氟化钠(NaF),使每千克日粮中氟含量为1 000 mg;Ⅲ组为硒颉颃组,在高氟日粮中添加亚硒酸钠(Na2SeO3),使每千克日粮中硒含量为4 mg。试验期共90 d,分别于试验期第30、60、90天,空腹心脏采血后,剖杀试验鸡,取睾丸组织并检测caspase-3 mRNA表达水平。结果表明:在试验的各个阶段,Ⅲ组中caspase-3 mRNA转录水平均高于同期Ⅱ组。提示硒可以在一定程度上影响氟中毒鸡睾丸组织caspase-3 mRNA的表达水平。     

硒对氟中毒鸡肝肾GSH-Px活性及其mRNA表达的影响

为探讨硒对氟中毒鸡肝肾组织GSH-Px活性及其mRNA表达的影响,选取180只7日龄海兰褐蛋鸡,随机分为3组,每组60只.Ⅰ组:正常对照组,饲喂全价日粮;Ⅱ组:氟中毒组,在正常日粮中添加氟化钠(NaF),使日粮中氟含量为1 000mg/kg日粮;Ⅲ组:加硒组,在氟中毒组日粮基础上添加亚硒酸钠(Na<,2>SeO<,3>),使日粮中硒含量为4mg/kg日粮.试验期为90d,每隔30d采样,进行肝脏和肾脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的检测以及GSH-Px mRNA转录水平的测定.结果表明加硒组肝脏和肾脏GSH-Px活性和GSH-Px mRNA转录水平在各时间点均高于氟中毒组(P<0.05).说明日粮中加硒可在一定程度上颉颃氟所致鸡肝肾组织脂质过氧化作用.     

饲粮硒对种公鸡睾丸中硒含量和硒蛋白酶基因mRNA表达的影响

本试验旨在研究饲粮硒对海兰褐种公鸡睾丸中硒含量和硒蛋白酶基因mRNA表达的影响.选取224只48周龄海兰褐种公鸡,随机分为7个处理,每个处理4个重复,每个重复8只.将亚硒酸钠(SS)和酵母硒(SY)2种硒源分别以3个硒水平(0.2、0.5和0.8 mg/kg)添加到海兰褐种公鸡基础饲粮中,对照组饲喂基础饲粮,进行为期3...     

不同水平的亚硒酸钠对鸡心肌组织硒沉积及组织结构的影响

通过在公鸡日粮中添加不同水平的亚硒酸钠,研究硒在公鸡心肌组织中的沉积量和对其组织结构功能的影响,以期为亚硒酸钠在禽类生产中的应用提供参考依据。试验选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只,分别在日粮中添加0、0.3、0.6和1.0 mg/kg的亚硒酸钠。试验结束时,采集心组织样本,测定硒含量,并通过HE染色观察组织细胞结构。结果表明,公鸡心肌组织中硒含量随日粮硒含量的增加而升高。由此得出,公鸡心肌组织的硒含量随着日粮硒水平的增加而逐渐升高,高硒日粮对心肌组织的结构有一定影响,但由于硒在心肌组织中的沉积能力与其他组织相比较差,因此影响并不明显。     

硒对公鸡睾丸组织细胞结构的影响

18 0只海蓝白公鸡雏 (1日龄 )随机分为 6组 ,对照组饲喂缺硒基础日粮 (硒本底值为 0 .0 2 6～ 0 .0 31m g/ kg) ,试验 ～ 组分别补硒 1、5、10、15、2 0 mg/ kg(硒与饲料质量之比 ) ,2 2周龄时屠宰 ,取材睾丸组织 ,制作光镜与电镜切片 ,观察睾丸组织结构。结果表明 ,对照组鸡睾丸发育不良 ;试验 组 (补硒 1mg/ kg)睾丸发育良好 ; ～ 组 ,随补硒量的增加中毒症状逐渐明显 ,主要表现为曲精细管上皮细胞脱落、管壁溶解 ,细胞核不规则 ,核膜部分溶解、破裂 ,核质外流 ,粗面内质网扩张 ,核糖体脱落等。通过观察与分析 ,建议公鸡日粮中含硒量以不超过 1m g/ kg为宜     

硒对公鸡睾丸前期发育的影响

300只海蓝褐公鸡雏分为6组，对照组(CK)伺喂基础日粮，基础日粮含硒量为0．028—0．033mg／kg，I—V组分别补硒1、5、10、15、20mg／kg，在12周龄屠宰，观察发育前期睾丸组织结构。结果表明，CK组缺硒睾丸发育不良，I组发育最好，Ⅱ到V组随硒浓度的增加中毒症状明显，曲精细管肿胀、精细管溶解、生精上皮脱落；经显微结构观察，初步认定公鸡日粮中含硒量以不超过1mg／kg为宜。     

硒对公鸡睾丸发育中毒形态学分析

150只海兰白公鸡雏分为5组,分别饲喂不同硒含量的日粮,I-V组日粮硒含量为1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20/mg/kg,在21周龄屠宰,观察睾丸组织结构。结果表明,I组发育最好,生精上皮细胞层数多、管壁厚,管径大,精子簇密集;II组到V组随硒浓度的增加中毒症状明显,生精细胞散乱,生精上皮脱落,精细管溶解。实验结果表明,公鸡日粮中含硒量以不超过1mg/kg为宜。     

不同水平亚硒酸钠对公鸡睾丸组织中Cdc25A基因表达的影响

通过在公鸡日粮中添加不同水平亚硒酸钠,研究硒对公鸡睾丸组织中细胞周期基因Cdc25A表达的影响,进而为硒调控精子发生周期和生精细胞凋亡的机理提供参考依据。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只,分别在日粮中添加0、0.5、1.0和2.0 mg/kg的亚硒酸钠,试验结束时,采集睾丸备用。采用qRT-PCR 检测硒对公鸡睾丸组织中 Cdc25A 基因的表达差异。结果表明,0.5 mg/kg组Cdc25A表达量显著高于其他处理组,且各组之间差异显著（P<0.05）。由此可见,日粮中硒的最适添加量为0.5 mg/kg,此时,Cdc25A mRNA表达量最高,高硒（超过0.5 mg/kg）则会抑制该基因的表达。     

硒代蛋氨酸对种公鸡睾丸基因差异表达的影响及功能预测分析

本试验以配种后期种公鸡为动物模型,比较对照组和有机硒组睾丸组织基因的差异表达,结合GO和KEGG功能富集性分析,旨在探讨硒对种公鸡繁殖能力的影响,为后续提高种公鸡繁殖性能的营养调控提供理论支撑.试验选取120只378日龄健康、体况一致的罗曼褐蛋用种公鸡,随机分为2个组,每组6个重复,每个重复10只鸡.对照组饲喂基础饲粮...     

不同水平的亚硒酸钠对公鸡组织硒沉积及血液抗氧化能力的影响

试验通过在公鸡日粮中添加不同水平亚硒酸钠,研究硒在公鸡组织中的沉积和对血液抗氧化能力的影响,为亚硒酸钠在鸡养殖业中的应用提供参考依据。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只,分别在日粮中添加0、0.5、1、2 mg/kg的亚硒酸钠。试验结束时,采集肝脏、肾脏、心、肺、脾、睾丸以及血液,测定硒含量,并分析血液中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)等。结果表明：组织和血液中硒含量随日粮硒含量的增加而升高,除心肌组织以外,各组之间差异显著（P<0.05）;血液中的SOD、T-AOC活性随着日粮硒含量的增加而逐渐增加,且各组之间差异显著（P<0.05）;适量的硒元素可以提高GSH-Px的活性,但过量的硒元素又会增加脂质过氧化反应,造成MDA含量升高,从而对组织细胞造成不良影响。结果提示：适量的硒可以提高鸡组织和血液中的硒含量,也可以提高血液的抗氧化能力,且提倡适宜的浓度为0.5 mg/kg。     

Detection of centrosome amplification as a surrogate marker of dysfunction in the p53 pathway –p53 gene mutation or MDM2 overexpression

In human and canine cancers, the inactivation of p53 protein as well as p53 gene mutation and MDM2 overexpression result in centrosome amplification that in turn contributes to chromosomal instability. To explore the usefulness of the detection of centrosome amplification as a surrogate marker of dysfunction in the p53 pathway, we systematically analysed centrosome amplification, p53 overexpression, p53 gene mutation and MDM2 overexpression in canine tumours. Centrosome amplification was detected in 16 of 51 (31%) naturally developing tumours in dogs. All the tumour specimens with aberrations in the p53 pathway, including p53 overexpression, p53 gene mutation or MDM2 overexpression, showed centrosome amplification, suggesting that the detection of centrosome amplification could serve as a preliminary surrogate marker of dysfunction in the p53 pathway.     

旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定

根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物，用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53cDNA，将其克隆到pMD-18T载体，转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析，结果表明，克隆到1176bp的p53cDNA，共编码391个氨基酸。序列分析表明，p53cDNA序列与GenBank中的旋毛虫p53基因序列相比共有12个核苷酸发生改变，二者的同源性为98％，所编码蛋白质氨基酸序列的同源性为98％。将其克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star（DE3），经IPTG诱导表达后获得约48000的重组蛋白。Western blotting检测证实，p53重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别，具有很好的抗原性。     

慢性氟中毒奶山羊的甲状腺、肾和脑组织的超微结构

以奶山羊为实验动物，按体重灌服氟化钠溶液复制奶山羊慢性氟中毒模型，通过对甲状腺、大脑、肾脏超微结构的观察，证实了氟对机体软组织的损害，并为氟致软组织损害提供了病理组织学依据。从中可看出线粒体损害是氟引起的细胞损害过程中的一个共同现象。此外，能够合成蛋白质而且具有解毒作用的内质网也受到损害，进一步说明氟在体内的毒性作用是以膜系统损害为特征。     

Radiosensitivity of canine osteosarcoma cells transfected with wild‐type p53 in vitro*

The p53 gene is one of the important tumour suppressor genes that are involved with the cell survival signal pathway. One of the major functions of the p53 protein is to organize cell cycle regulation and induction of apoptosis for cellular genetic stability. It has been documented that more than 50% of all human cancers include a p53 mutation. We evaluated the difference in radiosensitivity between upregulating the expression of canine wild‐type p53 (cp53) in cultured osteosarcoma (D17) cells and naive D17 cells in vitro. We found that upregulating transfected cp53 D17 cells increased their radiation sensitivity in vitro, and there was a significant decrease (P < 0.009) in survival between cp53‐transfected D17 cells and naive D17 cells. In this experiment, a p53 enhancement ratio (p53ER) reached approximately 3.0 at high doses. The transfected cp53 D17 cells were significantly more radiosensitive at all doses evaluated than naive D17 cells, except at 1 Gy where too few data points were available. The p53ER increased rapidly at doses less than 4 Gy, achieving a maximum of about 3.0 for doses of 4 Gy and above. This study shows the enhanced radiosensitivity of the transfected p53 at clinically relevant doses.     

传染性法氏囊病病毒对鸡法氏囊组织中干扰素和p53转录的影响

为了分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染对鸡体抗病毒天然免疫能力的影响,本研究应用IBDV弱毒(B87)和强毒(QL/12)分别感染4周龄SPF鸡,每隔12h(12~84h)取3只鸡的法氏囊组织作为1个pool,用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其感染前后干扰素(IFN)和p53的mRNA水平,同时分析法氏囊组织的病理变化和病毒载量。结果显示:在QL/12组,IFN-α和IFN-βmRNA水平随着时间的增加逐渐升高,48h达到峰值,随后降低;IFN-γmRNA水平随着时间的增加逐渐升高,60h达到峰值,随后逐渐降低;p53mRNA含量迅速升高,60h达到峰值,随后降低。在B87组,IFN-αmRNA水平先降低后升高(48h达到最低值),而IFN-βmRNA水平变化不规则,72h含量最高;IFN-γmRNA水平先逐渐升高后降低(72h达到峰值);p53mRNA含量变化较小,36h含量最高。QL/12组诱导法氏囊组织产生的IFN mRNA(IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA)以及p53mRNA水平均显著高于B87组。病理组织学检查,QL/12组法氏囊淋巴滤泡呈不同程度的损伤,而B87组法氏囊组织未见明显的组织病变。qRT-PCR检测,QL/12组法氏囊组织中病毒含量48h达到峰值(8.4×106拷贝/mg),而B87组法氏囊组织中病毒含量72h达到峰值(6.6×104拷贝/mg)。本研究结果表明IBDV感染严重干扰了鸡体IFN和p53介导的抗病毒天然免疫反应。     

鹅Perilipin基因部分片段的克隆、不同品种及填饲对组织mRNA表达水平的影响

本研究旨在克隆鹅围脂滴蛋白(Perilipin)基因,并探讨填饲对其在四川白鹅和朗德鹅肝脏中表达的影响,为从脂滴角度研究鹅肥肝分子机理提供依据。试验选取12只朗德鹅和12只四川白鹅为研究对象,通过RT-PCR方法扩增鹅Perilipin基因部分序列,采用实时定量技术研究了该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况,最后检测填饲后两品种鹅肝脏总脂质含量、甘油三酯(TG)水平、肝质量以及Perilipin基因表达变化。结果表明:获得的鹅Perilipin基因序列与原鸡的同源性最高,与哺乳动物的同源性也达到70%以上;从组织表达上看,该基因主要表达于腹脂和皮脂,而在其他组织几乎不表达;填饲引起鹅肝脏Perilipin mRNA表达丰度的极显著增加(P0.01),且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关;此外,填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅(P0.05)。结果提示:填饲会引起Perilipin mRNA在鹅肝脏中表达丰度的极显著增加(P0.01),且其增加幅度存在着品种间差异(P0.05)。     

鹅ACSL1基因克隆及其在鹅肥肝形成中作用的初步研究

本研究旨在克隆鹅长链酯酰辅酶A合成酶1(ACSL1)基因,并研究其在填饲诱导鹅肥肝形成中的作用,为揭示ACSL1在鹅肥肝形成过程中的作用提供依据。以前期抑制消减杂交文库筛选的部分ESTs序列为基础,通过RT-PCR扩增鹅ACSL1基因CDS、并用实时定量等技术检测该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况及填饲对其在肝脏中表达的影响,同时与填饲后鹅肝脏总脂质、甘油三酯(TG)、肝质量等指标进行相关分析。结果发现:鹅ACSL1基因CDS全长2100bp,编码699个氨基酸。保守结构区预测发现,其蛋白质跟其他物种一样,也存在2个保守功能区(ATP/AMPmotif和FACSmotif)和1个跨膜结构域,它与鸡、牛、人、小鼠ACSL1基因的同源性分别为93%、80.4%、78.5%、77.3%;该基因主要表达于腹脂、皮脂、肝脏,而在其他组织表达相对较低;填饲能引起ACSL1mRNA在鹅肝脏的表达丰度极显著增加(P0.01),且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关;同时,填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅(P0.05)。结果提示:填饲引起ACSL1mR-NA在鹅肝脏中极显著增加(P0.01),且其增加幅度存在着品种间差异(P0.05)。     

Immunohistochemical evaluation of p53 expression with different antibodies in malignant canine tumours with or without p53 gene mutation

Six monoclonal antibodies and a polyclonal antibody (CM1) were used to investigate the overexpression of p53 protein by immunohistochemistry (IHC) in six sarcomas and 21 mammary carcinomas from 27 dogs. IHC was compared with p53 gene mutation analysis performed on the same samples. Only the monoclonal PAb240, PAb421 and the CM1 antibodies were able to detect expression of canine p53 protein. CM1 was found to give the highest concordance (8/11) between positive expression of the p53 protein by IHC and the presence of a gene mutation. In the samples that were negative for p53 expression by IHC, but contained a p53 gene mutation according to DNA analysis, the mutation often affected the epitopes that could have been recognized by these antibodies. Only one out of 16 tumours without a p53 gene mutation had a weakly positive IHC result. These findings indicate that in these two types of canine tumours, IHC – particularly with CM1 – can detect many alterations in p53 expression owing to a gene mutation. False‐positive results were very infrequent.     

miRNA-148a-3p的生物信息学分析及其在小鼠不同组织中的表达水平检测

旨在研究小鼠不同组织中miR-148a-3p的表达情况,并对其进行生物信息学分析,构建miR-148a-3p基因相关网络,进一步阐明其在机体中的作用.本研究以6周龄雄性C57BL/6 J小鼠胃、肺、脾、皮肤、肝、心和肾7个组织为研究材料,每组3个重复,进行3次平行试验.利用qRT-PCR技术比较小鼠不同组织中miR-1...