抗菌多肽 APPLM3 乳剂的制备及其对稻瘟病的防效

本试验以来源于多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）LM-3菌株的极端嗜热多肽APPLM3为主效成分配得5种微生物源生防乳剂，并用它们对水稻苗瘟进行了田间防效试验。试验结果表明，这5种乳剂的防效都优于LM-3拮抗液直接喷雾，其中处理AB4的防效最佳，达80．73％，其拮抗成分、吐温80、乳化剂OP、溶剂的质量比为50．00：6．50：1．75：41．75。本文报道了常温细菌产生的极端嗜热多肽对稻瘟病菌表现出强的拮抗作用。     

戊唑醇与嘧菌酯复配对稻瘟病和水稻纹枯病的联合毒力及田间防效

为了筛选防治稻瘟病和水稻纹枯病的高效药剂,采用菌丝生长抑制法测定戊唑醇、嘧菌酯单剂及其5种配比对稻瘟病菌和水稻纹枯病菌的毒力,通过田间药效试验评价增效剂的田间防效。室内毒力测定结果表明：戊唑醇与嘧菌酯质量比2:1时,对水稻稻瘟病菌和水稻纹枯病菌的生长抑制具有增效作用,增效系数(SR)分别为1.5777、1.5941。田间试验结果表明：戊唑醇与嘧菌酯复配质量比2:1使用剂量90~135 g a.i./hm²时,对稻瘟病防效达76.68%~91.12%,对水稻纹枯病防效达81.28%~90.32%,与单剂和对照药剂相比防治效果相当或更好,并且用药量更低。本研究结果表明,戊唑醇与嘧菌酯质量比2:1复配用于防治水稻稻瘟病和水稻纹枯病,可以达到农药减量增效的目的。     

新型植物源生物农药植丰宁(5%香芹酚水剂)对玉米害螨防效试验初报

试验选用5%香芹酚水剂250倍液、500倍液、750倍液、1 000倍液4个不同浓度,以5.6%阿维·哒螨灵微乳剂1 500倍液为对照,开展玉米害螨防效试验。结果表明,5%香芹酚水剂1 000倍液对玉米害螨防治效果最好,药后5 d防效达58.41%,药后10 d达44.51%,略高于5.6%阿维·哒螨灵微乳剂1 500倍液,且无药害、安全性好,对玉米有一定的生长调节作用。     

农药使用与植保技术问与答

<正>问:戊唑·噻霉酮对稻曲病有防效吗?水稻破口期使用嘧菌·噻霉酮对稻曲病、稻瘟病、纹姑病防效如何?还要加用其他杀菌剂吗?答:27%戊唑·噻霉酮水乳剂,含戊唑醇25%、噻霉酮2%,登记用于防治苹果树斑点落叶病和小麦赤霉病。该药没有在水稻稻曲病上登记,但在水稻破口前5～7天合理使用,对稻曲病有较好的预防效果,同时能兼防细菌性条斑病等细菌性病害和纹枯病。     

棉花根部拮抗枯萎病菌或黄萎病菌的可培养内生细菌多样性分析

为解析棉花内生细菌的种群结构,更好地开发利用生防内生细菌,以棉花枯萎病菌、黄萎病菌为指示病原真菌,对常抗棉和泗棉3号根部分离获得的内生细菌进行拮抗活性筛选,获得87株至少对其中1个指示病原真菌具有拮抗作用的内生细菌。ARDRA分析(Amplified ribosomal DNA restriction analysis)和16S r DNA序列测定表明棉花根部可培养内生拮抗细菌可分为13个ARDRA类群,分属于芽孢杆菌属(Bacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)、农杆菌属(Agrobacterium)、中华根瘤菌属(Sinorhizobium)、不动杆菌属(Acinetobacter)和假单孢菌属(Pseudomonas)7个属。其中常抗棉根部内生拮抗细菌分属于芽孢杆菌属、短芽孢杆菌属、伯克霍尔德氏菌属和农杆菌属,而泗棉3号根部内生拮抗细菌则分属于芽孢杆菌属、伯克霍尔德氏菌属、中华根瘤菌属、不动杆菌属和假单孢菌属,二者的优势种群都是芽孢杆菌属细菌。BOX-PCR分析显示这些内生拮抗细菌具有丰富的遗传多样性。通过测定这些内生拮抗细菌对棉花黄萎病菌和棉花枯萎病菌的拮抗力大小,以及是否具有产纤维素酶、几丁质酶、蛋白酶和嗜铁素的活性,表明这些内生拮抗细菌具有不同的生防作用机制。     

6株拮抗酵母对梨毛霉菌(Mucor sp.)和青霉菌(Penicillium sp.)防效测定

采用稀释涂布平板法从拉萨市城关区的12种市售水果中分离酵母菌,并采用平板划线法对酵母菌菌株进行纯化;采用病斑法对皿内抑菌效果较强的6株拮抗酵母进行活体防效测定,并采用26S r DNA D1/D2区域序列测定法对酵母菌进行了分子鉴定。结果表明,193和233号两株酵母对梨毛霉菌(Mucor sp.)有明显的抑菌作用,其发酵液防效强于菌悬液;193号菌株对梨青霉菌(Penicillium sp.)有明显防效,其菌悬液抑菌作用大于发酵液。分子鉴定结果显示,6株酵母菌归为5个种,48号菌株为隐球酵母(Cryptococcus adeliensis),77号为葡萄有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum),193号为汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii),230和235号为禾本红酵母(Rhodotorula graminis),233号为胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)。     

棉花黄萎病拮抗细菌的筛选与抗菌物分析

对21株芽孢杆菌属细菌分别进行了摇瓶震荡培养,其发酵液上清液用硫酸铵盐析,杯碟法测定了沉淀物对大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)的拮抗活性,并对其中6株具有较强抑菌活性菌株的抗菌物进行了蛋白酶稳定性、热稳定性等分析.结果显示,BDT-25、JJ-5、DHT-12、80b-2、DHT-13和JJ-134菌株的抑菌活性较高;6株拮抗细菌发酵液沉淀物均对氯仿敏感,抗菌物溶液经蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶处理后活性丧失或显著下降,对温度也较敏感,认为这些抗菌物质为蛋白或多肽类物质.拮抗菌株产生的抗菌蛋白通过抑制大丽轮枝菌孢子萌发和使菌丝体原生质凝集而抑制其生长.     

烟草黑胫病生防茵筛选及防效初探

为筛选出烟草黑胫病生防茵,探索烟草黑胫病有效防治方法;采集了云南省9个地州29个县的141个采集土样,采用土壤稀释平板法进行微生物分离和平板对峙培养法进行筛选;分离筛选出280个对黑胫病茵有拮抗作用的茵株,其中抑茵半径大于17 mm的拮抗菌有19株.盆栽和田间防效试验表明,以HJ01912表现最好.田间防效达到73.8%;综合以上结果得出:各生防菌株对黑胫病均表现一定的防效,有些生防茵田间防效与化学药剂相当,能有效控制烟草黑胫病.     

土壤环境因子对棉花根际与内生拮抗细菌存活数量的影响

【目的】分析实验室条件下土壤理化性质对棉花黄萎病拮抗细菌数量及活性的影响,揭示拮抗细菌在土壤不同理化条件下的适应能力。【方法】以已筛选的4个棉花黄萎病拮抗细菌菌株为基础,采用涂布法测定培养皿土壤中不同理化因子(含水率、温度、含盐量、肥力、pH、土壤类型)下的拮抗细菌数量;通过最适土壤理化环境下的盆栽试验,对棉株根部土壤中的拮抗细菌数量进行测定并对棉花黄萎病发生情况进行统计。【结果】SHZ-24和BHZ-29菌株在土壤中活菌相对数量较高,其中SHZ-24的活菌相对数量在15%的土壤含水率下达到27.74%,BHZ-29菌株在中等肥力、灰漠土中分别达到24.81%和15.24%。在高肥、土壤含水率小于20%的土壤条件下,4种拮抗细菌对棉花黄萎病的防病效果均较好,其中BHZ-29防效最高(87.12%),SMT-24防效最低(35.04%)。【结论】4株拮抗细菌在水分合适和施肥土壤中有很好的适应性,可维持一定数量和活性。     

芽胞杆菌对香蕉枯萎病的防效评价

为有效评价生防菌对香蕉尖孢镰刀菌古巴转化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC4)B2的防病能力,通过对收集的生防菌资源进行抗性筛选,对249个测试菌中筛选到的3株拮抗菌A5-6、D7-16和CL7进行了抑菌观察、抗病谱测定、土壤抑菌能力监测及盆栽苗拮抗能力测定,并对测试菌进行了形态观察和16S r DNA测序鉴定。显微观察显示:3个拮抗菌会导致病原菌B2的菌丝发育畸形、膨胀、胞壁增厚、部分形成泡状、内容物外渗生长以及抑制孢子的萌发。抑菌谱测试表明,菌株对包括FOC4以内的其他真菌性病害抑菌率在60%以上,但对尖孢镰刀菌其他专化型抑菌率较低,仅在40%~50%之间。土壤拮抗性能评价结果表明:拮抗菌单独处理对土壤中FOC数量的控制有限,只能降低1个数量级,但对处理盆栽苗中土壤FOC数量的控制能下降到2个数量级。盆栽实验表明,菌株A5-6以72.3%的防病效果较D7-16(45.4%)、CL7(50.0%)的防效之间差异达到了极显著。3个菌株经形态学和16S r DNA序列鉴定表明D7-16为短短芽胞杆菌(Brevibacillus brevis),A5-6和CL7也属于芽胞杆菌,3个菌株都是香蕉镰刀菌枯萎病潜在的良好生防资源,可作为生防菌做进一步的开发性研究。     

水稻稻瘟病菌诱导表达启动子OsQ16p的克隆与功能分析

qRT-PCR分析表明,日本晴OsQ16基因受稻瘟病菌诱导表达。利用PCR技术从日本晴基因组中克隆了该基因编码区5′端上游1 229 bp的启动子序列,命名为OsQ16p。用其取代pBI121中gus基因上游的CaMV35S启动子,构建重组表达载体pBIQ16p,经农杆菌介导转化日本晴,获得转基因植株。GUS组织化学染色和qRT-PCR分析表明: (1) gus基因在抗性愈伤组织和阳性转基因植株中均能表达; (2)转基因植株在接种稻瘟病菌后12 h,GUS表达量是处理前的2.7倍; (3)抗病相关信号分子水杨酸(salicylic acid,SA)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)喷施转基因植株叶面后12 h,GUS表达量分别为处理前的3.1倍和3.5倍。以上结果表明,OsQ16p启动子具有启动活性,并明显受稻瘟病菌、MeJA和SA诱导表达。     

灰黄霉素对水稻稻瘟病菌的防治效果研究

为研究灰黄霉素对水稻稻瘟病菌的抑制作用及其对稻瘟病的防治效果。采用对峙法测定产灰黄霉素的展青霉GM120-43对稻瘟病菌抑制作用、菌丝生长速率法测定灰黄霉素对稻瘟病菌的毒力试验以及盆栽防治稻瘟病试验。结果表明:展青霉GM120-43对稻瘟病菌具良好的抑制作用;在稻瘟病的防治中,灰黄霉素稀释300倍时,预防叶瘟病与穗瘟病的效果分别为93.76%和53.79%,治疗效果分别为89.2%和49.21%。在所试验的浓度范围内,灰黄霉素防治效果与其浓度成正比,是一种具有前景的生物农药。     

用沙棘籽渣加工饲料级活性肽

正交试验表明,在温度37℃,pH值8.5,固液比1:20的条件下,用碱性蛋白酶水解沙棘籽渣5 h,多肽得率最高,为66.46%。通过膜分离,得到分子量500～2 000 Da和2 000～3 500 Da的2种多肽。动物试验显示,分子量500～2 000 Da的沙棘籽多肽在日粮添加量为2%的条件下,能够促进AA肉仔鸡的生长发育,分子量为2 000～3 500 Da的多肽在日粮添加量为0.4%～0.6%的条件下可以明显提高免疫抗病功能。     

甘蓝型油菜(Brassica napus L.)千粒重性状遗传体系分析

通过遗传差异较大的2个甘蓝型油菜（Brassica napus L.）纯系亲本组合（HSTC14×宁油7号）衍生后代的世代家系群体分析，应用主基因+多基因家系世代联合分离分析方法研究油菜千粒重的遗传体系。结果表明，甘蓝型油菜HSTC14×宁油7号组合千粒重遗传体系系由一对主基因+多基因构成，主基因中只有加性效应(d = 0.1062),不存在显     

分子伴侣hfq基因缺失对单核细胞增生李斯特菌毒力及生物被膜生成的影响

为了解非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)分子伴侣蛋白Hfq在LM毒力中发挥的调控作用,在构建LM-Δhfq缺失株的基础上,通过动物攻毒试验检测野毒株LM-SB5与缺失株LM-Δhfq对昆明系小鼠的LD50,肝、脾载菌量及对肝、脾、肾的病理损伤;通过溶血试验检测二者的溶血活性;通过结晶紫染色的方法检测二者的生物被膜生成能力。以分析hfq基因缺失对LM毒力及生物被膜生成的影响。结果显示,与LM-SB5相比,LM-Δhfq对小鼠的LD50升高了6.067倍,毒力显著降低;肝、脾载菌量在第2,4,5天显著下降(P0.05),在第3天下降极显著(P0.01);对肝、脾、肾的病理损伤也有所减弱,LM-Δhfq较LM-SB5溶血能力下降了2倍,生物被膜生成能力在24 h时显著降低(P0.05)。研究结果证实,Hfq蛋白对LM的毒力及生物被膜生成能力具有重要调控作用。     

地鳖提取物制备和体外抗氧化活性的研究

为研究地鳖不同提取物的体外抗氧化活性。分别通过蛋白酶水解、水提法制备地鳖多肽、多糖和水提物,采用邻苯三酚自氧化、Fe²⁺-邻二氮菲法和分光光度法分别检测地鳖不同提取物对超氧阴离子自由基（O₂^-·）、羟自由基（OH·）和二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除,分光光度法分别检测红细胞氧化溶血和肝脏线粒体肿胀吸光度值,硫代巴比妥酸（TBA）法测定小鼠不同组织丙二醛（MDA）含量。地鳖多肽、地鳖多糖,地鳖水提物组对O₂^-·、OH·和DPPH·三种自由基的清除率显著低于阳性对照组,随着提取物浓度的升高对自由基清除率增加;随着地鳖三种提取物浓度提高红细胞溶血吸收值比溶血组显著降低,地鳖水提物组红细胞溶血率明显低于地鳖多肽和多糖组。地鳖多肽组肝脏MDA生成抑制率最高,地鳖多糖组肾脏MDA抑制率高于地鳖多肽和水提物组,随着地鳖提取物浓度提高各组织中MDA生成抑制率升高;随着反应时间延长地鳖提取物组肝脏线粒体吸光度值高于肿胀对照组。地鳖多肽、多糖和水提物有效的清除三种自由基,抑制红细胞溶血和肝脏线粒体肿胀,保护肝肾组织氧化损伤,具有一定程度体外抗氧化活性。     

芽孢杆菌Pb-4菌株鉴定及其抑菌活性的研究

拮抗菌Pb-4是一株对多种植物病原菌有较强抑制作用的菌株。为了明确拮抗菌Pb-4的分类地位和抑菌机理,通过形态观察、生理生化特征和16S rRNA基因序列同源性比对及系统发育树分析,对Pb-4菌株进行鉴定。并采用平板对峙培养法测定Pb-4菌株的抑菌谱,显微观察其抑菌作用,采用硫酸铵沉淀和乙醚、苯提取得到抑菌活性物。通过加热处理,明确高温对Pb-4菌株抑菌活性的影响。结果表明,Pb-4菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌;Pb-4菌株对番茄枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、青椒枯萎病菌、辣椒疫霉病菌、苹果腐烂病菌均有抑制作用,其抑菌活性具有广谱性。该菌菌液能明显抑制枯萎病菌孢子的萌发,并对病菌菌丝有致畸作用;对番茄枯萎病菌的抑制生长率达93%,经100,121℃高温处理后的抑菌活性分别是未处理菌液的98.9%和80.1%。从菌液中提取的蛋白、酶、抗生素类活性物质对枯萎病菌的生长繁殖均有很强的抑制效果。为Pb-4菌株在病原菌防治中的广泛应用提供强有力的理论依据。     

龙眼发酵乳酸饮料工艺优化研究

以新鲜龙眼肉为主要原料,用川秀乳酸菌酸奶发酵粉(内含保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌)进行乳酸发酵,通过L9(34)正交设计法进行发酵条件优化。通过感官评定的分析方法得出最佳工艺将龙眼浆(龙眼∶水=1∶8质量比)121℃灭菌20 min,脱脂奶粉与龙眼浆1∶5(W/W)混合,冷却,添加0.15%(W/W)发酵剂,于42℃下发酵8 h,快速破乳同时将龙眼酸奶与水按照1∶1(体积比)混匀,并添加柠檬酸0.2%,蔗糖0.9%,复合型稳定剂(琼脂∶果胶∶单甘酯=4∶1∶1)0.3%,混合均匀。配制成具有龙眼风味、营养性突出的发酵型饮料,为工业化生产提供参考。     

沙拉沙星单克隆抗体制备及鉴定

为制备敏感性好、亲和力高、特异性强的抗沙拉沙星(Sarafloxacin,SARA)单克隆抗体,采用碳二亚胺法合成SARA人工抗原,通过免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌抗SARA单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备SARA mAb,通过间接ELISA和间接竞争ELISA对SARA mAb的免疫学特性进行鉴定。结果表明:小鼠经免疫原免疫后,小鼠多抗血清效价均达到1∶128 000。选择敏感性较好的2号小鼠进行细胞融合,经多次亚克隆后,筛选出1G3、3H3两株杂交瘤细胞株,其中1G3所产SARA mAb效价较高,为1∶512 000,IC_(50)为6.34 ng/mL,亲和常数为8.55×10~8L/mol,与诺氟沙星的交叉反应率为1.06%,与其他药物交叉反应率均低于0.50%。     

一种植物提取物对CMV、PVYN及其昆虫介体的作用

以植物Pt为材料,对其抗两种植物病毒——CMV(Cucumber mosaic virus, CMV)和PVYN (Potato virus YN, PVYN)及其昆虫介体[蚜虫Myzus pesicae (Suzer) ]的作用进行研究。结果表明：(1) VT1具有较高的抗病毒活性,1mg/ml浓度下对CMV和PVYN的抑制率分别为91.6%和96.2%;(2) VT1对蚜虫有较强的触杀作用,24h和48h的LC50值分别为1.953 mg/ml和0.8125mg/ml。生物活性跟踪发现,氯仿组分为植物Pt对蚜虫起触杀作用的有效部位;(3) VT1对蚜虫具有一定的忌避和内吸作用,但无明显熏蒸作用。