地被菊直接体细胞胚发生研究

该文建立了地被菊品种‘玉人面’直接体细胞胚受体体系。试验以‘玉人面’叶片为外植体,研究了培养基、生长调节剂等因子对其直接体细胞胚诱导的影响,同时还进行了抗生素敏感性试验。结果表明:①在相同浓度下,KT诱导体胚的效果优于6-BA;②体胚诱导培养基为MS＋KT 20 mg/L＋2,4-D 2.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L,诱导10 d后,转入去除2,4-D的体胚发育培养基MS＋KT 2.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L中培养30 d,体胚发生率最高为93.0％,平均每外植体分化的体胚数为13.6个; ③MS基本培养基对‘玉人面’体胚发生的效果优于N 6、B5 培养基;④‘玉人面’直接体胚发生途径的基因转化的卡那霉素选择压为10 mg/L,头孢霉素前期（3～4周内）选择压为300 mg/L,后期（4周后）为100 mg/L。      

冬小麦遗传再生体系及根癌农杆菌介导的转化研究

以临优145的幼胚为外植体诱导植株再生,并进行农杆菌转化研究.以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D 2 mg/L+肌醇100 mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+40 g/L麦芽糖+8 g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组织,每2周继代一次,将诱导出的淡黄色、颗粒状Ⅱ型胚性愈伤组织接种于分化培养基(MS+ZT 1 mg/L+IAA 1mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+麦芽糖40 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)上培养2-3周,然后转接到再生培养基(1/10 MS+NAA 0.5mg/L+KT0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)中进行再生成苗.接种1229块幼胚,得到987块愈伤组织,Hyg抗性愈伤组织123块,抗性再生植株34株.在建立了再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入幼胚愈伤组织,抗性植株的PCR检测呈阳性.X-gluc染色表明,少部分愈伤组织出现肉眼可见的蓝色晕斑,说明GUS基因已经在小麦幼胚愈伤组织中表达.     

两种杏的幼胚培养

胚挽救技术是目前克服果树杂种胚早期败育的有效途径,为了探明‘黄河’‘金太阳’两个杏品种幼胚培养成苗的基本方法,以两种杏不同发育期的幼胚为试验材料,利用组织培养的方法研究了胚龄、基本培养基、植物生长调节剂等因素对幼胚萌发、成苗的影响.结果表明:基因型、胚发育指数(PF)、培养基均显著影响幼胚萌发与成苗.不同品种均随PF值的增大幼胚萌发率上升;‘黄河’杏在PF值为0.92时,萌发率最高,达61.90%;‘金太阳’杏在PF值为0.95时,萌发率最高,达71.00%.不同品种幼胚萌发的最佳培养基不同,‘黄河’杏胚萌发的最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.1mg/L+GA 2.0mg/L,萌发率达55.67%;‘金太阳’杏胚萌发的最佳培养基为1/2MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.1mg/L,萌发率达88.67%;‘黄河’杏继代培养在MS+6-BA 0.2 mg/L+IAA 0.5mg/L培养基上长势好,成苗率达75.00%;‘金太阳’杏继代培养在MS+6-BA 0.25 mg/L+IAA 0.1mg/L培养基上长势好,成苗率达44.44%;二种杏胚继代培养形成的嫩梢在1/3MS培养基上的生根率比MS及1/2 MS培养基上的生根率高.     

百合幼胚离体培养成株体系的建立

用5个百合常规栽培品种杂交组合的幼胚进行离体培养，探讨了不同的杂交组合、幼胚取材时期、培养基激素配比、4℃的预处理时间等条件对百合幼胚培养再生植株特性的影响，并在此基础上建立了一套可靠、重复性好的百合幼胚离体培养的成株体系。在MS＋KT1.0mg/L NAA 0.5mg/L激素配比培养基上，百合胚龄在50－70天时，采用适当的剥离胚的方法，80％以上的种胚可萌芽；在BA浓度较高的培养基上，剥离胚可诱导出愈伤组织并分化出苗。分化的苗丛在生根培养基MS＋NAA0.1mg/L上均能生成丛生苗；将苗丛从基部切开后，每棵单株均可独立成为完整植株。     

超甜玉米自交系成熟胚愈伤组织诱导及再生方法研究

研究超甜玉米自交系1132成熟胚愈伤组织诱导和植株再生频率的影响因素,丰富诱导愈伤组织的外植体来源。以1132成熟胚为材料,通过比较研究蔗糖、脯氨酸、2,4-D等因素对愈伤组织诱导率和分化再生的影响,确定适合1132成熟胚外植体愈伤组织诱导和再生的方法。结果表明,蔗糖浓度40g/L,脯氨酸1.4g/L、2,4-D浓度为4 mg/L的诱导培养基上愈伤组织出现最早,且愈伤组织诱导率最高,达到75%。在继代培养基中2,4-D浓度为2 mg/L,其他相同的条件下,愈伤组织继代性最好,最易产生胚性愈伤组织。植株再生培养通过含60g/L蔗糖的MS培养基培养2~3周,后转入含30g/L蔗糖的MS培养基培养再生植株的方法最好,可实现芽和根的同步再生。利用1132成熟胚诱导产生愈伤组织,并分化再生植株是对幼胚再生体系的有效补充,可以克服玉米基因工程育种研究中幼胚受季节限制的不利条件,丰富甜玉米基因工程育种中外植体的来源。     

月季未成熟胚再生植株的研究

为了建立月季遗传转化的再生体系,该试验以‘漂多斯’、‘蓝丝带’、‘索奴拉’3个月季品种的未成熟胚为外植体,获得了月季再生植株.结果表明,在MS+ZT 0.5 mg/L、 MS+ZT 4.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L、MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基上,‘漂多斯’、‘蓝丝带’、‘索奴拉’能够诱导出再生芽,再生率分别为33.3%、33.3%、16.7%;再生芽在不含植物生长调节剂的MS基本培养基上伸长、展叶,在MS+IBA 05 mg/L的培养基上能得到生根的再生植株.随着月季未成熟胚贮藏时间的延长,不仅污染率增加,而且胚成熟后多发育成胚芽;贮藏时间不宜超过90 d.这种以未成熟胚为外植体获得再生植株的途径,可为遗传转化提供有效的受体系统.      

金桔无性快繁体系建立的研究

以金桔的成龄叶片、带腋芽茎段及种胚为外植体,将它们接种于附加不同激素的MS培养基中,并进一步诱导分化出芽及再生植株。结果表明:剥去种皮的种胚诱导效果远好于成龄叶及茎段的诱导效果。而MS+蔗糖30g/L且不添加生长调节剂的配方最适宜种胚初代诱导。诱导获得的上胚轴节段在MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L的培养基上进一步分化成苗,将无根苗接在1/2MS+NAA0.02mg/L的培养基中,经3周培养生根。     

玉米自交系愈伤组织诱导及植株再生体系的建立

玉米的组织培养比较困难,其再生体系还不完善,建立骨干自交系稳定、高效的遗传转化体系是玉米转基因技术的必要前提。以玉米常用自交系齐319、478、502、黄C和7922不同大小（1.0、1.5和2.0 mm）的幼胚为外植体,探讨不同基因型、胚大小和植物生长调节剂浓度对幼胚再生的影响,从而建立玉米高频再生体系。结果表明：以1.5 mm大小的齐319幼胚为外植体,愈伤诱导率最高,达到了86.2%;1.5 mg/L的24-D有利于胚性愈伤的形成和胚性的保持;两步法分化培养可以提高愈伤组织分化、再生成苗。确定了玉米自交系齐319较适合的培养程序为：将1.5 mm大小的幼胚盾片向上接于诱导培养基（N6＋24-D 1.5 mg/L＋L-脯氨酸0.7 g/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂粉8 g/L＋硝酸银5μmol/L）,在25℃下暗培养20 d;挑选胚性愈伤组织在温度25℃、暗培养条件下进行继代培养,继代培养基与诱导培养基相同,每14 d继代1次;将愈伤组织继代42 d后转移至分化培养基1（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖60 g/L＋gelrite 3 g/L）,继续暗培养10 d左右,待愈伤组织形成象牙白色的块状物且有绿点出现时,将其转移到分化培养基2（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖30 g/L＋gelrite3 g/L）进行光培养,2～3 d即可分化出苗;待幼苗长到4～5 cm高时,移至生根培养基（1/2 MS＋IBA0.8 mg/L＋蔗糖30 g/L）,14～21 d幼苗长出大量的根系,形成完整的植株。     

东方百合胚性愈伤组织诱导和植株再生研究

为建立东方百合元帅、提拔、西伯利亚的高频愈伤体系,以幼叶、花丝、生长点为外植体,进行了不同激素组合的MS固体培养基对胚性愈伤组织诱导及植株再生研究。结果发现,Picloram比2,4-D更有利于胚性愈伤组织的诱导,幼叶、花丝更能有效诱导出胚性愈伤组织和再生植株,生长点的出愈率较低。幼叶在MS＋2mg／L Pieloram培养基,花丝在MS＋2mg／LPicloraIn＋0．1mg／L ABA培养基,生长点在MS＋2mg／LPieloram＋0．03mg／LTDZ培养基上能高效诱导出愈伤组织,来自幼叶的胚性愈伤组织在MS＋1．0mg／LBA＋0．1mg／LKT＋0．1mg／LIBA培养基上能高频再生出芽,来自花丝的胚性愈伤组织在Ms＋1．5mg／LBA＋0．3mg／LKT＋0．2mg／LIBA培养基上能高频再生出芽。愈伤组织生长呈直线生长趋势。     

两个牡丹杂交系种子胚培养技术研究

为保存和扩繁牡丹杂交系种质资源,提供牡丹组培苗的菌根化供试体系,本试验筛选牡丹杂交系‘Z1-10-3’和‘Z1-WM’的种子,取种胚进行胚培养,建立了牡丹胚培养无菌体系。结果表明：成熟种子经70%酒精2min与0.1%HgCl20 min表面消毒后去外种皮切开胚乳直接取胚接种,3 d时启动率达76.7%,比直接用种子和去外种皮的种子接种启动时间提前30～50 d。胚根苗直接培养的最佳培养基和培养条件为：1/2MS＋IBA1.0mg/L＋AC0.4g/L＋Sugar30g/L,在自然弱光照下培养。     

西葫芦双单倍体自交一代离体再生研究

以西葫芦DH12-11409双单倍体植株自交后代种子为试材,研究不同激素组合、外植体类型和苗龄对诱导西葫芦不定芽再生以及不定芽生根的影响。结果表明,取5d龄西葫芦双单倍体黄绿色子叶的子叶节为外植体,在MS+30g/L Suc+8g/L Agar+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上诱导不定芽效果最好,诱导率高达90.0%,分化系数为8.5;生根培养基则以MS培养基中添加0.05或0.1mg/L NAA为宜;5~6片真叶再生植株经驯化移栽成活率高达90.0%,为再生植株驯化移栽的最佳时期。     

双单倍体南瓜后代子叶离体再生植株研究

【目的】探索一种快速扩繁南瓜双单倍体植株的技术,以扩大双单倍体植株的数量,提高其育种效率。【方法】以双单倍体南瓜后代子叶为外植体,在MS培养基中分别添加不同质量浓度的6-BA（1.0,4.0 mg/L）和NAA（0.05,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L）,筛选最佳组合;在此基础上,继续添加不同质量浓度的2,4-D（0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L）,筛选3种激素的最佳组合。在MS＋6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的不定芽诱导培养基上,研究其对不同苗龄子叶的诱导效果。将不定芽接种在含不同质量浓度NAA (0.05, 0.1, 0.2, 0.5 mg/L)的MS生根培养基上,比较生根率和根系生长势。【结果】在诱芽培养基中,添加2种激素时,以6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的MS培养基诱导率最高,为66.67％,分化系数为3.89;添加3种激素时,以6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L＋2,4-D 1.5 mg/L的MS培养基诱导率最高,达80.95％,分化系数为4.12。当子叶展开后苗龄为3 d时,不定芽诱导率相对较大,为77.42％。不定芽在MS+0.1 mg/L NAA培养基上生根效果最好,根系生长健壮,生根率达100%。【结论】双单倍体南瓜后代子叶离体再生的适宜激素质量浓度组合为MS＋6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L;以展开后3 d苗龄的子叶作为外植体诱导效果最好;MS+0.1 mg/L NAA是不定芽诱导生根的最适培养基。     

‘黄河蜜3号’高效再生体系的建立

以厚皮甜瓜‘黄河蜜3号’近轴端、远轴端子叶以及下胚轴作为外植体,在多种激素配比组合的培养基上进行分化诱导不定芽试验,并对发生的不定芽伸长和无根苗发根进行培养基的筛选.结果表明:适合‘黄河蜜’不定芽诱导的外植体材料为近轴端子叶,培养基激素组合为MS+2.0 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1IAA;伸长培养基激素组合为MS+0.1 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1IAA;生根培养基为1/3MS.     

甜瓜再生体系的建立

[目的]建立甜瓜再生体系。[方法]以加格达甜瓜为材料,以MS培养基为基本培养基,根据植物生长调节剂对植物愈伤组织的诱导分化的决定性作用,通过设计不同生长素和细胞分裂素的组合与不同浓度配比,研究建立和优化高效的加格达甜瓜再生体系。[结果]愈伤组织诱导培养基:MS+2,4-D 1.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L,出愈率93%;芽诱导培养基:MS+6-BA 2.0 mg/L,出愈率76%,出芽率100%;芽的分化培养基:MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA0.2 mg/L,分化率为95%;芽的伸长培养基为:MS+6-BAI 0.05 mg/L;根的诱导培养基为:MS+IAA0.2 mg/L。[结论]建立了1套甜瓜的离体再生体系,为利用转基因技术培育出具有抗病虫害、抗逆性等优良性状的甜瓜奠定基础,在理论和实践上均具有重要的意义。     

哈密瓜顶芽的诱导及植株的再生

为获得一套哈密瓜快速繁殖的方法,以哈密瓜无菌苗幼嫩的顶芽为外植体,研究不同激素配比对顶芽诱导、增殖和生根的影响。结果表明,顶芽在不添加激素的培养基中没有诱导出丛生芽,在添加激素6-BA和NAA的激素中的诱导率达到91%,哈密瓜幼嫩顶芽诱导不定芽的最适培养基为1/2MS+ 6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L。哈密瓜组培苗在不添加激素的培养基中没有根形成,添加激素NAA的生根培养基中生根率达到96%,最佳生根诱导培养基为1/2MS+ NAA 1.0 mg/L。     

生物技术在甜瓜育种中的应用

阐述甜瓜离体培养、单倍体育种、细胞和原生质体培养及抗病毒性等方面取得的研究进展,并对甜瓜组织培养、生物技术与育种的前景作了展望。     

提高小麦×鸭茅状摩擦禾杂交组合的小麦单倍体植株成苗率的探索

法国小麦和中国小麦杂交的后代和鸭茅状摩擦禾(父本)杂交,授粉1 d后用100 mg/L 2,4-D蘸穗处理,12~14 d取单倍体幼胚培养。结果表明,仅培养于1/2 MS培养基上,成苗率为78.01%;而根据幼胚的发育状态,先将发育较完善的幼胚直接接种在1/2 MS培养基上,将发育不良的幼胚先接种于1/2 MS+2 mg/L 2,4-D的培养基上进一步养育幼胚,3~4 d后再将其转入1/2 MS培养基中,此法的成苗率为93.22%,较前者的成苗率提高了15.21个百分点。     

凤尾蕨科植物蜈蚣草的组织培养(英文)

[目的]对凤尾蕨科植物蜈蚣草的组织培养方法进行研究。[方法]以野外采集的叶芽为外植体,以1/2MS+3%蔗糖+0.7%琼脂为基本培养基,通过激素配比试验,筛选蜈蚣草愈伤组织诱导和继代培养的培养基配方。[结果]从外植体诱导出愈伤组织最佳培养基配方为1/2MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+0.5g/LPVP+0.1mg/LKT+0.5mg/L2,4-D;从愈伤组织诱导出GGB和从GGB诱导出幼苗最佳培养基配方为1/2MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+0.5g/LPVP+1.0mg/LKT+0.01mg/L2,4-D;另外,使用1/2MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+0.5g/LPVP+0.5mg/L2,4-D做继代培养可以使愈伤组织持续增殖。[结论]研究直接使用野外材料组织培养,简化了试验步骤,是一种方便快速的蜈蚣草组培方法。     

高酰基结冷胶发酵生产工艺优化研究

通过单因素及正交试验对高酰基结冷胶的摇瓶发酵培养基进行了优化,得到了高酰基结冷胶生产工艺中的最佳发酵培养基配方。结果表明:优化后的高酰基结冷胶发酵配方为:蔗糖2.75%,鱼蛋白胨0.25%,KH2PO40.10%,CaCO30.12%。50 L罐发酵试验结果表明,发酵液粘度为20 000 cp,纯胶收率达1.55%以上。该结果可为提高高酰基结冷胶的产胶率提供参考。     

根癌农杆菌介导CYP1A1转化菠萝的研究

将菠萝(Ananas comosus)愈伤组织经含有植物表达重组质粒(pUHA1-CYP1A1)的根癌农杆菌(LBA4404菌株)侵染后,在MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA+100μmol/LAS+8g/Lagar上共培养3d,转入选择培养基(MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA+20mg/LKm+400mg/LCarb+8g/Lagar)上培养约10d后开始分化出不定芽;28d后将绿色的抗Km不定芽转入MS+2.0mg/LNAA+30mg/LKm+300mg/LCarb+8g/Lagar上再进行连续2轮选择,随后将绿芽转入MS+1.0mg/LIBA+30mg/LKm+8g/Lagar上生根,共获得95株Km抗性植株,转化率0.12%～2.69%.对其中部分的抗Km植株进行PCR检测,PCR阳性植株率达64.29%.经Southern杂交进一步证实,CYP1A1已整合到菠萝基因中.以琼脂为培养基凝固剂、共培养基中添加AS、增加选择次数和逐渐增加新一轮选择培养基中的Km质量浓度等是根癌农杆菌介导菠萝愈伤组织获得转基因植株的重要条件.