一株毛竹根部内生细菌SHEN20121的鉴定 及其对植物病原真菌的抑制作用

在分离鉴定毛竹(Phyllostachys edulis)根部相关内生菌的过程中,筛选得到具有生物活性的菌株SHEN20121。通过对其16S rDNA 序列的分析,结果显示其与类芽孢杆菌属中97个细菌的序列相似性为97%～99%;系统学分析显示该菌株与多粘类芽孢杆菌聚在一个分支上,bp支持率为 100,因此菌株SHEN20121被鉴定为多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）。通过平板对峙实验证明了菌株SHEN20121对多种植物病原真菌：尖孢镰孢(Fusaricum oxysporum),互隔链格孢(Alternaria alternata),立枯丝核菌(Rhizoctonia solani),灰葡萄孢(Botrvtis cinerea),小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora),柑橘青霉病菌(Penicillium italicum)均具有抑制作用,其中对灰葡萄孢,小孢拟盘多毛孢和柑橘青霉病菌的抑菌效果明显,尤其是首次发现对拟盘多毛孢属病原菌的抑制作用。作者认为该菌在生物农药方面具有潜在的应用价值,并可能将在植物病害的生物防治方面发挥重要作用。     

DPS分析厚朴酚类提取物对四种植物病原真菌的抑制效果

为了解厚朴提取物对4种病原真菌的抑制作用,本研究采用生长速率法测定了厚朴提取物对葡萄座腔菌(Botryosphaeria berengeriana)、细交链孢菌(Alternaria alternate)、污斑拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis foedans)、香蕉褐缘灰病菌(Pseudocercospora musae)的抑制作用并利用数据处理软件DPS分析了相关数据,结果表明厚朴乙醇提取物对4种病原真菌都有一定程度的抑制,其中对污斑拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis foedans)的抑制作用最好,EC50值为0.0000069mg/mL,其次为细交链孢菌(Alternaria alternate)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria berengeriana),EC50值分别为0.0009、0.0208,抑制效果最差的为香蕉褐缘灰病菌(Pseudocercospora musae),EC50值为0.1327 mg/mL;另外比较不同真菌毒力方程斜率,发现香蕉褐缘灰病菌(Pseudocercospora musae)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria berengeriana)对厚朴提取物敏感性较好,污斑拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis foedans)、细交链孢菌(Alternaria alternate)敏感性较差。     

油茶叶枯病原的形态及ITS序列分析鉴定

对一株引起油茶落叶的叶枯病菌进行分离鉴定,为防治该病菌奠定基础。从油茶叶枯病斑中分离得到一株优势菌,通过对其形态特征的观察及rDNA的转录间隔区(ITS)序列测定,并与Genbank中同源性较高的菌株构建系统发育树,最后确定该菌株为拟盘多毛孢属菌,且与小孢拟盘多毛孢菌亲缘关系最近。     

内生拮抗细菌对草莓2种病原真菌的抑制作用

从草莓健康植株中分离得到9株内生细菌，与灰葡萄孢菌和腐皮镰刀菌进行对峙试验，选出对这2种病原真菌有明显拮抗作用的2种菌株BS-CM511-2和BA-CM11-1。通过形态及16S rRNA序列鉴定可知，菌株BS-CM511-2为枯草芽孢杆(Bacillus subtilis),菌株BA-CM11-1为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)。BA-CM11-1和BS-CM511-2这2株内生拮抗菌能够显著抑制灰葡萄孢菌和腐皮镰刀菌的生长，抑菌半径分别为36.0、27.0、30.3、24.3 mm。这2株拮抗内生菌无菌发酵液稀释10倍下对灰葡萄孢菌孢子萌发的抑制率分别达到81.75%和88.80%,稀释5倍下对腐皮镰刀菌孢子萌发的抑制率分别达到60.80%和69.20%,枯草芽孢杆菌发酵液稀释10倍对灰葡萄孢菌的抑制效果较好，枯草芽孢杆菌发酵液稀释5倍对腐皮镰刀菌抑制效果较好，这2株内生菌可作为生防资源应用于草莓病害的防治。     

生防细菌1505的鉴定及其对采后柑橘炭疽病的抑制效果

采用细菌学方法及分子生物学技术对菌株1505进行鉴定,并对其在防治采后柑橘炭疽病上的效果进行研究.结果显示,菌株1505对柑橘炭疽病菌具有拮抗活性,其活菌悬浮液在PDA平板上对柑橘炭疽病菌产生明显抑制作用,而灭菌发酵液和去除菌体的发酵液均无抑菌效果;连续8次在人工培养基上转代培养,菌株1505对柑橘炭疽病菌生长的抑制力没有发生明显改变;菌株1505对胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.]引起的柑橘炭疽病有明显的防治作用,刺伤接种的防效为48.8%,自然发病的防效为46.3%.根据形态学特征和生理生化反应,结合16SrDNA序列分析结果,将菌株1505鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

草莓根腐病拮抗细菌的分离筛选与鉴定

为筛选和鉴定草莓根际土壤中对草莓根腐病菌(Colletotrichum gloeosporioides)有拮抗作用的细菌,采用平板对峙培养法,对从北京市昌平区小汤山草莓种植基地土样中分离到的306株菌株进行初筛,复筛后获得了1株拮抗效果好且具有较好稳定性的菌株GF-98,其抑菌带宽度为9.3 mm。此外,菌株GF-98的抑菌谱较广,对草莓根腐尖孢镰刀病菌、草莓灰霉病菌、草莓根腐石楠拟盘多毛孢病菌等9种植物病原真菌均有较好的抑菌效果。在显微镜下观察发现,菌株GF-98的代谢产物对草莓根腐病菌有致畸作用,包括菌丝缩短、粗细不均、分枝增多扭曲、细胞原生质浓缩等现象。16S rDNA基因分析以及生理生化鉴定等方法表明,菌株GF-98为多粘类芽孢杆菌(Peanibacillus ploymyxa)。     

拮抗细菌对部分水果产后病原真菌的抑制及防腐作用

研究了桔抗细菌即地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)W10和多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)W3、Y2对苹果轮纹病菌、柑桔炭疽病菌和柑桔青霉病菌的抑制作用。结果表明,拮抗细菌对病菌菌丝生长、产孢和芽管伸长均有显著的抑制作用,其中W10菌株抑菌作用最强。显微镜观察显示,车抗细菌可引起病菌菌丝异常,即菌丝扭曲,菌丝细胞畸形,菌丝颜色变淡,菌丝断裂离解等。离体果实接种试验表明,菌株W10能明显推迟水果发病,降低果腐率,抑制病斑扩展。     

拮抗细菌对部分水果产后病原真菌的抑制及防腐作用

研究了拮抗细菌即地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)W10和多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)W3、Y2对苹果轮纹病菌、柑桔炭疽病菌和柑桔青霉病菌的抑制作用。结果表明，拮抗细菌对病菌菌丝生长、产孢和芽管伸长均有显著的抑制作用，其中W10菌株抑菌作用最强。显微镜观察显示，拮抗细菌可引起病菌菌丝异常，即菌丝扭曲，菌丝细胞畸形，菌丝颜色变淡，菌丝断裂离解等。离体果实接种试验表明，菌株W10能明显推迟水果发病。降低果腐率．抑制病斑扩展。     

贵州油茶叶枯病病原鉴定研究

本研究采用形态学鉴定及多基因分子鉴定的方法,对贵州省油茶叶枯病病原进行分离、纯化和鉴定。根据形态特征,结合ITS1-TUB2基因所构建的系统发育树综合鉴定,结果表明本研究分离致病菌为拟盘多毛孢属的小孢拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis microspora)。分离菌株KLXY-7-3与Genbank中同源性较高的菌株序列比对分析,分别与小孢拟盘多毛孢菌MF375901. 1、MK409844. 1菌株聚为一个独立的进化分支,且置信度为99%。本研究系统调查采集贵州油茶主要种植区的典型病样,可为该病原菌发生规律及防治时期的研究提供理论依据。     

两种生防制剂对食用菌杂菌的抑制作用

利用生长速率法和悬滴法,测得生防药剂多粘类芽孢杆菌剂和枯草芽孢杆菌剂对食用菌常染杂菌脉孢霉和青霉菌丝的生长速率和孢子萌发的抑制效果。试验结果显示,两种生防制剂对脉孢霉和青霉有一定的抑制作用,其中,多粘类芽孢杆菌药剂对脉孢霉和青霉孢子萌发的抑制作用明显,抑制率分别为90.44%和65.04%;而枯草芽孢杆菌药剂对脉孢霉和青霉的菌丝生长的抑制效果在处理中表现为最高,抑制率分别为36.29%和46.66%。因此,多粘类芽孢杆菌药剂可以作为杂菌孢子抑制剂,枯草芽孢杆菌药剂可以作为杂菌菌丝生长的抑制剂。     

火棘果实浸提液的抑菌活性研究

[目的]为了获得更为安全有效的抗菌剂,并为开发利用火棘资源提供理论依据。[方法]分别以70%乙醇和1%盐酸＋70%乙醇浸提获得火棘果实浸提液,并研究其抗菌性。[结果]1%盐酸＋70%乙醇浸提获得的火棘果实浸提液对大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和一种未知的革兰氏阳性细菌有较强的抑制作用,但对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）无抑制作用;对青霉（Penicicilliumspp.）有较好的抑制作用,但对根霉（Rhizopus stolonifer）、毛霉（Mucorspp.）、胶胞炭疽菌（Colletotrichum gloeospo-rioides）和拟盘多毛孢菌（Pestalotiopsisspp.）无抑制作用。70%乙醇浸提获得的火棘果实浸提液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和一种未知细菌及根霉、毛霉、青霉、胶胞炭疽菌和拟盘多毛孢菌均无抑制作用。[结论]火棘果实提取液中含有较多的花青素类物质。     

1 株拟盘多毛孢菌的培养·纯化及其ITS区的克隆测序

[目的]为拟盘多毛孢菌分离、纯化及ITS区克隆测序相关研究提供依据。[方法]对鸡枞菌内生拟盘多毛孢菌进行分离、纯化,并通过形态学及分子生物学的方法进行鉴定,对其ITS区进行PCR扩增和克隆测序分析。[结果]形态学鉴定结果显示没有已报道的拟盘多毛孢菌与其相似,系统发育树结果也表明其属于一单独分支中。[结论]建立拟盘多毛孢菌的ITS序列数据库是十分必要的。     

1株拟盘多毛孢菌的培养·纯化及其ITS区的克隆测序

[目的]为拟盘多毛孢菌分离、纯化及ITS区克隆测序相关研究提供依据。[方法]对鸡枞菌内生拟盘多毛孢菌进行分离、纯化,并通过形态学及分子生物学的方法进行鉴定,对其ITS区进行PCR扩增和克隆测序分析。[结果]形态学鉴定结果显示没有已报道的拟盘多毛孢菌与其相似,系统发育树结果也表明其属于一单独分支中。[结论]建立拟盘多毛孢菌的ITS序列数据库是十分必要的。     

不同杀菌剂对枇杷拟盘多毛孢的室内毒力测定

[目的]为枇杷灰斑病防治进行室内药剂筛选。[方法]采用生长速率法研究10种杀菌剂对枇杷灰斑病病原菌拟盘多毛孢的毒力测定。[结果]当浓度为12.5～200 mg/L时,10种化学药剂对枇杷灰斑病病原菌有不同程度的抑制作用,药剂浓度与抑制作用呈正相关。其中烯唑醇类、苯并咪唑类、苯基酰胺类药剂对病原菌的抑制效果最好。[结论]筛选出3种对枇杷拟盘多毛孢有明显抑菌作用的药剂,即禾果利、保利丹和烯酰吗啉。其中禾果利对枇杷拟盘多毛孢菌的抑菌效果最好,保利丹次之。     

坚强芽孢杆菌的筛选及抗菌活性

采用兰层琼脂法初选对枯斑盘多毛孢Pestalotia funerea有抗生作用的细菌苗株共10株，4株Pseudomonas spp．对枯斑盘多毛孢的抗生作用小于6株Bacillus spp．；在Bacillus spp．中，以B5菌株拮抗带最大，初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属的坚强芽孢杆菌Bacillus firmus．对峙培养显示B5对枯斑盘多毛孢有明显的抑菌圈（平均6mm）；B5产生的非挥发性物质对枯斑盘多毛孢菌落的抑制总的表现为稀释度越小，菌落直径生长越小．抑制作用越大，抑制中量为1：1000～1：10000；B5产生的多糖、粗脂肪、蛋白质对枯斑盘多毛孢孢子萌发有抑制作用，粗脂肪可完全抑制枯斑盘多毛孢的孢子萌发（抑制率为100％）．多糖在24h可完全抑制孢于萌发，蛋白质相对较差，48～72h抑制率为85％左右．     

人面子树叶斑病病原菌的分离与鉴定

为了明确引起人面子叶斑病的病原菌种类,本研究利用常规组织分离纯化方法对罹病的人面子树叶片进行病原菌分离和纯化,利用柯赫氏法则验证疑似病原菌菌株的致病性,然后结合菌株的形态学特征和联合基因(ITS和TUB2)序列的系统发育分析进行种类鉴定.结合形态学鉴定和多基因序列分析,将分离菌RM-1、RM-2和RM-3等3个菌株依次鉴定为庞多顶多毛孢(Bartalinia pondoensis)、暹罗刺盘孢(Colletotrichum siamense)和小拟盘多毛孢(Pestalotiopsis parva),且上述3种菌均可侵染人面子树叶片引起褐色病斑.确认人面子树叶斑病的病原菌为庞多顶多毛孢(B.pondoensis)、暹罗刺盘孢(C.siamense)和小拟盘多毛孢(P.parva).该研究可为制定人面子树叶斑病的综合防治措施提供理论依据.     

油茶上几株类拟盘多毛孢菌的鉴定

类拟盘多毛孢属真菌(Pestalotiopsis-like fungi)是油茶上重要的病原菌,能够引起病害并造成损失。从安徽省旌德县庙首林场油茶病叶中分离到6株类拟盘多毛孢属真菌,采用形态学结合3基因(ITS+TUB+TEF)分子系统学分析鉴定。结果显示,6株类拟盘多毛孢属真菌属于4个种,其中Pestalotiopsis chamaeropis为已知种,系油茶上首次报道,其余3个为系统发育种,由于缺乏足够菌株,没有进一步描述,菌株致病性也需要进一步研究。研究结果预示油茶中可能有更多的未描述的类拟盘多毛孢属的种。应对全国油茶类拟盘多毛孢属真菌的进行全面系统的调查研究,为油茶病害防治和抗病育种提供基础数据。     

木香根腐病生防细菌的筛选与鉴定

以木香根腐病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为指示菌,采用平板对峙培养法,从分离自健康木香植株根际土壤的324株细菌菌株中筛选具有拮抗作用的细菌,得到了2株拮抗效果好且具有较好稳定性的菌株at-21和at-97,抑菌率分别为66.8%和78.6%.在显微镜下观察发现,两株拮抗菌株对病原菌的菌丝生长有一定的抑制作用.经形态学观察、生理生化分析和16S rDNA碱基序列分析,鉴定菌株at-21为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis,菌株at-97为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.     

山东省保护地土壤黄瓜菌核病拮抗细菌的分离与鉴定

利用点接法从山东省9个地市的保护地黄瓜菌核病病株根际土壤中初步筛选到21株拮抗细菌,其分布率与田间发病率呈正相关,经平板对峙培养复筛出4株对黄瓜菌核病菌具有强烈抑制作用的细菌。该4个菌株均具有明显的抑菌宽带,其中菌株BSH-4对黄瓜菌核病菌的抑制率最高为91.1%,抑菌带宽度为18.5mm;4个菌株对黄瓜猝倒病菌、蔓枯病菌、枯萎病菌和立枯病菌,番茄早疫病菌、辣椒疫病病菌、茄子绵疫病菌等7种常见蔬菜土传病害的致病菌均表现出不同程度的抑制作用。根据菌株的菌体形态、培养性状、生理生化特性等指标,初步确定4菌株中1株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),1株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),2株为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。     

一株韦司梅拟盘多毛孢的鉴定及其发酵液抗乳腺癌活性

【目的】对1株分离自桃树枝的内生真菌N1进行分类鉴定与系统发育分析,探讨其深层发酵液的抗乳腺癌活性,为该菌资源的进一步开发利用提供依据。【方法】通过形态学特征和ITS rDNA序列对野生菌株N1进行分类鉴定;基于ITS1-5.8S-ITS2序列的变异程度对菌株N1遗传多样性进行分析;采用MTT法检测菌株发酵液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇提取物的抗乳腺癌活性;观察乙酸乙酯提取物不同作用时间下乳腺癌细胞的形态变化;采用LC-MS/MS对乙酸乙酯活性提取物的成分进行分析。【结果】根据菌株形态学和ITS rDNA序列特征,将该野生菌株N1鉴定为韦司梅拟盘多毛孢Pestalotiopsis vismiae;其ITS1-5.8S-ITS2序列总变异率为10.3%,表明韦司梅拟盘多毛孢在自然界中具有丰富的遗传多样性。菌株N1深层发酵液乙酸乙酯提取物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的抑制作用最强(P0.05),作用24h的半数抑制浓度(IC50)为131.39μg/mL,作用48h时,细胞呈现凋亡状态。LC-MS/MS数据表征了其中的13个化学成分,确定了6种物质,对其他未能鉴定的7个物质的分子式进行了初步表征。【结论】获得了韦司梅拟盘多毛孢遗传多样性的基础信息,其深层发酵液乙酸乙酯提取物是发挥抗乳腺癌细胞的主要活性物质。