一种新型银纳米颗粒的制备及其抑制烟草赤星病菌的机制

【目的】利用生物多糖合成银纳米颗粒,并解析其对烟草赤星病菌（Alternaria alternata）的抑制活性及机理,探索生物多糖合成银纳米颗粒的农业应用前景,为开发安全、高效的抗菌剂提供理论依据。【方法】采用海藻酸钠作为还原剂与表面活性剂在水浴锅中（65℃）一步合成银纳米颗粒（S-AgNPs）。利用透射电镜（TEM）、扫描电镜（SEM）、原子力显微镜（AFM）、紫外分光光度计（UV-vis）、Zeta电位-粒径仪和X射线光电子能谱分析（XPS）分别对S-AgNPs粒径、分散性、稳定性及化学组成进行表征分析。应用Nano Measure软件统计TEM与AFM图像中S-AgNPs的平均粒径。采用平板生长速率法探究S-AgNPs在PDA培养基中浓度为0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0 μg·mL^-1时对赤星病菌菌丝生长的影响。赤星病菌在S-AgNPs浓度为1.0 μg·mL^-1的液态PDA培养基（PDB）中培养后,分别通过测定菌丝的鲜重与干重、SEM观察、电导率测定和考马斯亮蓝G250染色,分析S-AgNPs对菌丝生长量、形态、细胞膜通透性和菌丝可溶性蛋白含量的影响。用孢子悬浮液注射接种法测试S-AgNPs在离体烟草叶片上对赤星病的防治效果。最后通过测定S-AgNPs对鲫鱼生长的影响分析海藻酸钠合成的银纳米颗粒的安全性。【结果】S-AgNPs的TEM、SEM、AFM图像分析表明该方法所合成的S-AgNPs具有分散性好,粒径统一,稳定性强等特点,平均粒径为9.83 nm。生测结果显示S-AgNPs在1.0 μg·mL^-1时对烟草赤星病菌菌丝生长抑制率为83.9%。S-AgNPs处理组的菌丝鲜重与菌丝干重明显低于清水对照组,S-AgNPs可以明显破坏菌丝表面结构。进一步抑菌机制研究表明S-AgNPs主要通过抑制赤星病菌可溶性总蛋白合成而破坏其生物膜结构,降低生物膜保水能力,快速破坏菌丝细胞膜通透性,造成大量细胞质渗漏而抑制菌丝生长发育。最终,离体试验证实S-AgNPs能够有效地抑制烟草赤星病菌侵染烟草叶片,且S-AgNPs在有效浓度（1.0 μg·mL^-1）内对鲫鱼无明显毒害作用,不影响其正常生命活动。【结论】建立的方法能够稳定合成分散性好,粒径统一,稳定性强的银纳米颗粒。该银纳米颗粒对烟草赤星病菌具有较强的抑制作用,可有效防治烟草赤星病,具有潜在的田间应用前景。     

可可链霉菌182-2活性代谢产物对烟草赤星病菌的作用

【目的】明确可可链霉菌（Streptomyces cacaoi）182-2的活性代谢产物——KA08对烟草赤星病菌（Alternaria alternata）的抑菌活性及其机理,为后续农用抗生素产品开发和应用提供科学依据。【方法】采用菌丝湿重法和培养皿中萌发法,测定KA08对烟草赤星病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用;采用电导率法和紫外吸收法测定其对细胞膜渗透性、麦角甾醇含量、脂质过氧化程度、可溶性蛋白含量的影响。【结果】KA08对烟草赤星病菌菌丝生长和孢子萌发均有强烈的抑制作用,同时,还可造成菌丝节间缩短、扭曲,芽管顶端膨大,并产生大量囊状膨大物。处理24 h时,对孢子萌发的抑菌中浓度为177.53 µg•mL-1。抑菌机理研究发现KA08能导致菌丝体内电解质泄漏,细胞膜上麦角甾醇含量显著降低,脂质过氧化产物—丙二醛含量明显升高,并显著抑制菌丝体内蛋白质含量。【结论】农抗KA08对烟草赤星病菌具有显著抑制作用,主要通过抑制菌丝细胞膜上麦角甾醇合成,引发细胞膜脂质过氧化而使病菌细胞膜受损、通透性增加,从而导致菌丝生长受阻。细胞膜是KA08的主要作用位点之一。     

1株烟草赤星病拮抗芽孢杆菌的鉴定与活性研究

【目的】筛选对烟草赤星病具有拮抗作用的芽孢杆菌并进行鉴定,同时研究其抗菌作用。【方法】从陕西、云南、湖北和河南4省烟区采集烟草根际土壤和烟叶,从中分离筛选烟草赤星病拮抗芽孢杆菌,并对拮抗性最强的1株芽孢杆菌进行形态学、生理生化特性、16S rDNA序列鉴定及粗提物抑菌作用测定。【结果】从烟草表面及根际土壤分离得到的芽孢杆菌中有10株对烟草赤星病有拮抗效果,将其中效果最好的1株芽孢杆菌定名为M-07C2F,其抑菌条带宽度达14.2 mm;通过16S rDNA测序并结合其形态和生理生化特征,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。通过显微观察发现,M-07C2F菌株使烟草赤星病病原真菌的菌丝生长出现畸形,菌丝体内部细胞原生质体分布不均匀,部分菌丝内原生质有流出形成空壳的现象。在离体条件下采用生长速率法,测得其对烟草赤星病菌丝生长有抑制作用,EC₅₀为12.82 mg/L;在活体条件下采用田间小区试验,测得当M-07C2F菌株粗提物质量浓度为80 mg/L时,其对烟草赤星病的防治效果达到86.0%。【结论】菌株M-07C2F对烟草赤星病菌的抑菌作用明显,该菌株通过抑制烟草赤星病菌菌丝生长、减少孢子萌发来抑制病菌对植株的侵染,且菌株粗提物质量浓度越高,抑菌能力越强。     

贵州省烟草赤星病菌生物学特性研究

烟草赤星病是发生较严重的一种常见烟草病害,为了模拟室外不同的气象条件下烟草赤星病的最适发生环境,对贵州省烟草赤星病菌的生物学特性进行研究。结果表明,温度为25℃、湿度达到100%、黑暗的条件最适合烟草赤星病菌生存;ZA培养基最适宜赤星菌菌丝生长,而OA培养基最适宜赤星菌产孢。赤星病菌的生长随温度、湿度的增加而增加,在到达一定数值后逐渐下降。利用SPSS软件建立了温度和湿度对烟草赤星病菌落平均直径增长量的的回归方程,分别为:y=0.015x2+0.0158x-0.04,y=-0.001x2+0.213x-4.666。     

烟草赤星病菌 ＩＳＳＲ-ＰＣＲ反应体系的优化

采用改良的CTAB法提取烟草赤星病菌丝基因组DNA,通过正交与单因素变量设计试验,对烟草赤星病菌ISSR—PCR反应体系的各个影响因素进行优化,建立了适合烟草赤星病菌ISSR分子标记的最佳反应体系,即在25μL反应体系中包含10×buffer2．5μL,模板20ng,Mg^2＋浓度2．0mmol／L,引物浓度0．8μmol／L,dNTPs浓度0．2mmol／L,TaqDNA酶0．75U。利用所建立的体系对采自云南昆明、德宏、楚雄、曲靖、玉溪等地8份材料进行检验,其结果表明优化后的体系适合烟草赤星病菌的ISSR-PCR反应。     

竹醋液与波尔多液复配剂对烟草赤星病菌的抑制效果

为提高波尔多液对烟草赤星病预防效果,选用竹醋液与波尔多液进行复配,采用生长速率法测定竹醋液+波尔多液复配剂对烟草赤星病菌的抑制作用。结果表明:复配剂对烟草赤星病菌菌丝生长的抑制效果随竹醋液体积比重的增加而增强,除含10%竹醋液复配剂外,其他含30%、50%、70%竹醋液复配剂的抑制效果均显著高于稀释倍数相同的波尔多液。     

补骨脂种子提取物对赤星病菌生长及其侵染烟草后抗氧化酶活性的影响

为探究补骨脂种子提取物对烟草赤星病菌的作用效果及其对烟草抗氧化酶活性的影响,以烟草赤星病病原菌链格孢菌 (Alternaria alternata) 和烤烟品种云烟87为试验材料,测定了不同浓度补骨脂种子提取物处理下赤星病菌菌丝生长情况,以及补骨脂种子提取物处理后接种链格孢菌的成熟期烟叶中防御酶活性变化。结果表明,12.5g/L 0.2%补骨脂种子提取物对赤星病菌菌丝生长的抑制效果最好,抑制率达到74%以上,且具有浓度效应和时效性。2.5g/L 0.2%补骨脂种子提取物能诱导提高烟草抗氧化酶活性,补骨脂种子提取物处理24h后接种链格孢菌,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性最高可比对照增加62.06%、93.91%和91.01 %。本论文发现补骨脂种子提取物既可抑制赤星病菌生长,又能提高烟株抗氧化能力和抗病性,有助于抵御病原物入侵,可为进一步研究补骨脂种子提取物提高植物抗病性的作用及其在防治烟草赤星病方面的应用提供一定的理论参考。     

广东烟叶主要真菌病害无公害化学防治药剂筛选试验

烟草黑胫病和赤星病已成为广东烟叶生产的重要真菌病害,开展其无公害化学药剂筛选和应用研究势在必行。以烟草黑胫病菌和赤星病菌为研究对象,室内毒力测定结果表明:烯酰吗啉和氟吡菌胺的对烟草黑胫病菌的毒力最高(EC50分别为0.56μg/m L和0.25μg/m L),苯酰菌胺对烟草黑胫病菌的毒力次之(EC50为1.14μg/m L);咪鲜胺对烟草赤星病菌的毒力最高(EC50为0.26μg/m L),75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂对烟草赤星病菌的毒力较高(EC50为2.66μg/m L)。田间试验结果表明:处理后15 d,推荐药剂50%烯酰吗啉可湿性粉剂1 500倍和80%苯酰菌胺可溶性粉剂2 500倍轮换施用防治烟草黑胫病的效果为87.23%;推荐药剂45%咪鲜胺水乳剂2 000倍和75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂2 500倍轮换施用对烟草赤星病的效果为82.53%;均显著高于对照药剂的防治效果。研究结果为烟叶真菌病害化学防控提供了技术指导,促进了烟叶绿色安全生产,保证了烟叶产量和品质。     

烟草赤星病的发生及综合防治

烟草赤星病是烟草成熟时期发生的一种由交链孢菌(Alternaria sp.)引起的真菌性叶斑病害,使烟叶的产量和品质大幅度下降.本文对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)的生物学特性、病害的发生条件、症状、流行规律、影响因素及防治措施等方面作了总结阐述,为有效防治赤星病提供科学依据和措施.     

8种杀菌剂对烟草赤星病菌的室内毒力测定

采用生长速率法测定了8种杀菌剂对烟草赤星病的室内毒力,结果表明：8种药剂在试验浓度下对烟草赤星病菌菌丝的生长具有不同程度的抑制作用,其中以10%苯醚甲环唑WP的效果最好,其EC50为7.45μg/mL;15%噁霉灵WP和25%咪鲜胺EC次之,EC50分别为16.26μg/mL及23.57μg/mL;80%百菌清WP效果最差,其EC50为111.71μg/mL。     

烟草赤星病菌拮抗菌发酵液的防病作用

以拮抗烟草赤星病菌的两株放线菌SZF2和SZF7为材料,对其发酵液防赤星病菌的效果及机理进行了初步研究.结果表明,SZF2和SZF7的无菌发酵液能抑制烟草赤星病原菌孢子萌发,同时还能激发烟草产生过量过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO),从而提高烟草对赤星病菌的抗性.离体和盆栽试验结果表明,SZF2和SZF7的发酵液可明显降低烟草赤星病的病情指数,其盆栽试验相对防效分别为48.94%和50.13%.     

8种杀菌剂对烟草赤星病菌的室内毒力测定

采用生长速率法测定了8种杀菌剂对烟草赤星病的室内毒力,结果表明:8种药剂在试验浓度下对烟草赤星病菌菌丝的生长具有不同程度的抑制作用,其中以10%苯醚甲环唑WP的效果最好,其EC50为7.45 μg/mL;15%嗯霉灵WP和25%咪鲜胺EC次之,EC50分别为16.26 μg/mL及23.57μg/mL;80%百菌清WP效果最差,其EC50为111.71μg/mL.     

1,3-二取代-2-氧代-3-吲哚乙腈的合成及抑菌活性研究

【目的】寻找具有高抑菌活性的新型化合物。【方法】以3-吲哚乙腈为原料,经过1-位烷基化、2-位氧化和3-位烷基化反应,合成1,3-二取代-2-氧代-3-吲哚乙腈类衍生物,对合成的化合物进行核磁共振谱(1 H NMR、13 C NMR)和低分辨质谱(LC-ESI-MS)分析,并分别测定合成衍生物对5种供试病原真菌(小麦赤霉病菌、茄子黄萎病菌、烟草赤星病菌、番茄灰霉病菌、苹果炭疽病菌)的抑菌活性。【结果】经1 H NMR、13 C NMR和LC-ESI-MS分析确认,成功合成了6个1,3-二取代-2-氧代-3-吲哚乙腈类衍生物(3a~3f)。抑菌活性试验结果表明,6个目标化合物对5种供试病原真菌均有一定的抑菌活性;结构与活性相关分析说明,此类化合物骨架中芳香苄基对抑菌活性的贡献优于脂肪烃基异戊烯基,且芳香苄基中氟原子对化合物的抑菌活性有一定的促进作用,其中1-位和3-位同为对氟苄基的化合物3f(1,3-二对氟苄基-2-氧代-3-吲哚乙腈),对番茄灰霉病菌和烟草赤星病菌均具有较高的抑菌活性,有效中浓(EC50)分别为28.06和31.36μg/mL。【结论】本研究的合成方法简单、高效,合成的化合物3e和3f对5种供试病原真菌的抑菌活性均高于其他化合物,具有进一步研究和开发的价值。     

甜罗勒根际细菌的筛选鉴定及其对烟草赤星病菌的抑制作用

从甜罗勒(Ocimum basilicum)根际分离得到的28株细菌菌株,通过平板对峙试验筛选出对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)抑制作用最强的菌株LL-16,其平均抑菌带宽度为7.77 mm。对LL-16菌株进行生理生化鉴定和16S r DNA序列分析,表明其与Bacillus subtilis(JQ978219)聚类成为一支,支持强度达到71%,同源性为98.9%,鉴定其属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。采用菌落直径法和凹玻片法测定不同浓度的菌液、无菌滤液和灭活滤液对烟草赤星病菌的菌丝生长和孢子萌发的影响。结果表明,一定浓度范围内,菌液、无菌滤液和灭活滤液均能抑制赤星病菌丝生长和孢子芽管伸长,形成泡状芽管,致使病菌丧失侵染能力。同一种处理随着其浓度的降低对赤星病菌的抑制作用减弱。相同浓度的3种处理抑制作用从强到弱依次为菌液、无菌滤液、灭活滤液。     

两种植物源农药对烟草赤星病的药效试验

对植物源农药16%赤菌宁和14%斑菌净对于真菌病害烟草赤星痛的抑菌机制及田间防治效果进行了探讨.结果表明,16%赤菌宁稀释200倍和300倍以及14%斑菌净稀释200倍对烟草赤星病病菌孢子的形成和菌丝的生长均有明显的抑制作用.两者在30℃处理后,pH值6～8范围内有较好的抑菌效果.田间防效试验表明,16%赤菌宁稀释20...     

感染赤星病后不同烟草品种叶片防御酶的变化

研究了云烟87,K326,Beinhart1000-1 3个烟草品种被赤星病菌侵染后烟草叶片相关防御酶的变化,包括氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、β-1,3葡聚糖酶(GLU)、几丁质酶(CHT),以期通过防御相关酶活性变化规律与赤星病侵染过程、品种抗病性的关系,揭示不同烟草品种对赤星病的抗病机制.结果表明,在受赤星病菌侵染后,抗病品种Beinhart1000-1在接种赤星病菌后,SOD,POD,PAL活性迅速升高并高于对照,但CAT活性在Beinhart1000-1中基本低于对照,GLU活性变化明显大于感病品种.赤星病菌侵染烟草后,烟草体内的防御酶发生变化,这些防御酶活性变化可作为烟草对赤星病抗性鉴定的生理指标.     

一类化合物的合成及其抑菌活性

【目的】合成高活性的(E)-2-甲氧亚胺基-2-[2-(2-氧代喹啉-4-氧甲基)苯基]乙酸甲酯类化合物,为以后优化和设计新化合物提供理论依据。【方法】以(E)-2-甲氧亚胺基-2-[2′-(溴甲基)苯基]乙酸甲酯和4-羟基喹啉-2-酮类化合物为原料,通过醚化反应,合成了10a~10k等11种(E)-2-甲氧亚胺基-2-[2-(2-氧代喹啉-4-氧甲基)苯基]乙酸甲酯类化合物,对其进行ESI-MS、IR谱及1 H NMR谱分析。以嘧菌酯为对照,采用生长速率法测定化合物10a~10k对烟草赤星病菌、棉花枯萎病菌、水稻瘟疫病菌、玉米弯孢病菌、番茄早疫病菌、苹果腐烂病菌的抑菌活性。【结果】合成了11个(E)-2-甲氧亚胺基-2-[2-(2-氧代喹啉-4-氧甲基)苯基]乙酸甲酯类化合物,确认了其结构。除10a和10d外,其他9个化合物在质量浓度为50mg/L时对6种供试植物病原菌均具有一定的抑菌活性;化合物10a对烟草赤星病菌的抑制率达91.5%,10c对水稻瘟疫病菌的抑制率达93.3%。【结论】合成了11个(E)-2-甲氧亚胺基-2-[2-(2-氧代喹啉-4-氧甲基)苯基]乙酸甲酯类化合物,除个别化合物外均对6种供试病原菌具有较好的抑菌活性。     

烟草赤星病病原菌生物学特性及致病性研究

采集具有典型烟草赤星病症状的烟株分离纯化得到烟草赤星病菌,并对烟草赤星病菌进行生物学特性及致病性研究。结果表明,该菌生长温度为10～35℃,最适生长温度为25℃;分生孢子和菌丝致死温度分别为50、49℃;光照12 h/d有利于菌丝生长和孢子产生;孢子悬浮液棉球接种和菌丝块接种均有利于云烟87成株期发病,所致病斑平均直径分别为5.73、5.23 mm,平均病叶率分别为67.23%和78.33%。     

烟草赤星病菌拮抗微生物的筛选及其对病原的抑制作用

从烟草赤星病斑上分离得到14株拮抗赤星病菌的微生物，对峙培养发现其中6株对赤星病主要病原Alternaria alternata具不同致病力的6个菌株均具拮抗作用。室内离体叶片悬滴法测定发现其中的AM1、AM2、AM6三株拮抗微生物100倍带菌培养液对赤星病的防效均达100％。平皿测定发现AM6 100倍带菌培养液对强致病力病菌的抑制作用为100％，其灭菌滤液的抑制效果为81.8%。其抑菌机理主要是产生拮抗物质，显微镜观察表明AM6能使病菌孢子和菌丝畸变，细胞壁破裂，原生质泄露。     

芦竹内生真菌F0238对烟草赤星病的防治作用

从黄海岸芦竹(Arundo donax)中分离得到一株木霉属的内生真菌F0238，在皿内及盆栽苗上对该菌防治烟草赤星病(Alternarina alternate)的作用进行了试验研究。皿内的对峙培养结果表明，F0238对烟草赤星病菌有较强的营养竞争作用；盆栽试验表明，F0238在10^10个／ml孢子浓度下对烟草赤星病的预防能力达90％以上，10^8-10^9个／ml孢子浓度下对烟草赤星病的治疗效果达50％以上，表明该菌具有潜在的防治烟草赤星病的能力。