樟子松无性系(GS1)胚性愈伤组织的初步诱导

本研究以樟子松无性系(GS1)为研究对象,探讨合子胚不同发育时期愈伤组织的诱导情况,探索不同培养基类型及不同激素配比对其愈伤组织诱导的影响,初步建立体胚发生技术体系,为樟子松(GS1)体胚发生技术建立和获得植株再生提供一定基础。本研究对樟子松无性系(GS1)合子胚不同发育时期进行观察并进行不同时期、不同激素体胚诱导。樟子松无性系(GS1)合子胚形态变化可划分为9个阶段,将这9个阶段的合子胚分别接种到不同培养基上进行诱导。结果显示,DCR培养基比MS和LM培养基更适合GS1愈伤组织的诱导和生长。第7阶段的合子胚在DCR+2,4-D 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L培养基上愈伤组织诱导率最高,在DCR+2,4-D 3.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L培养基上胚性愈伤组织诱导率最高。诱导过程会产生两种类型的愈伤组织,分别为白色透明状的愈伤组织和淡黄褐色愈伤组织。经显微观察有两种结构愈伤组织,一种是近球形的薄壁细胞结构,为非胚性愈伤组织;另一类是由胚性细胞和胚柄细胞组成的胚性细胞团。樟子松无性系(GS1)合子胚第7阶段的合...     

唐菖蒲体细胞胚的诱导及植株再生

以唐菖蒲球茎芽切片为外植体,经体细胞胚发生途径,进行胚性愈伤组织诱导、胚状体的诱导、胚状体发育过程及植株再生的研究。胚状体诱导培养基为MS＋2,4-D1.0mg/L＋TDZ0.2mg/L,诱导率为68.3%;将产生的胚状体首先接种于MS培养基使其充分发育,之后转入MS＋6-BA2.0mg/L培养基中诱导发芽,在转入MS培养基中使其形成完整植株。采用石蜡切片法和临时压片法对胚状体的发育过程进行了观察发现,首先外植体表层薄壁细胞经脱分化恢复分生能力,形成愈伤组织,随后在愈伤组织表面形成许多瘤状突起即胚性细胞团,胚性细胞团继续发育成球形胚、盾形胚,最后发育成熟形成完整植株。     

不同品系橡胶树花药愈伤诱导和体胚发生研究

为建立橡胶树不同品系的体胚发生和植株再生体系,为不同品系橡胶树良种生产奠定基础。以橡胶树优良品系‘热研106’、‘热试59’、‘热试62’的花药为材料,采用正交设计,对不同品系、不同植物生长调节剂配比培养基的花药愈伤和体胚诱导效果进行了研究。[结果]结果表明：3个品系的愈伤诱导率和体胚诱导效率差异明显,同一品系不同培养基的愈伤诱导率和体胚诱导效率差异明显;愈伤诱导培养基中的植物生长调节剂对下一阶段的体胚诱导有明显影响。根据本研究,‘热研106’的花药愈伤诱导最佳浓度组合为2,4-D 1 mg/L+NAA 2 mg/L+KT 1 mg/L,‘热试59’的花药愈伤组织诱导最佳浓度组合为2,4-D 0.5mg/L+NAA 1 mg/L+KT 1 mg/L,‘热试62’的花药愈伤组织诱导最佳浓度组合为2,4-D 1 mg/L+NAA 1 mg/L+KT 1 mg/L。‘热试62’的体胚发生最佳浓度组合为KT 3 mg/L+NAA 0.05 mg/L+GA3 0.05 mg/L+6-BA 0.5 mg/L。[结论]本研究获得了不同品系的愈伤诱导和体胚发生最佳培养基组合,为多品系橡胶树花药植株再生体系的建立奠定了基础。     

连香树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生

本试验以连香树授粉120 d后未成熟种子子叶胚为外植体,开展胚性愈伤诱导增殖和悬浮培养体系的研究,初步建立了连香树胚性细胞悬浮系与植株再生体系。将连香树未成熟子叶胚接种在添加0.5 mg/L6-BA+1.0 mg/L NAA+1.0 g/L AC的1/2 MS基本培养基上,进行胚性愈伤组织诱导,获得的愈伤组织在0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 g/L AC的1/2 MS固体培养基上进一步增殖培养。将得到的胚性愈伤组织置于添加5%聚乙二醇6000的1/2 MS的悬浮培养液中进行振荡培养,建立起细胞均一、增殖较快、稳定性较强的细胞悬浮系;将悬浮培养获得的胚性材料接种到添加5%香蕉汁的0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 g/L AC的MS固体培养基中进行培养,可分化出的子叶期体胚,将获得的子叶胚转接到添加1.0 mg/L IBA的WPM固体培养基中,体胚萌发再生成植株。     

蒙古黄芪与膜荚黄芪愈伤组织诱导及再生植株体系的建立

本研究以蒙古黄芪和膜荚黄芪无菌苗的茎段、下胚轴、子叶、叶片为外植体,通过调整生长调控激素(6-BA与NAA)的浓度,筛选出愈伤组织诱导的最适外植体和植株再生的最佳培养基,建立了黄芪再生植株体系。结果表明蒙古黄芪愈伤组织诱导最佳外植体是下胚轴,愈伤组织诱导率是100%,愈伤组织与再生植株的最佳培养基是MS+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA,再生植株分化率为92%;膜荚黄芪愈伤组织诱导最佳外植体是茎段,愈伤组织诱导率是97%,愈伤组织与再生植株的最佳培养基是MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,再生植株分化率为96%。两种黄芪的愈伤组织经过6周时间均可诱导出幼苗,再生苗生长两周可以移栽。本研究所建立的黄芪再生植株体系可为优良黄芪种质资源保存、种苗快速繁育及开发利用提供参考。     

鞑靼忍冬再生体系的建立

以鞑靼忍冬的成熟种胚作为外植体,建立再生植株体系,结果表明:成熟种胚采用2%的NaClO溶液处理时,最佳消毒处理时间为6 min,存活率为75%。诱导愈伤组织以及诱导不定芽的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,愈伤组织诱导率为74.85%;不定芽诱导率为69.35%。增殖的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,增殖率为76.58%。诱导生根最佳培养基为1/2 MS+0.5 mg/L IBA,生根率为76.45%,平均根长为4.25 cm。通过组织培养再生植株,对其快速繁殖、种质资源保存和改良及规模化生产利用以及工厂化育苗技术研究提供理论基础。     

总状绿绒蒿组织培养再生体系的建立

本研究以总状绿绒蒿(Meconopsis racemosa)的种子、无菌苗的根及生长点为材料,以2,4-D、NAA、6-BA设置不同的激素配比,以建立其组织培养快繁体系。结果显示,用0.1%升汞溶液为消毒剂,5.5 min为最佳的消毒时间,此时的种子发芽率为56.7%;愈伤组织诱导培养：以种子为外植体诱导愈伤,MS+0.6 mg/L 2,4-D为最佳的培养基。以无菌苗的根为外植体诱导愈伤,进行暗培养,MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA为最佳的诱导培养基。以无菌苗的生长点为外植体诱导愈伤,并进行光培养,MS+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA为最佳的诱导培养基;愈伤增殖培养：由种子诱导愈伤的最佳增殖培养基为MS+0.6 mg/L 2,4-D。MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA是无菌苗的根诱导愈伤的最佳增殖培养基。MS和MS+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA为生长点诱导愈伤的最佳增殖培养基;生根培养：由种子、生长点诱导并增殖愈伤的最佳生根培养基为MS。本研究为总状绿绒蒿的快速繁殖和分子育种提供了基...     

蜈蚣珊瑚愈伤诱导及其分化正交试验设计

本研究以蜈蚣珊瑚茎段为外植体,采用正交试验设计,进行愈伤组织诱导及分化研究,并建立植株再生体系。研究表明:愈伤组织诱导的最佳外植体为带叶茎段,最佳灭菌时间为0.1%的升汞6 min;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA;不定芽增殖最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/LNAA,最佳继代次数为4次;愈伤组织不定芽诱导最佳碳源为蔗糖;生根培养最佳培养基为1/2 MS+0.4 mg/L IBA。本研究通过对蜈蚣珊瑚进行离体培养,初步获得组织培养各阶段最佳培养基配方,从而实现蜈蚣珊瑚离体快繁的目的,为蜈蚣珊瑚工厂化育苗提供理论基础及技术指导。     

藜麦组织培养快速繁殖体系建立研究

为了探讨不同培养基、不同激素组合对藜麦茎段愈伤组织的诱导及分化形成再生植株的影响,以台湾红藜(Chenopodium quinoa Wild.)的茎段为外植体进行诱导、分化增殖、生根、炼苗移栽等研究,建立了藜麦植株再生体系。结果表明:MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L为愈伤组织诱导的最佳培养基,诱导率为84.33%,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.6mg/L+2-IP 2mg/L培养基中,愈伤组织分化率最高。     

‘杂花’薰衣草再生体系的建立

为了获得高效稳定的薰衣草再生体系,本研究以‘杂花’薰衣草叶片为试材,研究了不同激素及浓度对愈伤组织诱导、不定芽分化及不定根形成的影响。结果表明：6-BA与NAA及6-BA与2,4-D组合均能诱导愈伤组织形成,最佳培养基配方分别为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L和MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,出愈率分别为95.2%、92%;6-BA与NAA组合诱导不定芽的效果显著优于6-BA与2,4-D的组合,适合诱导再生芽分化的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,分化率为68.1%;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,生根率为91.1%。本研究建立了‘杂花’薰衣草的再生体系,为利用转基因技术培育高产优质的薰衣草新品种提供技术支持。     

重庆野生百合花蕾诱导再生植株技术研究

为了重庆野生百合资源的有效保护和开发利用,以重庆地区野生百合花蕾为试验材料,采用植物组织诱导培养的方法对其再生植株技术进行了研究。结果表明：以即将开放的百合花蕾为外植体材料,消毒容易,无污染;通过对花蕾各器官（花冠、花托、花丝、花药、花柱、柱头、花梗）的诱导培养,表明试验所选的1号培养基MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L能诱导花冠、花托、花丝出芽,2号培养基MS+ 6- BA 0.5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L仅能诱导花冠出芽;幼芽增殖以MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L的增殖系数最高,为3.2,增殖幼苗生长健壮;生根培养以14号培养基(MS+ NAA 0.4 mg/L)诱导百合生根最佳,生根率为100%;移栽结果以18号培养基(MS+ IBA 0.5 mg/L)的生根培养苗成活率较高,达到了85%。     

宁夏枣树花药离体培养再生体系的建立

采用宁夏3个特色枣树品种的花药为外植体,探索MS培养基中不同激素、激素的不同浓度配比对愈伤组织诱导、不定芽分化的影响,建立其愈伤组织诱导及不定芽再生体系。结果表明,细胞分裂素6-BA对宁夏枣树胚性愈伤组织诱导起重要作用,AgNO3对愈伤组织分化不定芽影响显著。经过正交试验分析得出,最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+IBA 0.4 mg/L;最佳分化培养基是：MS+6-BA 1.5 mg/L +IBA 0.6 mg/L +AgNO3 0.5 mg/L。在最佳诱导培养基中灵武长枣诱导率最高,达89.0%,在最佳分化培养基中同心圆枣分化率最高,达88.0%。     

野生软枣猕猴桃组织培养及褐变处理

以野生软枣猕猴桃嫩芽、幼嫩叶片以及茎段作为外植体,研究野生软枣猕猴桃组织培养整个过程,以建立快速高效的野生软枣猕猴桃再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片、茎段愈伤组织的培养基分别为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA和MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;诱导出愈伤组织在MS+0.6 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培养基上能很好地分化不定芽苗;诱导幼芽产生丛生芽的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;较适宜的生根培养基为1/2MS。愈伤组织继代中发现细胞生长素NAA可以防止愈伤褐化。在愈伤组织分化中,发现将分化出的芽苗再次愈伤化,可以提高分化率。     

油菜不同类型外植体组织培养及再生研究

为建立高效的组织培养体系，以甘蓝型油菜杂交品种恢复系627R、621R和616R材料田间种植植株的侧芽、花托和无菌种子实生苗下胚轴为外植体，探索不同苗龄、预培养时间、预培养基、愈伤分化培养基、诱导出芽培养基以及成苗壮苗培养基中激素配比对芽再生、成苗植株生长势的影响。结果表明：无菌苗快速繁殖体系中，发芽6 天的无菌苗下胚轴或者子叶在预培养（MS+ 2.0 mg/L 2,4-D+ 1.0 mg/L 6-BA+ 30 g/L 蔗糖+ 8 g/L 琼脂，pH 5.85）3 天后转移到分化培养基MS+ 3 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂(pH 5.85)，或者MS+ 3 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L IAA+ 5 mg/LAgNO3+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂(pH 5.85)生长，可以获得较高的芽再生频率，对于田间生长到抽薹开花期植株取样的外植体，腋芽的出芽频率高于花托培养的出芽频率，但是这2 类外植体在分化培养基（MS+ 10 mg/L 6-BA+ 1 mg/L NAA+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂，pH 5.85）生长30 天后都有成苗的潜力，上 述外植体经过组织培养出芽后转移到添加矮壮素的培养基（MS+15 mg/L CCC+15~20 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂，pH 5.85）上继续生长30 天，能够得到根系发达、生长势强的植株。甘蓝型油菜优良恢复系建立的组织培养体系能够快速获得生长势优的油菜植株，加速油菜良种的繁殖与评价。     

务川几种野生百合的组织培养

采用正交试验的方法,在MS固体培养基上研究不同浓度蔗糖、6-BA及NAA对淡黄花百合、文山百合及野百合等3种务川野生百合芽增殖的影响,结果表明:淡黄花百合芽增殖的最佳培养基应为:MS +0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA+4％蔗糖,文山百合的最佳培养基应为:MS +0.5～1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA +3％蔗糖;野百合芽增殖的最佳培养基应为:MS+ 0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+(2％ ～3％)蔗糖.     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。     

天蓝苜蓿花药愈伤组织诱导及再生体系的建立

为获得天蓝苜蓿单倍体再生植株,本研究以野生天蓝苜蓿花药为外植体,采用正交设计L₁₆(4⁴)筛选适宜天蓝苜蓿愈伤组织诱导培养基,比较不同基本培养基及生长调节剂组合筛选适宜的分化培养基,并用1/3MS、1/2MS和MS添加不同浓度的NAA研究不定生根。结果表明:天蓝苜蓿现蕾15~25 d的花药其愈伤组织诱导效果最好,高达60.5%。4℃低温预处理2~4 d有利于愈伤组织诱导,诱导率达77.2%。适宜花药愈伤组织诱导的培养基为NB+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,诱导率达78.5%。比较不同基本培养及生长调节剂的不同组合发现,NB培养基愈伤组织分化效果优于B₅和MS,NB+NAA0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L适宜愈伤组织的分化,分化率为66.3%。不定芽在1/3MS+NAA 0.5 mg/L中培养,生根率最高,为86.55%。本研究建立了天蓝苜蓿花药培养再生体系,获得了单倍体植株,为天蓝苜蓿的育种实践及基因组学研究提供基础材料。     

基因型和激素对转基因马铃薯植株再生的影响

本研究对影响农杆菌介导的马铃薯转基因植株再生的基因型和激素两个因素进行了探讨。试验结果表明,基因型对愈伤诱导率和芽诱导率均有很大影响,不同品种的愈伤诱导率为72.22%~95.83%,最高的是"Russet Burbank";芽分化率为0~11.54%,最高的是"费乌瑞它"。不同6-BA和NAA浓度对加拿大品种"Russet Burbank"的愈伤诱导和不定芽分化有明显影响,6-BA在2.5 mg/L和NAA 0.2~0.3 mg/L的处理愈伤诱导率最高,每块芽数以2.5 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA最高。NAA浓度影响叶盘的愈伤诱导率且有一定的后效作用。     

小盐芥下胚轴再生体系的建立

以小盐芥下胚轴为外植体,研究了不同激素与不同浓度组合对愈伤诱导和不定芽分化的影响。结果表明,MS 6-BA 2,4-D组合能诱导出愈伤,诱导率为100%。MS 6-BA NAA组合既能诱导出愈伤又能分化不定芽,愈伤诱导率为100%,激素不同浓度不定芽分化率不同,最佳分化培养基为MS 2.5mg/L 6-BA 0.1mg/L NAA,不定芽分化率为43%。生根培养基为1/2MS,生根率为74%。     

色素万寿菊杂交母本未授粉子房培养

以色素万寿菊雄性不育株未授粉子房为外植体,比较研究子房发育期、高低温处理和生长调节剂组合对愈伤组织诱导和分化的影响。结果显示:发育6~10 d,花丝刚好露出花萼,顶部呈圆柱状的花蕾愈伤组织诱导效果最好,为79.2%;低温预处理3 d,高温培养5 d有利于愈伤组织诱导;MS+2,4-D 0.5 mg/L+NAA0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L为愈伤组织诱导最佳培养基,诱导率高达85.8%;NAA 1.0 mg/L+6-BA3.0 mg/L为不定芽分化适宜培养基,分化率达77.6%;1/2MS+NAA 0.2 mg/L为生根适宜培养基,生根率93.5%。本研究可为建立高效单倍体培养体系以及单倍体育种技术提供基础性资料。