亲和素—生物素—酶复合物(ABC)法在免疫诊断学中的应用

亲和素—生物素—酶复合物(Avidin—Biotin—Enzyme Complex,ABC)法是Hsu等于1981年在生物素—亲和素架桥法(BRAB)和标记亲和素法(LAB)的基础上进行改良、建立起来的。这种方法是预先按一定比例将生物素化酶和亲和素共温后形成ABC复合物,再使ABC复合物与生物素化抗体反应。该法不仅减少了反应步骤。而且由于ABC的网格可以网罗相当数量的酶分子,从而使生物素—亲和素系统(BAS)的敏感度大为提高。用该法对多肽类激素进行了酶标测定,发现抗体滴度可提高20～40倍,并通     

生物素检测桑蚕浓核病毒(DNV)简报

生物素—亲和素系统(Biotin—AvidinSystem,BAS)是近几年发展起来的一种新型生物反应放大系统,具有很高的灵敏度、特异性和稳定性,被广泛应用于免疫化学、生物工程等领域。我们采用生物素标记IgG抗体,用亲和素—生物素—辣根氧化酶复合物(ABC)与抗体结合后染色的方法检测桑蚕浓核病毒(DNV),获得了良好的效果。用本法检测家蚕DNV抗原国内外尚未见报道,现将结果简报如下:     

亲和素——生物素系统在免疫学上的应用

从七十年代末起,亲和素—生物素系统(Avidin—Biotin system)开始出现在免疫学领域中。由于亲和素—生物素间亲和力大,特异性强,敏感性高,可分别结合各种类型大小分子,因此,它在免疫学中的应用很有发展前途。     

应用生物素-亲和素系统检测感染兔弓形虫抗体的实验研究

鉴于弓形虫病感染的多样化,病原诊断又较困难,血清学检测逐渐成为常规辅助诊断方法之一.七十年代末国内外相继建立了检测血清中抗弓形虫抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA).近年来,生物素-亲和素系统(BAS)已用于多种抗原抗体系统但未见检测弓形虫抗体的报道.本文应用亲和素和生物素标记的过氧化物酶复合物(ABC)为标记物的ABC-ELISA方法检测感染兔弓形虫抗体的实验研究并与常规ELISA法进行对比观察,现将初步试验结果报告如后.     

亲和素-生物素系统-酶联免疫吸附试验(ABS-ELISA)在兽医免疫诊断学中的应用

<正> 七十年代中期,亲和素(Avidin)与生物素(B-iotin)之间的强亲和作用及多价反应性,引起了免疫学工作者的极大兴趣,经研究进行亲和素与生物素既可偶联抗体等一系列大分子生物活性物质,又可被酶等多种材料所标记,据此发展成为一种新颖的生物反应放大系统,即亲和素-生物素系统(Avidin-BiotinSystem,ABS)。该系统最初被用于免疫组织化学,进行组织和细胞内特异性抗原的检测、定位及半定量研究。1979年,Guesdon等又将ABS首次引入了固相酶免疫吸附试验。ABS-ELISA是亲和素-生物素系统与ELISA技术相结合所建立的一种新的     

生物素亲和素系统标记技术在动物传染病诊断上的应用现状

生物素亲和素系统是七十年代末应用到免疫学领域中,八十年代初应用到分子生物学领域中的一种生物反应放大系统。由于生物素亲和素系统改良的免疫诊断方法和生物素化的核酸探针具有敏感性高、特异性强、稳定性好没有放射性污染和应用面宽等特性而日益受到医学、兽医学及其它生物学界的广泛重视。近年来,动物传染病诊断方面也有应用生物素亲和素系统改良的各类方法的报道。本文根据作者自己的工作以及收集的部分材料对生物素的理化性质及其衍生物的制备、亲和素蛋白的理化和生物学特性以及生物素亲和素系统放大原理和该系统改良的一些基本检测方法作一简要的概述。此外,还着重介绍一下生物素亲和素系统改良的方法在动物传染病诊断上应用的现状。     

ABC-ELISA检测桑蚕浓核病毒(DNV)简报

生物素——亲和素系统(Biotin-AvidinSystetem.BAS)最近几年发展起来的一种新型生物反应放大系统,具有很高的灵敏度、特异性和稳定性,在免疫化学等领域得到广泛应用。BAS与酶联免疫吸附试验(ELISA)相结合的ABC-ELISA法可提高普通ELISA的敏感性,能同放射免疫     

应用生物素——亲和素系统检测弓形虫感染家兔的特异性循环免疫复合物实验研究

循环免疫复合物(CIC)的检测对某些疾病的诊断和临床监护提供了新的可能。CIC的检测方法虽很多,但大多属于抗原非特异性方法,对CIC的抗原可以识别鉴定的方法尚少。我们应用生物素—亲和素系统的ABC法以抗弓形虫单克隆抗体(McAb)检测人工感染弓形虫家兔血清的CIC(ABC-ELISA),同时与McAb ELISA(常规)及非特异性PEG沉淀试验为对照进行比较试验,探讨ABC-ELISA检测弓形虫特异性     

ABC—酶联免疫吸附法检测家蚕浓核病毒的研究

利用生物素—亲和素生物放大系统的原理,并结合酶联免疫吸附试验(ELISA),建立了新的检测家蚕浓核病毒(DNV)抗原的方法。     

囊虫病免疫诊断检测方法的研究进展

由于科学技术的发展,囊虫病免疫诊断检测方法有了很大的进展,主要有1.免疫学检测方法,包括酶联免疫吸附法(ELISA)、斑点酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)、生物素-亲和素酶联免疫吸附法(BAS-ELISA)、单克隆抗体酶联免疫吸附试验(McAb-ELISA)、酶联免疫印渍技术(ELIB);2.基因检测技术,包括DIG标记DNA探针、细胞因子基因检测方法、基因重组技术;3.免疫试剂盒的应用,包括循环抗原酶联免疫试剂盒、猪囊虫短程抗体IgG4快速ELISA检测试剂盒等。     

用生物素-亲和素强化免疫斑点试验检测口蹄疫病毒的研究

传统酶联免疫吸附试验一般用辣根过氧化物酶(HRP)标记IgG进行检测。HRP的稳定性虽好,但敏感性稍差。为了克服这一不足,引入碱性磷酸酶(AP)检测系统,进行免疫强化斑点试验检测口蹄疫病毒的研究。用光敏生物素标记纯化的A蛋白(SPA)代替第二抗体,通过AP标记的亲和素(Avidin-AP)检测生物素化抗体,最后加入底物BCIP和NBT显色判定。该法操作简单、检测时间短,并具有良好的特异性和重复性。由于引入生物素系统和AP,检测的灵敏度比曾通ELISA高。     

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立

将RT—PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合，先建立猪瘟病毒（classicalswinefevervirus，CSFV）的RT—PCR方法，用地高辛标记RT—PCR产物；再建立CSFV的PCR—ELISA方法，用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记的PCR产物，最后进行免疫显色得出结果。试验主要对RT—PCRELISA的各种反应条件进行了优化，确定了1mg／L的链亲和素、50μg／L生物素标记的探针、1：3000抗地高辛的过氧化物酶、37C杂交2h等为最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测高100倍以上，克服了组织样品中CSFV含量少而难以检测的困难，为猪瘟的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。     

ABC-ELISA检测小鹅瘟的研究

生物素一亲和素系统(Biotin-Aritin system)在免疫学检测的特异性和敏感性已被公认和广为应用。本文应用ABC—ELISA法检测人工感染的雏鹅,并以ELISA法和常规琼脂扩散(AGP)法进行平行检测实验提示,三     

生物素-亲和素系统及其在免疫学中的应用

生物素-亲和素系统(Biotin-avidin system,BAS)在免疫学中的研究和应用引起了免疫学工作者浓厚的兴趣。早些时候,人们发现亲和素对生物素有惊人的亲和力,并能偶联抗体等一系列大分子生物活性物质,又可被酶、荧光素等材料所标记,成为一种通用性强、灵敏度高、特异性好、高度稳定、方便、经济的免疫检测手段和分离纯     

免疫PCR检测微量H5亚型禽流感病毒

为了有效检测低浓度禽流感病毒,笔者通过将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立了一种快速检测痕量H5亚型禽流感病毒的间接免疫PCR方法和间接“三明治”抗体夹心免疫PCR方法.以TopYield 96孔板为固相免疫吸附载体,以禽流感病毒H5蛋白为检测对象,通过一系列免疫反应及亲和素-生物素桥联作用,将生物素标记的报告DNA分子和生物素标记的禽流感病毒H5亚型抗体分子连接.充分洗涤后,在TopYield板孔中添加PCR反应液,对板壁偶联的报告DNA进行PCR扩增,间接达到检测微量禽流感病毒H5蛋白的目标.通过优化报告DNA分子和链亲和素的浓度,2种免疫PCR技术都可检测到约1 fg的禽流感病毒H5蛋白,与常规ELISA方法相比,灵敏性提高了近1 000倍.     

乳牛肾淀粉样变病超微结构和免疫组织化学的研究

对临床尸检一例乳牛肾淀粉样变病进行了组织与超微病理学和免疫组织化学的研究。结果提示其淀粉样蛋白为无分枝、平行或非平行排列的微丝,主要沉积在肾小球和小血管周围。在肾小球,系膜区沉积最为严重,其次为肾小球毛细血管基膜。生物素-亲和素免疫过氧化物酶(ABC)染色结果显示,抗淀粉样蛋白A(AA)反应阳性颗粒沉积于肾小球和肾的小血管壁上,其抗AA阳性反应提示本病为继发性淀粉样肾病。     

生物素-亲和素标记技术

生物素-亲和素系统(BAS)是一种具有高亲和力、灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点的信号放大标记技术,研究证明生物素与亲和素依靠接触表面均一的多层膜来维系其稳定的结合。随着不断的探索和研究,该技术现已发展出多种标记方法,例如桥-亲和素-生物素标记法、亲和素-生物素-过氧化物酶法、标记生物素-抗生物素法,由于该标记技术具有优秀的性质,因此很快渗透到多个学科,在细胞和抗原的定位和检测中体现出极其重要的作用。目前,BAS已广泛应用于免疫学、分子生物学和组织化学等领域,并取得较好的效果。文章对该技术的特点、方法和应用做了简述。     

圈形盘尾丝虫成虫抗原致敏家鸡红细胞的微量血凝试验

丝虫病的诊断,一般采用寄生虫检查法,为了找出更简便、准确、检出率高的诊断方法,我们在免疫诊断中探索了间接免疫过氧化物酶反应(IIP)和病理组织虫体沉淀反应试验(叶立云等1985),根据有的作者用间接血凝试验探索人体丝虫病的诊断方面的     

从噬菌体随机十二肽库中筛选新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶模拟表位

以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位.经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE 11、17、18、20.竞争ELISA试验表明,CLONE 20与M22的结合能被新城疫弱毒株La Sota特异性抑制,抑制率达67.3%.经测序,获得CLONE 20的插入序列为SWFHHHQARAPM,同源性分析认为WF和QAR在HN的抗原性中起重要作用.动物试验结果表明,CLONE 20能诱导SPF鸡产生一定水平的具有血凝抑制活性的特异抗体.以上结果显示SWFHHHQARAPM是具有免疫原性的HN抗原模拟表位.     

免疫学检测新技术——生物素—亲和素系统在免疫检测中的应用

随着医学和生物学的不断发展,对免疫学检测技术要求越来越高——敏感、快速、准确、简便等。继免疫酶法、荧光免疫测定法、放射免疫测定法(RIA)后,由 Guesdon(1979年)创建的生物素——亲和素系统(BAS)在免疫检测中的应用具有上述特点,且比常规酶联免疫吸附试验(ELISA)敏感20～80倍(Kendall,1983),可达到0.1ng/ml的水平,相当于甚或高于 RIA 测定法(Sutton,1985),已显示其巨大的应用潜力,引起