奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药分析

为了解本地区规模化奶牛场奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的流行与耐药情况，本研究采集了300份奶牛乳房炎奶样，进行金黄色葡萄球菌的分离、培养，利用荧光PCR方法鉴定，同时对分离出的阳性菌株采用纸片扩散法进行耐药性分析。结果表明：从奶牛乳房炎样品中分离出42株金黄色葡萄球菌，分离率为14%；耐药性分析表明分离的金黄色葡萄球菌对青霉素、磺胺异噁唑耐药率超过70%，对庆大霉素、氧氟沙星、头孢哌酮敏感性大于90%。本研究为本地区奶牛乳房炎的防控与临床用药提供了依据。     

抚顺某奶牛场隐性乳房炎病原菌耐药性的调查研究

研究旨在确定抚顺某规模化奶牛养殖场隐性乳房炎主要病原耐药情况。试验使用CMT检测法,对该场隐性乳房炎患病情况进行调查;采用鉴别培养基及生化反应鉴定对主要病原菌金黄色葡萄球菌及大肠杆菌进行分离,纸片法评估病原菌分离株对临床常用20种抗菌药物的耐药性。结果显示,该场奶牛隐性乳房炎患病率为4.67%,乳区阳性率为1.96%。研究得到38株金黄色葡萄球菌分离株和31株大肠杆菌分离株,2种病原菌均对磺胺类药物高度耐药,对头孢菌素类药物敏感性较高,且病原菌多药耐药现象较为严重。研究表明,该场奶牛隐性乳房炎患病率相对较低,病原菌耐药性及多药耐药情况相对较为严重。     

致母猪子宫内膜炎金黄色葡萄球菌鉴定及致病性与耐药性检测

为分析2018年-2020年广州地区规模化猪场致母猪子宫内膜炎金黄色葡萄球菌的致病性、血清型及耐药性情况,采集患子宫内膜炎母猪的子宫化脓性分泌物样品177份,进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定。采用人工感染动物试验、PCR和K-B药敏纸片法分别检测金黄色葡萄球菌的致病性、血清型和耐药性。结果表明,分离得到了96株金黄色葡萄球菌,其中72株能引起小鼠发病与死亡,具有致病性;分离的72株致病性金黄色葡萄球菌以荚膜5型(52.8%)为主要流行血清型,对阿莫西林、氨苄西林、青霉素等9种药物的耐药率在58.3%～95.8%之间;对头孢噻肟、头孢噻呋、恩诺沙星等5种药物耐药率在11.1%～29.3%之间。说明从该地区分离的72株致母猪子宫内膜炎金黄色葡萄球菌以荚膜5型为主要流行血清型,耐药性严重。     

新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】探明新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌流行情况及耐药性,为该地区生乳中金黄色葡萄球菌的监测及保障生乳质量安全提供理论依据。【方法】试验随机从南北疆规模化奶牛场采集110份生乳样品。采用增菌培养、分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定及PCR法对奶样中金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并利用微量肉汤稀释法及PCR方法对金黄色葡萄球菌进行16种抗菌药物的耐药表型及耐药基因分析。【结果】从110份奶样中分离出18株金黄色葡萄球菌,分离株呈浅黄色、光滑凸起的圆形菌落,革兰氏染色镜检呈紫色、短链状排列的革兰氏阳性菌,生化试验结果符合金黄色葡萄球菌生化特点,经16S rDNA及nuc基因PCR扩增鉴定为金黄色葡萄球菌,分离率为16.36%(18/110)。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌分离株对氨苄西林、青霉素及磺胺异噁唑具有较高的耐药性,耐药率分别为100%、83.33%和77.78%,而对万古霉素、复方新诺明、苯唑西林、头孢噻吩、头孢噻呋、利福昔明及环丙沙星7种抗菌药物高度敏感,敏感率分别为100%、100%、94.44%、94.44%、94.44%、94.44%和94.44%。其中有14株金黄色葡萄球菌为多重耐药菌,多重耐药率为77.78%。耐药基因检测结果显示,大环内酯类耐药基因ermB检出率最高,为50.00%,其次为β-内酰胺类耐药基因mecA,检出率为27.28%,磺胺类耐药基因Sul1的检出率为22.22%。【结论】新疆奶牛场生乳中分离的金黄色葡萄球菌的流行及耐药情况仍较严重,且存在多重耐药现象,因此,对生乳中金黄色葡萄球菌耐药性的监测有重要意义。     

牛源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解青岛地区奶牛场金黄色葡萄球菌的污染状况及耐药性情况,采集该地区13个奶牛场的839份牛奶和环境样品进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,采用琼脂稀释法对所分离菌株进行药敏试验。结果:从839份样品中共分离出44株金黄色葡萄球菌,分离率为5.24%,其中奶样的分离率最高(8.42%)。所有的分离菌株均表现出不同程度的耐药,其中对氨苄西林、甲氧苄啶、四环素、环丙沙星、青霉素和苯唑西林耐药情况最严重,耐药率分别为88.6%、86.4%、81.8%、77.3%、75%和65.9%;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3类及3类以上药物的菌株占40.9%,有1株耐受9类不同抗菌药物。     

奶牛场环境中气载金黄色葡萄球菌的耐药性分析与散播试验

为了解奶牛养殖场内、外环境中金黄色葡萄球菌的耐药情况和散播特点,以5%绵羊血琼脂平板为采样基质,应用Andersen 6级空气生物采样器采集奶牛场内、外环境空气及牛场内粪土样本,经细菌分离、纯化和16S rRNA保守序列分析鉴定金黄色葡萄球菌,并进行了菌株耐药性和ERIC-PCR亲缘性分析。结果:从奶牛场内、外环境和牛场粪土中分离鉴定出51株金黄色葡萄球菌。药敏试验发现,分离菌株表现出不同程度的耐药性和多重耐药性,其中青霉素P-G的耐药情况最为严重,耐药率为100%,多重耐药主要表现为2耐、3耐、4耐;对不同来源金黄色葡萄球菌进行亲缘性分析,结果显示,牛舍内空气中90.5%(19/21)、牛场外空气中50%(7/14)的金黄色葡萄球菌与粪土中的金黄色葡萄球菌遗传相似系数≥90%,表明粪土中的金黄色葡萄球菌可形成微生物气溶胶,向养殖场周围环境散播。     

重庆市动物源性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为了解重庆市部分区县动物源性金黄色葡萄球菌的耐药情况,采集重庆市北碚区、合川区、荣昌县部分养殖场466份畜禽粪便样品,将样品划线接种于Mueller-HInton高盐平板,挑取可疑菌落接种LB液体培养基,提取基因组后,通过PCR扩增金黄色葡萄球菌特异性nuc基因,对鉴定的金黄色葡萄球菌进行23种临床常用抗菌药物的药物敏感性试验。结果从466份样品中分离出25株金黄色葡萄球菌,包括17株鸡源菌株和8株猪源菌株。25株临床分离株对23种抗菌药物均有不同程度耐药,对氨苄西林、青霉素G、四环素、强力霉素、林可霉素耐药严重,耐药率超过60%,对阿米卡星、呋喃唑酮、万古霉素只有1株细菌耐药。所有分离菌均为多重耐药。表明分离菌的耐药性严重。本试验结果为重庆市养殖场的临床用药提供了参考,为研究重庆市动物源性金黄色葡萄球菌的耐药基因、耐药机制和耐药传播规律奠定了基础。     

高寒地区奶牛乳房炎凝固酶阴性致病葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和药敏试验等对样品中的葡萄球菌进行分离鉴定和耐药性分析。结果显示,该地区隐性乳房炎发病率达47.8%,共分离和鉴定出9种葡萄球菌60株(34.5%);60株葡萄球菌分为41个克隆谱型;60株葡萄球菌对青霉素和林可霉素的耐药率较高,分别为40.0%(24/60)和50.0%(30/60),表明这两种药是治疗乳房炎常用药物。本研究为高寒地区致病葡萄球菌引起的奶牛乳房炎临床合理用药及对病原菌的防控提供实验依据和指导。     

北京地区奶牛隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

为了解北京地区奶牛隐性乳房炎中金黄色葡萄球菌的感染情况及对常用药物的敏感性,用科玛嘉显色培养基和16SrRNA PCR检测方法对5个奶牛场的100份隐性乳房炎奶样进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,采用K-B纸片扩增法进行药敏试验。结果表明,显色培养基分离到24株疑似金黄色葡萄球菌,经16SrRNA PCR鉴定,15株为金黄色葡萄球菌;药敏试验结果显示,15株金黄色葡萄球菌均对β-内酰胺类中的氨苄西林产生普遍耐药性,对克林霉素和环丙沙星的耐药率较高,分别为53.33%和40%;对氧氟沙星、庆大霉素、头孢噻肟和头孢曲松的耐药性较低,耐药率为6.67%。说明15株金黄色葡萄球菌分离株对7类9种抗菌药物都有不同程度的耐药性。     

犬鼻腔金黄色葡萄球菌的分离及耐药性监测

旨在了解犬源金黄色葡萄球菌的耐药现状。采集动物医院就诊犬鼻拭子样本，对金黄色葡萄球菌进行分离、纯化及鉴定，并进行甲氧西林耐药基因mecA和耐药表型检测，同时分析影响携带率的相关因素。结果：共采集229份样品，其中犬鼻腔金黄色葡萄球菌携带率为35.4%(81/229);该菌mecA基因检出率为23.5%(19/81)。影响金黄色葡萄球菌携带率的因素有性别和年龄，未发现影响该菌携带mecA基因的因素。金黄色葡萄球菌对青霉素G耐药最严重(耐药率77.78%),对复方新诺明耐药较严重(耐药率为60.49%),对其余药物呈不同水平耐药性(耐药率6.17%～23.46%)。以上结果说明，金黄色葡萄球菌在犬中较为流行，犬年龄和性别是影响其携带率的重要因素，同时这些菌株已呈较高耐药性，且存在mecA耐药基因，应加强对该菌流行情况及对兽医临床中抗生素使用的监测。     

豫北地区猪源大肠杆菌耐药性及基因多态性分析

为了解豫北地区规模化养殖场猪源大肠杆菌的耐药性及基因多态性,对分离的21株猪源大肠杆菌进行药物敏感实验,采用PCR技术对其耐药基因进行检测,RAPD技术进行基因多态性分析。结果表明:豫北地区规模化养殖场分离的猪源性大肠杆菌菌株对常见16种抗生素存在不同情况的耐药性。其中对四环素、红霉素、麦迪霉素、阿莫西林、磺胺异恶唑、环丙沙星、新生霉素、复方新诺明、恩诺沙星、甲氧苄啶的耐药率均为100%,对庆大霉素、洛美沙星的耐药率为85%以上,对其他药物的耐药率相对较低;PCR检测得到8种耐药基因的条带;对菌株进行RAPD分析得到7种不同的基因型。大肠杆菌极易产生耐药性,耐药基因广泛存在于耐药菌株中,但耐药表型与耐药基因之间无绝对相关性。豫北地区猪源大肠杆菌感染多重耐药十分严重,严重影响了该地区猪源大肠杆菌病的诊治和预防。     

河南省部分地区猪群大肠杆菌分离菌的耐药性比较分析

为掌握河南省猪源大肠杆菌的耐药情况,于2013年至2018年对河南省郑州、开封、焦作、许昌四个地区部分规模化养猪场分离出的856株大肠杆菌,采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,调查其对8类13种代表性抗菌药物的耐药性。结果表明,856株大肠杆菌对氧氟沙星、黏菌素、庆大霉素、头孢噻呋和阿莫西林/棒酸等5种药物的耐药率在35.0%以下,分别为32.2%、31.1%、25.5%、15.5%和30.0%;对恩诺沙星、四环素、多西环素、大观霉素、氟苯尼考、磺胺异恶唑、复方新诺明和氨苄西林等8种药物的耐药率范围为45.0%～95.0%,其中对四环素、多西环素和磺胺异恶唑等3种药物的耐药率高达90.0%以上;多重耐药集中于耐5、6和7类抗生素,耐3类及以上药物的菌株占90.0%。本研究结果表明河南省部分养殖场猪源大肠杆菌耐药形势严峻,应加强对其监测和控制。     

乳房炎源性金黄色葡萄球菌生物被膜检测及药敏试验

金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎的最主要病原之一,由其引起的奶牛乳房炎发病率高、防治困难,常常会给奶业造成巨大经济损失,对食品安全造成巨大威胁.以新疆阿克苏地区奶牛乳房炎性金黄色葡萄球菌分离株为研究对象,详细观察了菌株在刚果红培养基上的形态,并通过K-B扩散法分析了5株金黄色葡萄球菌乳房炎分离株对19种抗生素的耐药情况.结果表明,5株金黄色葡萄球菌均具有生物被膜形成能力,且对青霉素、链霉素、氨苄西林和四环素等常用抗生素完全耐药,对万古霉素、环丙沙星、诺氟沙星、阿米卡星等抗生素中度敏感,而对恩诺沙星、头孢西丁和头孢噻肟3种抗生素高度敏感.研究结果提示,乳房炎性金黄色葡萄球菌具有较强的耐药性,而这种耐药性可能与其生物被膜形成有关.     

湖南省奶牛源金黄色葡萄球菌分离鉴定与耐药性分析

为了掌握湖南省内奶牛源金黄色葡萄球菌的耐药情况,指导临床合理用药,抽取牛乳样品,通过对细菌的分离培养和纯化,采用基质辅助激光电离飞行时间质谱仪和全自动生化鉴定仪进行鉴定,并对分离菌株进行18种抗菌药物耐药性检测,结合耐药表型和mecA基因检测判定MRSA菌株。结果显示,2020-2021年从湖南地区257份牛乳样品中分离出金黄色葡萄球菌39株,89.74%的临床分离菌株表现为不同程度耐药,其中对青霉素耐药最为严重,耐药率达82.05%;对红霉素、克林霉素、替米考星、庆大霉素、头孢西丁耐药率在20%～35%之间;对多西环素及万古霉素绝对敏感,耐药率为0。38.46%分离菌株表现为多重耐药,以7重耐药最多。鉴定出19株MRSA,其中包含15株OS-MRSA和4株OR-MRSA。本研究可为湖南省内奶牛企业制定合理用药措施提供依据。     

抗菌肽NZ2114对奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌细胞膜、基因组和耐药性的影响

本试验以真菌防御素Plectasin衍生肽NZ2114和奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌为研究对象,旨在阐明抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌的体外抗菌机制及其阻遏金黄色葡萄球菌耐药性的效果。通过16S rRNA基因鉴定对55份乳房炎奶样中的病原菌进行分离鉴定,采用纸片扩散法检测其耐药性,通过微量稀释法测定抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌的抑菌活性,借助流式细胞术和扫描电镜观察抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌细胞膜完整性及细胞形态的影响,通过凝胶阻滞和圆二色谱分析抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌基因组DNA的影响,将抗菌肽NZ2114与金黄色葡萄球菌共同孵育以研究抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌耐药性的影响,通过PCR进一步分析抗菌肽NZ2114对金黄色葡萄球菌携带的耐药基因的影响。结果表明,共获得10株金黄色葡萄球菌,分离菌对青霉素等9种抗菌药具有耐药性,且50%为多重耐药。抗菌肽NZ2114对10株金黄色葡萄球菌具有强抑菌活性,最小抑菌浓度（MIC）为0.5~1.0 μg/mL。抗菌肽NZ2114可导致金黄色葡萄球菌S7细胞皱缩、细胞内容物泄漏,甚至细胞裂解,碘化丙啶（PI）细胞膜穿透率达5%,且抗菌肽NZ2114可与金黄色葡萄球菌S7基因组DNA结合并改变其DNA结构。金黄色葡萄球菌与1/4×MIC抗菌肽NZ2114孵育12 h后发现,除对阿莫西林和磺胺异噁唑的耐药率没有降低外,对其他抗菌药的耐药率均有不同程度的降低（10%~40%）,且抗菌肽NZ2114对β-内酰胺类耐药基因（blaZ）及杆菌肽类耐药基因（braRS）的消除率分别达28.57%（2/7）和22.22%（2/9）。上述结果证明,抗菌肽NZ2114对耐药金黄色葡萄球菌具有体外强抑菌活性,其干扰耐药金黄色葡萄球菌细胞膜并结合胞内DNA的作用机制为其低耐药杀菌机制奠定了细胞学基础。同时抗菌肽NZ2114对耐药菌株的耐药性及相关耐药基因均有一定消除作用。由此可见,抗菌肽NZ2114是一种极具前景的治疗金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎的抗生素替代品。     

Study on Biological Characteristics and Drug Sensitivity of Haemophilus parasuis Isolated in Sichuan Province

The study was aimed to investigate the biological characsteristics and drug sensitive tests of Haemophilus parasuis isolated in Sichuan province.This paper reported the biological characteristics,16S rRNA gene PCR and drug sensitive test of the isolates by technique of microbiological and molecular biology.The results showed that the isolates had micro anaerobic and could produce satellite phenomenon,the isolates were just same in biochemical characteristics with field isolates in other area.All the isolates amplified 821 bp 16S rRNA gene.And drug sensitive tests showed that the isolates were highly sensitive to cefradine,ampicillin,cefradine,amoxicillin,cefaclor,ofloxacin,cefotaxime and furadantin,the sensitive rate was 75.61% to 87.80%,but the isolates were high resistance to lincomycin,carbenicillin,enrofloxacin,amikacin and sulfamethoxazole,and multiple-drug resistance was found among the isolates,the number of bacterial strains resistant to antibiotics were more between five and eight,the resisitance strains were 21.95% to 30.49%,7 isolates were even resistant to 13 antibiotics.The results showed the phenomenon of drug resistance of the isolates was very serious.     

副猪嗜血杆菌四川株生物学特性及药物敏感性研究

为了解副猪嗜血杆菌四川分离株的生物学特性及耐药性情况,本研究采用微生物及分子生物学技术对副猪嗜血杆菌(Hps)四川分离株从生物学特性、16S rRNA基因PCR扩增和耐药性方面进行了研究.结果显示,Hps四川分离株具有一定的微厌氧性,能产生"卫星现象",分离株与其他地区分离株生化特性基本一致;所有分离株均扩增出821 bp的特异性16S rRNA基因片段.药物敏感性试验结果显示,分离株对头孢拉定、氨苄西林、头孢氨苄、阿莫西林、头孢克洛、氧氟沙星、头孢噻肟、呋喃妥因具有较高的敏感性,敏感率为75.61%~87.80%;对林可霉素、羧苄青霉素、恩诺沙星、阿米卡星、磺胺甲唑均表现出较高的耐药性,且多重耐药严重,5~8种耐药占比最多,为21.95%~30.49%,有7株可耐受多达13种药物.结果表明,Hps四川分离株存在严重的耐药性现象.     

长春市市售猪肉鸡肉中金黄色葡萄菌和沙门氏菌分离及耐药性分析

对肉品中金黄色葡萄球菌及沙门氏菌进行耐药分析,以期为其风险评估提供依据。采集吉林省长春市市售猪肉、鸡肉样品,按照国标方法分离金黄色葡萄球菌、沙门氏菌,利用K-B法药敏试验检测金黄色葡萄球菌和沙门氏菌对头孢噻肟钠、左旋氧氟沙星、庆大霉素、四环素4种抗生素的耐药性。结果显示：共分离出金黄色葡萄球菌46株,检出率为46％;沙门氏菌48株,检出率为16．84％。金黄色葡萄球菌对4种抗生素的耐药率在0～56．52％之间,共产生6种耐药谱。沙门氏菌对4种抗生素的耐药率在16．67％～87．5％之间,共产生9种耐药谱。长春市肉品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌耐药现象普遍。     

Isolation，Identification and Antibiotics Resistance Analysis of Enterococcus from Yak

17 feces samples of yak which were collected in Hongyuan county were measured with Gram staining method and 16S rRNA molecular identification in this study.8 suspected Enterococcus were separate from feces samples by bacteria purification and PCR amplification with 1 500 bp specific band. 6Enterococcus faecalis and 2Enterococcus faecium were identified through 16S rRNA sequencing.The homology analysis of the strains revealed that the homology between Enterococcus faecalis and reference strains sequence were 99.7% to 100%,that of Enterococcus faecium and reference sequence were 98.2% to 99.2%,indicating that the yak Enterococcus was highly conserved in the process of genetic evolution.The drug sensitive test results showed that the isolated strains were highly resistance to aminoglycoside antibiotics.Enterococcus faecium 11-1-2 strain was not only 5 multi-resistant,but also showed resistence to vancomycin.Enterococcus faecalis strains was most 3 multi-resistant.The antibiotics resistance results revealed that the resistance of yak Enterococcus was serious and should be taken seriously.     

牦牛源肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500 bp特异性条带。16S rRNA测序结果显示,8株疑似肠球菌中,6株为粪肠球菌,2株为屎肠球菌。同源性比对分析显示,粪肠球菌与参考序列同源性为99.7%~100.0%,屎肠球菌与参考序列同源性为98.2%~99.2%,说明牦牛源肠球菌在遗传进化过程中高度保守。运用K-B纸片法进行药敏试验,结果显示,分离株对氨基糖苷类抗生素耐受性较高,2株屎肠球菌中,11-1-2菌株表现为5重耐药,且该菌株耐万古霉素,粪肠球菌主要表现为3重耐药,药敏结果提示牦牛源肠球菌耐药较严重,应引起高度重视。