核酸酶P1高产菌株的选育和产酶条件的优化（英文）

 以ATCC14994为出发菌株，采用⁶⁰ Co γ-射线与亚硝基胍相结合进行多次诱变育种,获得一株核酸酶P1高产菌株HEP2312。通过正交试验对该突变株的产酶发酵条件进了优化，经优化的发酵产酶条件为: 蔗糖5%, 酵母膏0.3%, 蛋白胨0.3%, K₂HPO₄ 0.8%, KH₂PO₄ 0.8%, MgSO₄ 0.2%, ZnSO₄ 0.2%, 培养基起始pH 6.0, 接种量10%, 培养温度30℃,摇床转速120 r/min,发酵时间48 h。在优化条件下，HEP2312的产酶水平达1 508 U/mL。     

酒糟中纤维素酶产生菌的筛选及酶学特性研究

以CMC-Na为唯一碳源,采用平板分离法从河套酒业酒糟中分离筛选出1株产低温酸性纤维素酶菌株C-11,16S rDNA基因序列与枯草芽孢杆菌的同源性较高。菌株C-11所产纤维素酶的最适反应温度为30℃,在35℃保持97%的活性,30℃保温24 h可保持91%的酶活力,保温60 h保持67%的活性,热稳定性好;该酶在pH 5.0时酶活最高,在pH 4.0和pH 5.0下保存60 h可保持38%和40%的活性。菌株C-11所产纤维素酶为低温酸性纤维素酶,可以耐受酒糟环境,降低酒糟纤维素含量。     

乙醛脱氢酶高产菌株Z07-J01的选育与酶学特性

通过紫外线和He-Ne激光诱变醋酸菌,选育出1株乙醛脱氢酶高产菌株Z07-J01,该正突变株24 h发酵酶活为1 008.00 U/g湿菌体,比出发株提高了276%,且酶活在10代内稳定。该突变株所产乙醛脱氢酶的最适作用pH为7,最适作用温度为50℃;在25℃保温30 min,该酶酶活不受影响;在65℃保温30 min,该酶完全失活;2 mmol/L Cu2 能使该酶完全失活,2 mmol/L Mn2 则对该酶有较强的激活作用。     

烟曲霉植酸酶的酶学特性研究

对烟曲霉植酸酶的酶学特性进行了研究.结果表明,其最适反应温度为60℃,最适pH为5.0;液态酶在70℃处理5 min,残余酶活为69.12%;在4℃保存2个月,残余酶活为90%;不同金属离子和螯合剂对酶活性的影响存在差异,Fe3 ,Mg2 对该植酸酶有较强的激活作用, 而Zn2 ,Co2 ,Cu2 和EDTA有较强的抑制作用,Ca2 ,Fe2 和Mn2 等对其则无明显影响.     

纤维素酶高产细菌的筛选、鉴定及酶学特性分析

从武夷山森林腐烂枯叶及附近土壤中筛选分离得到1株产纤维素酶活力较高的菌株CS-7。通过形态特征观察和16S r DNA序列分析,将其鉴定为蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)。对菌株CS-7所产纤维素酶的相关酶学特性进行研究,结果表明,该菌株所产纤维素酶CMC酶活为7.91 U/m L,FPA酶活为2.40 U/m L;酶的最适反应温度和最适反应p H分别为60℃和6;在40~50℃温度范围内热稳定性较好;在p H 5.0~7.0范围内p H稳定性较好。研究结果表明,CS-7菌株是能产生耐高温中性纤维素酶的菌株,具有进一步研究开发利用的潜力。     

丝瓜多酚氧化酶及过氧化物酶酶学特性的研究

应用分光光度法研究丝瓜多酚氧化酶及过氧化物酶酶学特性的影响因素,为丝瓜酶促褐变的研究提供基础。以普通丝瓜果肉为材料,PPO以邻苯二酚为底物,POD以愈创木酚为底物,研究分析反应温度、反应时间、pH及测量波长、底物的浓度、PPO提取酶液添加量对丝瓜PPO、POD活性的影响。丝瓜褐变相关酶提取和测定方法的优化:(1)PPO最佳反应体系:测定波长408nm、反应温度是35℃、pH为6.0、酶液用量0.15mL,最适底物为邻苯二酚,底物浓度为0.056mol·L~(-1);(2)POD最佳反应体系:测定波长410nm,反应温度为40℃,最佳pH为5.5,酶液用量0.1mL,底物是愈创木酚,浓度为0.067mol·L~(-1)。     

纤维素降解菌绿色木霉C-08的筛选及酶学特性研究

在环境破坏较少的野生森林土样中,通过刚果红平板、滤纸条液体培养等初筛,并在摇瓶发酵复筛的基础上得到1株高效纤维素降解菌绿色木霉C-08,同时对其最适酶活、最适温度及其稳定性进行了测定。结果表明:CMCase的最适pH值为3.6,最适温度是60℃,在30-50℃稳定性较强;FPase的最适pH值为4.8,最适温度是50℃,在30-40℃稳定性较强。     

微生物溶菌酶酶学性质及抑菌特性研究

通过溶菌酶试剂盒对微生物溶菌酶酶学性质进行研究,并采用抑菌圈法分析其对溶壁微球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、嗜水气单胞菌、哈维氏菌、沙门氏菌、啤酒酵母菌、黑曲霉及青霉的抑菌特性.结果表明,微生物溶菌酶的最适pH值约为7.0,最适反应温度为40℃,反应温度为40～70℃时其湿热稳定性较高,而pH值在2.5～6.0的范围内处理2h后,仍显示出较高的稳定性,即具有较好的耐酸性;微生物溶菌酶对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有抑菌作用,最低抑菌浓度范围在0.005 ～0.6 mg/mL,对啤酒酵母的最低抑制浓度为2mg/mL.     

一株低温脂肪酶产生菌的筛选鉴定及酶学特性

[目的]分离获得低温脂肪酶产生菌和研究其酶学特性.[方法]对采自阿勒泰等地区的75份土样中脂肪酶产生菌进行富集和筛选,目的菌株经16S rRNA基因序列比对鉴定后,对其产生的脂肪酶进行酶学特性分析.[结果]菌株N6-12归属于假单胞属菌,可能为新种;其产生的脂肪酶的最适催化温度为30℃;酶催化的最适pH为6.5;金属离子Cu2、Fe3+等对酶有较大的抑制作用,而Na+对酶有激活作用.[结论]菌株N6-12产生的脂肪酶属于低温脂肪酶.     

岩藻聚糖硫酸酯降解酶产生菌的筛选鉴定及酶学特性研究

[目的]从水环境中筛选高活性降解菌,从而将高分子多糖降解为低分子量、药用价值更高的多糖。[方法]通过唯一碳源、富集培养等方法对淡水来源的细菌进行筛选获得活性较高的岩藻聚糖硫酸酯降解菌,然后根据菌株的形态、生理生化特征及16S rDNA分析和进化树构建进行种属鉴定,进一步对降解菌粗酶液的热稳定性、最适反应温度、最适pH和金属离子对酶稳定性影响进行研究。[结果]筛选获得了2株活性较高的岩藻聚糖硫酸酯降解菌JS3和JN3,这2株菌菌液酶活达384、410 U。菌株JS3和JN3归属于克雷白氏杆菌属(Klebsiella sp.)。酶学分析表明,JS3和JN3菌株粗酶液在40～70℃具有比较好的热稳定性,在pH 4.0～7.0内,该酶能保持良好的稳定性。JS3和JN3粗酶液与底物反应的最适温度分别为45、40℃,最适pH均为5.0。金属离子对酶的活性有一定影响,离子浓度为1×10^-2 mol/L时,Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺对该酶有激活作用,Cu²⁺则强烈抑制酶活,Ni^2+...     

中药菊花过氧化物酶酶学特性及炮制工艺的研究

目的 探讨中药菊花过氧化物酶酶学特性及炮制工艺。方法 以愈创木酚为底物,采用分光光度法测定菊花过氧化物酶的酶学特性,并比较不同加工工艺下菊花过氧化物酶学特性及总黄酮含量。结果 菊花反应时间不宜超过2 min,最适pH 7.0,最适温度36℃,100℃处理30 s后,过氧化物酶活性完全丧失。过氧化物酶催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数Km=1.58×10^-2 mol/L,Vmax=14.278 U/min。四种炮制工艺比较过氧化物酶的抑制效果为水蒸汽 > 微波干燥 > 80℃热风干燥 > 自然阴干。分光光度计法测定样品总黄酮含量,蒸制干燥 > 微波干燥 > 80℃热风干燥 > 自然阴干。结论 菊花过氧化物酶适应温度范围广,20~80℃,相对耐热性好。本研究可为中药菊花炮制工艺的改善提供理论参考。     

无柄灵芝菌LZ02高产漆酶条件及部分酶学性质分析

【目的】 从采自新疆天山的无柄灵芝菌(G.resinaceum)中筛选获得1株高产漆酶的LZ02菌株,对其产酶条件进行优化,研究部分酶学性质。【方法】 采用单因素实验,对其产酶条件优化并研究其酶学特性,采用双向电泳检测酶蛋白。【结果】 LZ02菌株产漆酶的最佳碳源为2.5%麦麸+1%葡萄糖,最佳氮源为干酪素; Cu²⁺、Mg²⁺、Fe²⁺、 Zn²⁺和Ca²⁺的添加对LZ02产漆酶有一定的促进作用,而Co²⁺具有明显的抑制作用;藜芦醇和愈创木酚抑制产酶并使产酶高峰由第3 d推后至第9 d,添加没食子酸和ABTS对产酶影响不大,单宁酸对产酶有抑制作用。LZ02菌漆酶最适反应温度为60℃,且在80℃仍具有漆酶活性;在40℃,pH 4.0~5.0,酶活性最稳定;最适反应pH为3.0,Mn²⁺ 、Zn²⁺、 Cu²⁺ 、Ba²⁺和K⁺对酶稳定性有一定的促进作用,Co²⁺、Cd²⁺、Cr²⁺和Pb²⁺对酶的稳定性具有明显的破坏作用;对菌体及发酵液进行了双向电泳检测,测定其等电点为4.1;获得了1个纯化酶蛋白质谱序列,该蛋白与Ganoderma Lucidum来源的Laccase高度同源。【结论】 无柄灵芝菌(G.resinaceum)漆酶的合成和分泌受到营养水平、培养条件、生长阶段以及培养基中诱导剂的严格调控,木质素或木质素相关的芳香类化合物、N源和C源也能调节漆酶的合成;漆酶活性对不同种类、不同浓度的金属离子以及诱导剂的响应不尽相同,其具有较复杂的生理功能及调控机制。     

菜花多酚氧化酶的酶学特性研究

以菜花为原料制备粗酶液,以邻苯二酚为底物,采用分光光度法在420 nm波长下研究温度、pH值、底物浓度对菜花多酚氧化酶活性的影响,建立相应的酶促褐变反应动力学方程,并探讨了氯化镁、十二烷基硫酸钠、亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸等对酶活性的影响.结果表明,菜花多酚氧化酶的最适pH值为7.0,最适温度为50℃,50℃加热10 min仍保留61％的活性.其米氏常数和最大反应速率分别是0.056 23 mol·L-1和8.650 5U·min-1.氯化镁、十二烷基硫酸钠可增强菜花PPO活性,亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸可抑制其活性.     

台湾青枣果实过氧化物酶部分酶学特性分析

过氧化物酶(POD)是参与酚类物质氧化,并且在果蔬酶促褐变中发挥着重要作用的主要酶类之一。该研究以台湾青枣果实为材料,以愈创木酚为底物,采用分光光度法对该果实POD部分酶学特性进行研究。结果表明,台湾青枣果实POD的最适p H值为5.8,最适温度为40℃。p H值小于3.0时酶基本失活,温度高于70℃时也基本失活。该酶热稳定性较差,100℃处理超过15s时,酶几乎钝化。抗坏血酸和Na HSO对POD有明显的抑制作用,而EDTA的抑制作用较弱。3种化合物的抑制效果依次是抗坏血酸Na HSO3EDTA。     

高产蛋白酶P5菌株的纯化及酶学性质

对高产蛋白酶细菌P5菌株发酵产生的蛋白酶进行初步分离纯化并研究其酶学性质。结果表明,硫酸铵饱和度为70%时,酶活性达到最高(310.44U/mL);该酶最适反应温度为40℃,在35～40℃保温5h,酶活性基本没变化;酶反应最适pH值为7.0,酶活性在pH值6.0～7.5时比较稳定。K+、Ca2+、Mg2+、Fe3+对酶活性有促进作用,Na+对酶活性基本没有影响,Hg2+和Mn2+对酶活性有抑制作用,其他金属离子对酶活性的影响随离子浓度的不同而不同。     

热稳定性过氧化氢酶高产菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

从无锡惠山采集的土样中分离获得一株过氧化氢酶产量较高的菌株SYBC-01,根据其形态、生理生化特性和16S rDNA序列分析,鉴定该菌为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。初步试验表明,该菌产过氧化氢酶酶活达293.88 U/mg细胞,所产过氧化氢酶的最适反应pH 7,最适反应温度70℃,在pH6~10范围内较稳定,60℃以下热温度性较好,表观Km值为23.71 mmol.L-1,Vmax为34 672 U.mg-1蛋白。     

植物淀粉生物合成酶的酶学特性分析

论述了植物淀粉生物合成酶的酶学特性,主要包括ADPase催化合成ADP-葡萄糖、GBSS合成直链淀粉、多种SSS合成支链淀粉、SBE参与支链淀粉形成、DBE参与支链淀粉的合成等内容。     

双峰驼粪便中纤维素分解菌的筛选及酶学特性分析

旨在从双峰驼粪便中筛选能够分解纤维素的菌株,并对分离菌株进行鉴定和酶学特性分析。采用羧甲基纤维素平板法初筛和摇瓶发酵法复筛,从双峰驼粪便中分离筛选到1株能够降解纤维素的纤维素分解菌;采用形态学观察、生理生化特性以及16S rRNA基因序列同源性分析,初步鉴定该菌株为纤维化纤维微菌(Cellulosimicrobium cellulans)。根据该菌株的产酶特性评定其产酶能力;从其发酵产纤维素酶的适宜pH、温度、时间和接种量来评价该菌株的酶学特性。结果显示,该菌株最适酶反应条件为50℃,pH为6.0,且该菌株产生的纤维素酶具有较好的热稳定性。该菌株的最佳产酶条件为接种量10%,初始pH为7.0,培养温度为30℃,发酵时间为72 h。所筛选菌株产生的酶具有一定的耐碱性和耐热性,可应用于食品行业或废料处理等方面。     

Pseudomonas stutzer S12过氧化氢酶基因的表达及酶学特性研究

商品过氧化氢酶目前大部分来源于动物肝脏和黑曲霉发酵,但是这些酶通常热稳定性不好、酶活力低且售价高。为了解决这一问题,从垃圾渗滤液中筛选出来一株高产过氧化氢酶的菌株Pseudomonas stutzeri S12,通过全基因组测序和基因鉴定发现了该菌株中编码过氧化氢酶的基因katE,将其在E.coli BL21（DE3）中异源表达和纯化。KatE的最适温度为35 ℃,最适pH为8.0,酶比活可达到1 349 U·mg^-1,该酶在10～40 ℃范围内的酶活力较高,具有较为广泛的温度适应性。 KatE具有较好的热稳定性,50 ℃处理5 h还剩余70%的酶活,60 ℃孵育2 h后剩余酶活仍有50%。其动力学性质Vmax为16 666 μmol·L^-1·min^-1,Km为100.5 mmol·L^-1。该酶在中低温条件下酶活较好,热稳定性较好,且酶活力较高,为开发新型商品过氧化氢酶提供了新的材料。