河北省奶牛子宫内膜炎致病性大肠杆菌的耐药性及可移动遗传元件检测

从河北省各地采集患有子宫内膜炎奶牛的病料,对大肠杆菌进行分离鉴定,并对其致病性、血清型、耐药性及可移动遗传原件进行检测。结果显示,分离得到了29株致病性大肠杆菌。在这些菌株中,检测出4种血清型,其中O89与O128为优势血清型。分离菌对新霉素耐药率高达68.97%(20/29);17株为多重耐药菌,它们对β-内酰胺类和四环素类抗生素耐药率均高于58.82%(10/17);qnrB耐药基因的检出率高达86.21%(25/29);共检测出intI1、tnpU、tnp513、traA、ISEcp1和trbC 6种可移动遗传原件,携带可移动遗传原件越多的细菌,细菌的耐药基因数量越多,多重耐药性越强。本试验分析了河北地区奶牛子宫内膜炎大肠杆菌的耐药表型与耐药基因的传播情况,为奶牛子宫内膜炎的治疗提供了理论依据。     

猪源多重耐药大肠杆菌中整合子的检测

为了解猪源多重耐药大肠杆菌中整合子的流行状况和分子特性,分析整合子在细菌多重耐药中的作用,采用PCR方法检测75株多重耐药大肠杆菌中整合酶基因和整合子基因盒。结果显示,猪源大肠杆菌Ⅰ型整合子流行普遍,75株猪源大肠杆菌中检出Ⅰ类整合子56株,检出率为74.7%;检出Ⅱ类整合子4株,检出率5.3%;未检出Ⅲ类整合子。共检出5种Ⅰ型整合子,各种Ⅰ型整合子整合不同种类、不同数目的耐药基因盒。这表明Ⅰ型整合子对细菌多重抗药性的产生和传播起着重要作用,整合子是介导细菌多重耐药性的重要分子机制。     

屠宰前鸡、猪源大肠杆菌耐药性调查

本试验旨在了解屠宰前鸡、猪源食品动物体内大肠杆菌耐药情况,分析潜在的食品安全问题。从广州市畜禽交易市场随机采集待屠宰鸡和猪的粪便样品,分离鉴定大肠杆菌,并采用琼脂稀释法检测大肠杆菌对15种抗菌药物的敏感性。结果显示,从658份猪源样品和133份鸡源样品中共分离鉴定出731株大肠杆菌,其中猪源606株,鸡源125株。药敏试验结果显示,731株大肠杆菌均表现出不同程度的耐药,耐药谱广且多重耐药现象严重。对复方新诺明和四环素的耐药率为90.0%以上,仅对头孢西丁、黏菌素和阿米卡星较敏感(耐药率均低于3%)。鸡源大肠杆菌对头孢噻肟、头孢曲松、新霉素、阿米卡星、萘啶酸和环丙沙星的耐药率显著高于猪源大肠杆菌(P＜0.05)。鸡源大肠杆菌中3耐及3耐以上的菌株占97.60%,猪源大肠杆菌占94.72%。结果表明,屠宰前畜禽体内大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性非常严重,以多重耐药为主,且耐药谱丰富多样。提示屠宰前畜禽携带的耐药菌对食品安全和人类健康存在较大的安全隐患。     

貉源多重耐药大肠杆菌整合子的检测

为了解貉源大肠杆菌的耐药性及Ⅰ型整合子的携带情况,试验采用药敏试验对150株貉源大肠杆菌进行耐药性检测,采用PCR方法对其进行Ⅰ型整合酶intⅠ1、intⅠ2和intⅠ3和Ⅰ型整合子的检测。结果表明：150株貉源大肠杆菌对氨苄西林(AMP)、阿莫西林(AML)、头孢噻吩(KF)和四环素(TE)的耐药率均达到了80%以上;对亚胺培南(IPM)、庆大霉素(CN)、阿米卡星(AK)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OFX)和多黏菌素B(PB)的敏感率均达到了70%以上;均表现出不同程度的耐药性,耐药种数为1～19种,多重耐药情况达到92.67%(139/150),其中,6重耐药菌株的比例最大,为12.00%(18/150)。整合酶基因intⅠ1的阳性样本数量为108株,检出率为72.00%(108/150);整合酶基因intⅠ2的阳性样本数量为14株,检出率为9.33%(14/150);均未检出整合酶基因intⅠ3。Ⅰ型整合子的阳性菌株数量为51株,检出率为34.00%(51/150),且存在1个菌株中含有最多3个基因盒的情况。Ⅰ型整合子基因盒包括aadA2、dfrA5、d...     

皖西地区部分养殖场户畜禽大肠杆菌耐药性调查

通过对2012-2013年临床接诊动物病料的细菌培养、染色镜检和生化鉴定,分离出不同畜禽源大肠杆菌133株,包括鹅源57株,鸡源29株、鸭源17株、猪源21株、羊源9株。试验采用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法对不同畜禽源大肠杆菌进行药物敏感试验。结果显示:试验菌株对14种临床常用药物耐药现象严重,且多表现为多重耐药性。     

动物源性大肠杆菌耐药性分析

目的:对吉林省长春市伊通地区分离出的113株动物源性大肠杆菌耐药性进行分析,了解猪源和鸡源大肠杆菌耐药程度及其耐药谱。方法:采用K-B纸片扩散法对大肠杆菌耐药性初步定性分析,并从中选出十株耐药谱不同的大肠杆菌测定其抗生素的最小抑菌浓度(MIC)。结果:113株均表现出不同程度的耐药,耐药谱广,且多表现为多重耐药。结论:动物源性大肠杆菌对抗生素的耐药性以多重耐药为主。113株对喹诺酮类、磺胺类、利福平耐药率达到90%以上,其中鸡源、猪源大肠杆菌耐药情况各不相同,二者均对丁胺卡那霉素、先锋必/舒巴坦较敏感,耐药率低于15%,可知丁胺卡那霉素、先锋必/舒巴坦可作为这些地区防治致病性大肠杆菌的首选药物。本实验结果对临床科学合理用药有重要指导意义。     

鸡源大肠杆菌喹诺酮类药物耐药基因的检测与分析

为了解湖北地区鸡源大肠杆菌喹诺酮类耐药基因(PMQR)的流行现状与耐药表型的相关性,采用纸片扩散法对2014~2015年分离的54株鸡源大肠杆菌临床分离株进行7种喹诺酮类药物体外敏感性测定,通过PCR检测qnrA、qnrB、qnrS基因,对基因检测阳性株进行Ⅰ类整合子检测。结果:54株鸡源大肠杆菌对萘啶酸、依诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、左旋氧氟沙星耐药率分别为72.2%、53.7%、53.7%、51.8%、50.0%、44.4%和22.2%;54株鸡源大肠杆菌中,10株(18.5%)检出qnrA基因,未检出qnrB、qnrS基因,且qnrA基因阳性株Ⅰ类整合子为阳性。结果表明,湖北地区鸡源大肠杆菌对兽医临床常用的喹诺酮类药物耐药严重,且存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA的流行,而qnrA基因与Ⅰ类整合子具有相关性,应加强监测。     

猪源多重耐药大肠杆菌Ⅰ型整合子的检测

为分析猪源多重耐药大肠杆菌中Ⅰ型整合子的流行情况,应用PCR方法检测其Ⅰ型整合酶基因(intⅠ)。结果表明:58.6%(34/58)猪源多重耐药大肠杆菌菌株为Ⅰ型整合酶阳性,表明猪源大肠杆菌的多重耐药性与整合子携带高度一致。     

猪源大肠杆菌耐药性与Ⅰ型整合子关系研究

目的为了解猪源大肠杆菌中Ⅰ型整合子的流行情况,探讨Ⅰ型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌Ⅰ型整合酶基因(int I1)并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果 119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含Ⅰ型整合子,检出率77.31%。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp～3149bp。7类Ⅰ型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78.15%大肠杆菌菌株的Ⅰ型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因(aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB)最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因(dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27),此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因lnuF、cmlA6、aar-3、orf。结论Ⅰ型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;Ⅰ型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。     

猪源大肠杆菌耐药性与I型整合子关系研究

目的为了解猪源大肠杆菌中I型整合子的流行情况,探讨I型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌I型整合酶基因（int11）并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含I型整合子,检出率77．31％。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp-3149bp。7类I型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78．15％大肠杆菌菌株的I型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因（aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB）最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因（dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27）,此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因1nuF、cm1A6、aar-3、off.结论I型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;I型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。     

青岛地区鸡源bla_(NDM)与mcr-1耐药基因的流行性试验

为了解青岛地区鸡源大肠杆菌中碳青霉烯耐药基因bla_(NDM)与黏菌素耐药基因mcr-1流行情况。2018-2019年从青岛地区共采集195份鸡直肠拭子和盲肠内容物,通过选择性培养基筛选目的菌株和16S rRNA菌属鉴定。采用琼脂稀释法测定菌株对10种常见重要抗菌药物的敏感性,通过PCR检测bla_(NDM)与mcr耐药基因并测序。结果共计分离到186株大肠杆菌,其中鸡泄殖腔源98株,鸡盲肠源88株。药敏试验结果显示,分离菌株对阿莫西林、四环素、头孢氨苄耐药率均高于90%;多黏菌素81.2%、庆大霉素88.7%、氧氟沙星86.6%和头孢噻肟87.1%,呈现较高的耐药率;对替加环素(4.8%)则表现低水平耐药率。进一步分析发现,62.9%的测试菌株对8种以上药物耐药,表现多重耐药。耐药基因检测揭示了31.2%(n=58)大肠杆菌携带mcr-1基因,7.5%(n=14)携带bla_(NDM),包括1株bla_(NDM-1)、1株bla_(NDM-9)、12株bla_(NDM-5)。其中6株大肠杆菌株同时携带了bla_(NDM)和mcr-1,包括5株bla_(NDM-5)+mcr-1和1株bla_(NDM-9)+mcr-1。表明山东青岛地区鸡源大肠杆菌耐药菌检出率较高,多重耐药现象严重;且bla_(NDM)和mcr-1存在共同传播。     

鸡源性多重耐药沙门菌质粒与耐药性相关性分析

为了解鸡源性沙门菌临床分离株多重耐药情况与质粒的携带关系,采用K-B纸片法对13株鸡源沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感性试验,通过质粒图谱检测耐药菌株质粒携带情况,分析质粒图谱和耐药谱的关系,采用0.5%SDS和43°C对分离菌进行质粒消除,根据质粒消除前后耐药谱的变化,初步对耐药基因进行定位。13株分离菌均表现为多重耐药,大部分菌株为5重及以上耐药,最主要的多重耐药谱是AMP-CIP-OFL-NOR-SXT-TET,分离菌均检测到了质粒的存在。质粒消除后,耐药谱明显变窄,耐药菌株恢复了对大多数药物的敏感性。结果表明,鸡源性多重耐药沙门菌的耐药性与质粒的携带关系密切,初步推断编码四环素、环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星的耐药基因主要存在于质粒上。     

宠物源大肠杆菌耐药性与整合子关系的研究

为阐明宠物源(犬、猫)大肠杆菌的耐药性及其与细菌携带的整合子的关系,采用CLSI (2010)推荐的纸片扩散法测定分离菌对15种抗生素的体外敏感性,以确定菌株的耐药性特点;采用PCR方法检测分离菌中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因,用HinfⅠ核酸内切酶酶切和DNA序列分析技术确定整合子阳性菌株所携带的耐药基因盒类型;采用SPSS软件分析整合子基因盒系统与菌株多重耐药的相关性.结果显示82株临床分离宠物源大肠杆菌耐药现象严重,对氨苄西林、链霉素、四环素、复方新诺明的耐药率均超过了65％.82株菌中有60株含Ⅰ类整合子,阳性率73.17％,其中有57株(95％)整合酶阳性菌株扩增出可变区,共检测出5种耐药基因盒组合形式:dfrA15、aadA22、dfrA16+aadA2、dfrA17+aadA5、dfrA12+orfF+aadA2,未检出Ⅱ、Ⅲ型整合子.通过SPSS软件分析,Ⅰ型整合子阳性菌株的多重耐药率比阴性菌株的多重耐药率高,二者差异具有统计学意义(P＜0.05),说明整合子与细菌多重耐药的发生有相关性.本试验证明Ⅰ型整合子普遍存在于宠物源大肠杆菌临床菌株中,1型整合子与宠物源大肠杆菌耐药性密切相关,在多重耐药大肠杆菌耐药机制中起重要作用.     

吉林和黑龙江两省猪鸡源产ESBLs大肠杆菌耐药检测与优势基因型分析

为了解吉林和黑龙江两省猪鸡源产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌菌株的流行分布及耐药特征,分析其优势基因型和基因亚型,依据美国临床实验室标准化委员会（CLSI）标准,对分离自吉林和黑龙江两省的210株大肠杆菌进行ESBLs表型检测,采用微量肉汤稀释法和PCR方法进行药物敏感性试验和耐药基因检测,采用SPSS软件中的卡方检验方法进行数据处理与统计分析。结果显示：①产ESBLs菌株检出率为34.76%,两省检出率差异不显著（P=0.54）,鸡源产ESBLs菌株检出率极显著高于猪源（P＜0.01）。②210株大肠杆菌对四环素（90.95%）和磺胺异噁唑（80.00%）最为耐药,鸡源大肠杆菌对13种药物的耐药率高于猪源,吉林省分离菌株对10种药物的耐药率高于黑龙江省;产ESBLs菌株对13种药物的耐药率高于非产ESBLs菌株。③210株大肠杆菌多重耐药率为83.33%,猪源菌株多重耐药率（77.57%）低于鸡源（89.32%）,差异显著（P=0.022）,但两省之间差异不显著（P=0.360）;不同动物来源、不同地区间的产ESBLs菌株多重耐药率差异均不显著（P＞0.05）。④73株产ESBLs菌株主要基因型为CTX-M型（97.26%）,其次为TEM型（50.68%）,OXA型仅在鸡源中检出,两种来源菌株中均未检出SHV型。结果表明：产ESBLs菌株在吉林和黑龙江两省的猪鸡群中均有流行,且耐药严重,鸡源菌株比猪源耐药严重;CTX-M型和TEM型为两省猪鸡源产ESBLs大肠杆菌的主要流行基因型。本研究为指导大肠杆菌病防控的临床合理用药,有效控制产ESBLs菌株流行提供了依据。     

不同省区鸡源大肠杆菌耐药性调查与系统进化群分析

为有效控制鸡大肠杆菌病,对不同省区鸡源大肠杆菌致病菌株的分布情况及耐药特征进行了调查分析,分别采用PCR法和MIC法进行了系统进化群分群检测和药敏试验,采用皮下注射进行了动物致病性试验,并采用SPSS17．0软件进行差异显著性分析。结果显示：低致病群B1（38．13％）和非致病群A（34．02％）菌株分布相对较多,其次是高致病群D（21．23％）和B2（6．16％）;鸡源大肠杆菌耐药严重,12种药物的耐药率在50％以上,多重耐药问题突出,多重耐药率高达98．86％;不同省区鸡源大肠杆菌菌株的耐药程度存在差异,个别药物（如奥格门丁、头孢噻呋等）差异显著;高致病群B2和D群菌株的耐药程度较B1和A群菌株严重,其中氧氟沙星、庆大霉素、大观霉素、头孢噻呋、磺胺异噁唑、复方新诺明、奥格门丁等7种药物差异显著（ P＜0．05）。试验表明,我国鸡源大肠杆菌高致病菌株检出率高,且耐药程度相对严重,在适宜条件下更易导致鸡群发病且较难控制。     

有机农场鸡、猪源大肠杆菌耐药性研究

为了解有机养殖模式下鸡、猪源大肠杆菌的耐药情况,2014年从广东从化某有机农场鸡、猪粪便中采集并分离出118株大肠杆菌,包括55株鸡源大肠杆菌和63株猪源大肠杆菌,采用琼脂稀释法测定大肠杆菌对18种抗菌药的敏感性。结果发现,同一有机农场中,鸡源大肠杆菌与猪源大肠杆菌在耐药种类及耐药率上均呈现相似规律,对头孢他啶、头孢喹肟、头孢噻肟、头孢西丁、阿米卡星、安普霉素、庆大霉素、新霉素、氟苯尼考、氯霉素、亚胺培南、环丙沙星、喹乙醇等较敏感(鸡0~21.8%,猪0~14.3%),对氨苄西林、链霉素呈现轻度耐药(鸡29.1%~38.2%,猪23.8%~27.0%),对复方新诺明、四环素、多西环素呈现较严重耐药(鸡45.5%、76.4%和72.7%,猪50.8%、81.0%和68.3%)。鸡源大肠杆菌中3耐及3耐以上的菌株占56.4%,猪源大肠杆菌占47.6%。结果表明有机养殖模式下鸡、猪源大肠杆菌耐药率相对较低,多重耐药现象存在但相对轻微,对个别临床常用抗菌药耐药率虽较严重但比常规养殖场低。由于目前国内大部分学者致力于研究常规养殖方式下细菌耐药情况,本研究很好地填补了有机养殖模式下畜禽大肠杆菌耐药性研究的空白。     

四川省部分地区大肠杆菌的耐药性监测

采用常规方法对87份采集于四川省部分地区规模化养猪场病料样品(51份),健康鸡(28份)和野生白鹭(8份)粪便样品进行大肠杆菌分离鉴定,并采用K irby-Bauer法对大肠杆菌分离株的26种抗菌药物耐药性进行检测。结果表明,分离鉴定的51株猪源大肠杆菌、28株鸡源大肠杆菌和8株白鹭源大肠杆菌均存在不同程度多重耐药性,3重及3重以上耐药菌株占总菌株数88.51%:其中对青霉素G(100%)、强力霉素(89.66%)、复方阿莫西林(85.20%)、四环素(82.76%)、头孢氨苄(63.22%)、头孢噻吩(52.87%),氨苄青霉素和复方新诺明(51.72%)的耐药性较强;8株野生白鹭大肠杆菌多重耐药性远低于猪源和鸡源大肠杆菌分离株多重耐药性,对受试喹诺酮类、复方新诺明等多种药物高度敏感。     

鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析

采用K-B法检测30株鸡源大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药性,根据耐药表型和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型流行情况,指导临床合理用药.结果表明,24株大肠杆菌为产ESBLs株.扩增出了与预期片段大小相符的TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型基因.有5株同时检测出TEM和CTX-M基因.产酶大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、环丙沙星的耐药率100%.其多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重.     

河南省鸡源致病性大肠杆菌耐药性的监测分析

对来源于河南省32个县市的93株鸡源致病性大肠杆菌进行了16种抗生素药物的药敏试验和菌株耐药性与质粒图谱间关系的分析研究。结果表明:93株鸡源致病性大肠杆菌均为多重耐药菌株,耐药种类3～14种,耐药图谱复杂,可以分为58种耐药类型,相同来源的大肠杆菌耐药图谱、质粒图谱相似,但菌株耐药种类与质粒图谱条带的多少无一定的相关性。     

鸡源大肠杆菌多重耐药性的监测

为了了解和掌握鸡群中大肠杆菌耐药菌株的产生情况和耐药程度,了解其对各种抗菌药物的敏感程度,自哈尔滨地区部分鸡场分离、鉴定出80株鸡源大肠杆菌临床株,采用纸片扩散法测定30株分离菌株对18种抗菌药物的敏感性。结果表明:鸡源大肠杆菌分离株对各抗生素的敏感性不同,且多重耐药现象严重;分离的菌株对阿莫西林/克拉维酸钾、氨苄西林、环丙沙星的耐药率为100%,但对氨曲南、安普霉素、多黏菌素B高度敏感,对庆大霉素、新霉素较敏感。