狮头鹅RFRPR基因克隆和组织表达

RFRPR是下丘脑神经肽促性腺激素抑制激素(GnIH)的受体,为了获取鵝RFRPR基因结构及其在各组织中的表达情况,本研究采用獅头鹅作为实验材料,采集其下丘脑、睾丸和肌肉等组织样品提取RNA逆转录后,应用RT-PCR克隆的方法对RFRPR基因进行克隆,并用RACE扩增cDNA全长序列,同时运用实时荧光定量PCR的方法检测鵝RFRPR基因的组织表达规律。结果我们获得鵝RFRPR基因4个不同转录本V1-V4,这4个转录本的编码序列一样,共1200bp,编码399个氨基酸;荧光定量检测发现RFRPR基因在鹅的12个组织中均有表达,其中,在睾丸的表达量最高,在胸肌、腿肌和小脑表达量也相对其他组织较高,而在脾脏肾脏和十二指肠中表达量较低。这些结果表明RFRPR基因可能参与调控獅头鶴的公鹅的繁殖和肌肉生长。     

扬州鹅NPFFR1基因CDS区克隆、生物信息学分析及组织表达检测

本研究旨在对鹅促性腺激素抑制激素受体基因(NPFFR1)进行克隆及生物信息学分析,并检测其在鹅不同组织中的表达。利用鸡NPFFR1基因为种子序列,采用RT-PCR方法克隆出扬州鹅NPRRF1基因,并通过相关软件对基因序列进行生物信息学分析。结果显示:共发现扬州白鹅NPFFR1基因的两种剪接形式:剪接体1的ORF大小为1 200 bp,编码399个氨基酸;剪接体2的ORF大小为432 bp,编码143个氨基酸,相对剪接体1缺失31 bp。对其进行生物信息学分析发现,鹅NPFFR1基因与鸡NPFFR1基因CDS序列同源性为92.8%,其产物是一种不稳定、疏水性蛋白,主要分布在细胞膜上;蛋白质跨膜结构预测显示鹅NPFFR1蛋白含有7个跨膜结构,属于跨膜蛋白,无信号肽片段。对产蛋末期母鹅10个组织样品的cDNA实时定量PCR结果显示,NPFFR1基因在各组织中均有表达,在下丘脑中表达最高,其次是腹脂、小肠、卵巢、胃、垂体、心脏、肌肉,在肾脏以及肝脏中表达很低。研究结果为今后探究鹅NPFFR1蛋白的相关功能及与其他蛋白质的相互作用提供了理论依据,同时为扬州鹅生殖轴调控产蛋性能的机理研究提供参考。     

鹅不同繁殖时期GnRH和GnIH基因表达和激素浓度变化分析

旨在研究GnRH和GnIH基因和激素在鹅繁殖过程中的重要作用,本研究以产蛋性能差异显著的四川白鹅和溆浦鹅为试验材料,利用Real-time RCR方法检测产蛋前期、产蛋期和休产期两种鹅的下丘脑、垂体和卵巢组织中GnRH和GnIH mRNA的表达量;利用放射性免疫和酶联免疫吸附测定法测定血清中的GnRH和GnIH激素变化情况。结果表明:GnRH和GnIH基因在四川白鹅和溆浦鹅的下丘脑、垂体和卵巢组织中均有表达;产蛋前期和产蛋高峰期的下丘脑和卵巢组织中,四川白鹅的GnRH mRNA表达量显著(P0.05)或极显著(P0.01)高于溆浦鹅,在产蛋高峰期和休产期四川白鹅GnRH激素浓度也极显著(P0.01)或显著高于(P0.05)溆浦鹅,在高峰期和休产期四川白鹅GnRH血清浓度分别为51.13和51.10pg·mL-1,溆浦鹅分别为49.52和49.94pg·mL-1;GnIH在两种鹅的变化比较一致,仅在产蛋高峰期,四川白鹅下丘脑组织中GnIH mRNA表达水平极显著低于(P0.01)溆浦鹅,而两种鹅之间的GnIH激素在各个时期均无显著差异。这提示随着繁殖阶段的改变,在调控两种鹅产蛋性能的作用过程中GnRH可能较GnIH发挥着更为重要的作用,为进一步研究鹅繁殖分子机制奠定基础。     

黄体期和卵泡期小尾寒羊DIO2与DIO3组织表达

为分析DIO2和DIO3基因在小尾寒羊不同繁殖时期(黄体期和卵泡期)下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达差异,阐明这2个基因在绵羊发情转换中的表达模式,实验采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术对比分析DIO2和DIO3基因在黄体期和卵泡期小尾寒羊下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达差异。结果表明:DIO2和DIO3基因在下丘脑、垂体、松果体、大脑、小脑、卵巢、子宫、输卵管、肾脏、肾上腺10种组织中均表达;DIO2基因在黄体期和卵泡期的垂体组织中表达量显著高于其他组织(P<0.05),其中黄体期垂体、子宫、下丘脑、松果体、输卵管和卵巢DIO2的表达量显著高于卵泡期(P<0.05);DIO3在卵泡期松果体、下丘脑、子宫、垂体和输卵管的表达量显著高于黄体期(P<0.05)。综上,DIO2能抑制绵羊发情,而DIO3促进发情。     

鸽GnIH和GnRH基因克隆及其在不同繁殖阶段下丘脑中的表达

为研究促性腺激素抑制激素（gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH）和促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone,GnRH）基因在鸽繁殖不同阶段下丘脑组织中的表达变化,探讨GnIH和GnRH基因与鸽繁殖调控之间的关系,本研究以鸽cDNA为模板扩增GnIH和GnRH基因CDS区序列并进行克隆测序,采用实时荧光定量PCR技术检测了产蛋前、产蛋后及哺乳期鸽下丘脑组织中GnIH和GnRH基因mRNA表达水平。序列分析结果表明,鸽GnIH基因CDS区全长522 bp,已提交GenBank,登录号：MG589638,编码173个氨基酸,与已知其他鸟类GnIH同源性达85%以上;鸽GnRH基因CDS区全长276 bp,已提交GenBank,登录号：MG589639,编码91个氨基酸,与已知其他鸟类GnRH同源性达80%以上。鸽GnIH前体包含1个GnIH和2个GnIH相关肽（GnIH-RP-1、GnIH-RP-2）,具有典型的"LPXRF"基序;GnRH前体包含1个信号肽、1个GnRH和1个GnRH相关肽（GAP）。实时荧光定量PCR结果表明,产蛋前鸽下丘脑中GnIH基因表达量最高,且极显著高于产蛋后和哺育期（P<0.01）;产蛋后鸽下丘脑中GnRH基因表达量最高,且极显著高于产蛋前和哺育期（P<0.01）;产蛋前鸽下丘脑中GnIH基因表达量极显著高于GnRH基因（P<0.01）,而产蛋后和哺育期鸽下丘脑中GnRH基因表达量极显著或显著高于GnIH基因（P<0.01;P<0.05）。结果表明,GnIH和GnRH基因的表达与母鸽不同繁殖阶段的转变有关,为进一步研究鸽繁殖分子机制奠定基础。     

鸽GnIH和GnRH基因克隆及其在不同繁殖阶段下丘脑中的表达

为研究促性腺激素抑制激素(gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)和促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)基因在鸽繁殖不同阶段下丘脑组织中的表达变化,探讨GnIH和GnRH基因与鸽繁殖调控之间的关系,本研究以鸽cDNA为模板扩增GnIH和GnRH基因CDS区序列并进行克隆测序,采用实时荧光定量PCR技术检测了产蛋前、产蛋后及哺乳期鸽下丘脑组织中GnIH和GnRH基因mRNA表达水平。序列分析结果表明,鸽GnIH基因CDS区全长522bp,已提交GenBank,登录号:MG589638,编码173个氨基酸,与已知其他鸟类GnIH同源性达85%以上;鸽GnRH基因CDS区全长276bp,已提交GenBank,登录号:MG589639,编码91个氨基酸,与已知其他鸟类GnRH同源性达80%以上。鸽GnIH前体包含1个GnIH和2个GnIH相关肽(GnIHRP-1、GnIH-RP-2),具有典型的"LPXRF"基序;GnRH前体包含1个信号肽、1个GnRH和1个GnRH相关肽(GAP)。实时荧光定量PCR结果表明,产蛋前鸽下丘脑中GnIH基因表达量最高,且极显著高于产蛋后和哺育期(P0.01);产蛋后鸽下丘脑中GnRH基因表达量最高,且极显著高于产蛋前和哺育期(P0.01);产蛋前鸽下丘脑中GnIH基因表达量极显著高于GnRH基因(P0.01),而产蛋后和哺育期鸽下丘脑中GnRH基因表达量极显著或显著高于GnIH基因(P0.01;P0.05)。结果表明,GnIH和GnRH基因的表达与母鸽不同繁殖阶段的转变有关,为进一步研究鸽繁殖分子机制奠定基础。     

绵羊GnIH和VIP基因在不同繁殖状态下的表达变化

旨在进一步阐明GnIH和VIP基因在绵羊季节性发情和繁殖调控中的作用。本研究选取短光照(模拟繁殖季节)和长光照(模拟休情期)下成年苏尼特母羊各3只及卵泡期和黄体期的小尾寒羊母羊各3只,同时选取短光照第21天和长光照第3、15、21、42、49天共6个不同光照时间点的成年苏尼特母羊各3只,屠宰后采集其性腺轴组织(下丘脑、垂体、松果体、卵巢、输卵管、子宫体),利用qPCR技术分析GnIH和VIP基因mRNA表达规律。结果表明,GnIH和VIP基因在2个绵羊品种上述各组织中均表达,且在下丘脑中的表达量较高;苏尼特羊下丘脑中2个基因在长光照条件下的表达量均极显著高于短光照条件(P<0.01);在小尾寒羊下丘脑组织中,黄体期VIP基因的表达量显著高于卵泡期(P<0.05),黄体期GnIH基因的表达量稍高于卵泡期,但差异不显著(P>0.05)。由短光照转至长光照时,苏尼特羊下丘脑中GnIH和VIP基因表达上升,至长光照第3天时,2个基因表达均达到峰值,之后呈下降趋势。本研究揭示了GnIH和VIP基因在季节性发情和常年发情成年绵羊性腺轴各组织中的定量表达特征,不同光照条件和不同繁殖时期绵羊下丘脑中这2个基因的表达变化进一步提示了GnIH和VIP基因参与绵羊季节性发情调控和发情时期转换;在短光照转至长光照过程中,GnIH和VIP基因主要在长光照前3 d发挥关键作用。     

武定鸡GnIH基因克隆、表达及生物信息学分析

为揭示武定鸡促性腺激素抑制激素(GnIH)基因在繁殖调控阶段的分子机理,研究采用RT-PCR法克隆了武定鸡GnIH基因的编码区序列,并利用生物信息学方法对武定鸡GnIH基因编码产物的理化特性及结构与功能进行了初步分析,采用实时荧光定量PCR分析其表达情况。结果显示,获得的武定鸡GnIH基因编码区全长为522 bp,编码173个氨基酸。生物信息学预测显示,武定鸡GnIH含有一个N端信号肽;该蛋白含有5种功能活性位点;二级结构主要由无规则卷曲和α螺旋构成,分别占41.04%和36.99%。氨基酸序列比对显示,武定鸡GnIH与其他禽类的同源性在67.6%以上。荧光定量结果显示,该基因在视神经叶和垂体组织中表达量最高。研究结果为鸡繁殖性能的研究奠定了基础。     

GnIH基因克隆、表达及对幼龄公兔生殖激素的影响

旨在获得兔促性腺激素抑制素(gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)基因，检测其在不同组织和不同发育阶段下丘脑中的表达水平，研究其对幼龄公兔生殖激素分泌的影响。本研究以90日龄健康闽西南黑兔公兔为研究对象，采用RACE技术(rapid-amplification of cDNA ends)从下丘脑组织中克隆出GnIH基因，并对序列进行生物信息学分析；采用实时荧光定量PCR方法(real-time quantitative PCR,qPCR)检测GnIH基因mRNA在90日龄公兔不同组织表达水平(n=5)及11、30、60、90、120、150日龄公兔下丘脑中的表达水平(n=6);连续10 d向80日龄公兔分别注射0、0.5、5和50μg鹌鹑GnIH相关肽(n=10)。第11天早上采集耳静脉血液后，屠宰公兔，采集睾丸组织，分别检测血清中生殖激素浓度(GnRH、FSH、LH、INHB和T)和睾丸组织中睾酮合成相关酶基因(StarR、3β-HSD和p450scc)mRNA的表达水平。结果表明，兔GnIH基因cDNA全长904 bp,包含5′UTR 41 bp...     

反季节生产技术对鹅FSHβ和FSHR基因表达的影响

为研究反季节生产技术对鹅FSHβ和FSHR基因表达的影响,选取经反季节生产技术控制的处于产蛋期和正常处于休产期扬州鹅,测定血清中FSH含量,并应用实时荧光定量PCR技术研究FSHβ和FSHR基因mRNA在下丘脑-垂体-性腺轴中的表达水平变化。结果表明,试验组(反季节生产技术控制处于产蛋期)鹅的血清中FSH水平极显著高于对照组(未调控处于休产期)鹅的血清中FSH水平(P<0.01);FSHβ和FSHR基因在垂体、下丘脑和卵巢组织中均有表达,且FSHβ在垂体中表达最高(P<0.01),FSHR基因在卵巢组织中表达最高(P<0.01);FSHβ基因在试验组鹅垂体中的表达量极显著高于其在对照组鹅垂体中的表达量(P<0.01);FSHR基因在产蛋期鹅卵巢组织中的表达极显著高于休产期鹅卵巢组织中的表达量(P<0.01)。反季节生产技术控制下鹅生殖轴组织中FSHβ和FSHR基因表达显著增加,血清中FSH测定结果与之一致,表明FSH与生殖周期密切相关。     

精胺对雌鹅卵巢生殖激素受体基因表达的影响

为研究精胺对发育早期雌鹅卵巢生殖激素受体基因表达的影响,本实验分别用禽用生理盐水和5 mg/kg体重的精胺给28日龄雏鹅连续灌胃2周后称重,采集血液和卵巢组织,统计平均日增重、卵巢指数,并利用实时荧光定量PCR检测鹅下丘脑、垂体和卵巢组织中FSHR、LHR、ER1和ER2表达量。结果表明:5 mg/kg体重的精胺灌胃对鹅体重、卵巢重和卵巢/体重比均无显著影响;灌胃精胺组雏鹅卵巢组织LHR和ER2表达量分别是对照组的4.78倍和1.65倍(P0.05)。上述结果表明,外源性精胺可促进雏鹅卵巢组织ER2和LHR的表达,提示精胺能够通过介导生殖激素受体表达影响鹅的早期卵巢发育。     

文昌鸡GnRHR基因在不同组织中差异表达的研究

采用半定量RT-PCR方法检测文昌鸡处于性腺轴(下丘脑-垂体-性腺)的不同组织中GnRHR基因的表达水平,结果表明:GnRHR基因mRNA表达于鸡的3种组织--下丘脑、垂体和卵巢;GnRHR mRNA在3种组织中的表达量不同:下丘脑和垂体中表达量较高,卵巢中表达量较弱.     

皖西白鹅催乳素受体基因表达特点的研究

采用荧光定量PCR法,研究了皖西白鹅催乳素受体基因(prolactin receptor,PRLR)在产蛋不同时期及生殖轴不同组织mRNA的表达特点。结果表明,在垂体、下丘脑和卵巢组织中,皖西白鹅产蛋前期PRLR表达水平较低,至产蛋期降至最低,抱窝期上升至极高水平,休产期再次下降至较低水平,且各组织均表现出相似的规律,但卵巢中的表达量相对较高;就巢期间,在就巢前、中、后期,PRLR mRNA表达量在各组织呈现不同的变化规律,垂体组织中表达量呈"V"形变化,在中期前下丘脑中PRLR mRNA维持稳定,到后期有所下降,卵巢中表达量呈梯形下降。PRLR mRNA表达量在不同周期及不同组织中的变化规律反应了PRLR对皖西白鹅就巢的影响,PRLR对鹅就巢的调控可能在转录时期已经开始。     

浙东白鹅催乳素受体基因的克隆及其表达特点的研究

本研究克隆了浙东白鹅催乳素受体基因（PRLR）的部分序列,并应用荧光定量PCR技术研究了浙东白鹅在产蛋期、就巢期和恢复期时PRLR基因在下丘脑、垂体和卵巢中的表达特点,结果表明,浙东白鹅PRLR基因的表达量在产蛋期、就巢期和恢复期差异显著（P〈0.05）,就巢期表达量最高,产蛋期次之,恢复期表达量最低。对不同组织PRLR的表达量分析,垂体最多,其次是下丘脑,卵巢中的表达量最低,垂体与卵巢中的表达量、卵巢与下丘脑的表达量均有极显著的差异（P〈0.01）,垂体与下丘脑中的表达量差异不显著（P〉0.05）。     

NCG对山羊性腺轴组织中ITGB8、IGFBP3基因相对表达量的影响

为了探究妊娠早期饲喂N-氨甲酰谷氨酸(N-Carbamylglutamate, NCG)提高山羊产羔数的繁殖机制,试验采用实时荧光定量PCR方法检测了ITGB8、IGFBP3基因在空白组和NCG组(0.15%NCG)卵巢、子宫、输卵管、垂体、下丘脑等性腺轴组织中的相对表达量。结果表明：ITGB8和IGFBP3基因在贵州白山羊5个组织中均有不同程度表达。相同组别不同组织比较,ITGB8基因在空白组的相对表达量为下丘脑>垂体>输卵管>子宫>卵巢,在NCG组的相对表达量为垂体>子宫>下丘脑>输卵管>卵巢;IGFBP3基因在空白组和NCG组中的表达趋势均为子宫>卵巢>输卵管>下丘脑>垂体。相同组织不同组间比较,ITGB8基因在NCG组垂体、卵巢、输卵管、子宫组织中的相对表达量极显著低于空白组(P<0.01),在下丘脑中两组间差异不显著(P>0.05);IGFBP3基因在NCG组垂体、卵巢、输卵管、子宫组织中的相对表达量均极显著低于空白组(P<0.01),在下丘脑中两组间差异不显著(P>0.05)。说...     

鹅GnIH基因克隆及其在卵泡发育中的表达规律研究

为研究促性腺激素抑制激素(Gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)基因表达与鹅卵泡发育间的关系,对鹅GnIH基因的CDS区序列进行了克隆与分析,并采用荧光定量PCR检测了该基因在产蛋高峰期鹅的不同大小卵泡中的表达量.序列分析结果表明,所获得的鹅GnIH基因CDS区长471 bp,编码157个氨基酸,与已知的其它鸟类GnIH相似性达87％.鹅GnIH前体包括3个“LPLRF”,具有典型的“LPXRF-酰胺”基序.荧光定量结果表明,鹅GnIH在所有不同大小的卵泡中均有表达,其表达量在卵泡发育过程中呈现规律性变化,总趋势是先增高后降低,且在直径4～5 mm的卵泡中表达量最高.研究结果显示,鹅卵泡GnIH基因的表达与卵泡选择性发育有关,且该选择过程可能发生在直径为4～5mm的卵泡.这一研究可为探讨季节性繁殖禽类卵泡发育的调控机理奠定基础.     

雪山草鸡PRL基因的表达差异及其对繁殖性能的影响

从880只250日龄雪山草鸡中选取处于产蛋期、就巢期和恢复期的鸡各20只,屠宰采集下丘脑、垂体、输卵管和卵巢,用荧光实时定量PCR法检测其中催乳素基因mRNA的表达水平,并与繁殖性能进行相关分析,结果表明:PRL基因在4个组织中都有表达,但在垂体中的表达极显著高于其他组织(P<0.01),而且在其他3个组织之间PRL的表达差异并不显著(P>0.05);就巢期鸡PRL基因在垂体中的表达量显著高于产蛋期鸡和恢复期鸡(P<0.05),而在下丘脑、输卵管和卵巢3个组织中3组个体PRL基因的表达量差异不显著(P>0.05);PRL在垂体的表达与种鸡的繁殖性能旱负相关,相关系数为-0.328(P<0.05).     

黔北麻羊GPx3基因克隆、生物信息学分析及在不同性腺组织中的表达分析

为探究GPx3基因在产单、多羔黔北麻羊不同性腺组织中的表达规律及其蛋白质的结构与功能,本实验以黔北麻羊为研究对象,采集单、多羔黔北麻羊的下丘脑、垂体、子宫、输卵管和卵巢提取总RNA,运用qRT-PCR技术,分析GPx3基因mRNA在单、多羔黔北麻羊5个不同性腺组织中的表达水平;PCR法扩增克隆黔北麻羊GPx3基因的CD...     

NAC饲喂对努比亚山羊LIF和HOXA10基因在性腺轴组织表达的影响

N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）是一种抗氧化剂，对动物的繁殖性能具有重要作用。本研究以努比亚山羊为研究对象，采用实时荧光定量PCR技术检测LIF和HOXA10基因在正常饲喂组（空白对照组）和0.07%NAC饲喂组（实验组）性腺组织卵巢、输卵管、下丘脑、子宫和垂体中的表达变化。结果表明：LIF和HOXA10基因在5个组织中均有表达；LIF基因在对照组下丘脑中表达量最高、输卵管中表达量最少，在实验组卵巢中表达量最高、下丘脑中表达量最少；实验组中卵巢LIF基因的表达量显著高于对照组，而下丘脑中LIF基因的表达量显著低于对照组；HOXA10基因在对照组下丘脑中表达量最高、输卵管和垂体中表达最少，在实验组卵巢中表达最高、垂体中表达最少；实验组中卵巢HOXA10基因的表达量显著高于对照组，垂体中HOXA10基因的表达量显著低于对照组。研究结果揭示0.07%NAC可促进努比亚母山羊妊娠前期LIF和HOXA10基因在卵巢、输卵管和子宫中的表达，下调LIF和HOXA10基因在下丘脑和垂体中的表达。本研究结论为进一步研究NAC对山羊繁殖性能的影响提供基础资料。     

产蛋前期和产蛋期鹅HPG轴褪黑素受体mRNA表达规律的研究

为阐明不同繁殖阶段鹅HPG轴褪黑素受体mRNA表达的变化规律,应用实时荧光定量PCR技术检测产蛋前期和产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体、卵巢组织中3种褪黑素受体亚型(Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c)mRNA相对表达量。结果表明:产蛋前期鹅下丘脑Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的5.25倍(P<0.01)、0.43倍(P<0.01)和1.20倍(P<0.01);产蛋前期鹅垂体Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的3.01倍(P<0.01)、7.51倍(P<0.01)、7.25倍(P<0.01);产蛋前期鹅卵巢组织中Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的1.55倍(P<0.01)、0.55倍(P<0.01)、2.86倍(P<0.01)。以上结果提示,褪黑素可通过其特异性受体的介导在HPG轴的各级水平发挥其调节作用,并且下丘脑褪黑素主要通过Mel-1a介导、垂体褪黑素主要通过Mel-1b和Mel-1c,卵巢褪黑素主要通过Mel-1a和Mel-1c介导来发挥其调控作用。