甘蓝根肿病接种方法的研究

分别比较了菌土接种、蘸根接种对发病的影响,结果显示菌土接种的发病最严重;在接种浓度试验中,浓度越高,发病越重;对不同的根肿菌进行接种比较发现重庆涪陵地区的根肿菌比成都地区根肿菌致病性强,以涪陵地区的根肿菌作为菌源,验证了2个抗病材料99033,99037和2个感病材料99076,99046.并根据实践建立了一套新的田间单株病情分级标准.     

塘泥土对油菜根肿病的影响

通过盆栽接种试验研究了塘泥土对油菜根肿病发生的影响,结果表明,添加塘泥能缓解稻田土中油菜根肿病的发病。在无病稻田土中添加塘泥,根肿菌休眠孢子接种浓度≤10~3个/g土时防效100%,根肿菌休眠孢子接种浓度为10~4个/g土和10~5个/g土时防治效果分别为50%和56%;在带病稻田土中加入塘泥也可以显著降低油菜根肿病发病率和病情指数,接种根肿菌休眠孢子0个/g土和105个/g土条件下防治效果分别为100.00%和40.43%。     

小白菜根肿病接种鉴定研究

为了解十字花科根肿病对小白菜生长的影响,为小白菜根肿病研究提供参考,采用注射法、菌土法和蘸根法进行小白菜根肿菌接种,并使用最佳接种方法在小白菜不同生长期对其接种,进行了小白菜根肿病发病调查时期比较以及小白菜不同浓度根肿菌接种比较等试验。结果表明:注射法以69.44%的发病率、高达60.71%的病情指数以及操作简便的特点,更适合大量材料的接种鉴定;小白菜的整个生长期都能感病,且受侵染越早,发病率和病情指数越高;小白菜接种根肿菌30 d时根部能够观察到明显的根肿,且接种时间越久,病情指数越高;根肿菌接种浓度在1×106个/g(干土)时能够引起小白菜76.67%的发病率,病情指数为55.71%。     

菌土接种法在香蕉枯萎病苗期抗性评价中的应用及效果

【目的】建立一套稳定可靠且更符合自然条件下发病的香蕉枯萎病苗期抗性鉴定方法,为香蕉枯萎病抗性种质的筛选评价提供参考。【方法】以尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种(Fusarium oxysporum f. sp. cubense 4,Foc4)为供试病原菌,分别采用伤根淋菌接种法、浸根接种法及菌土接种法接种感病香蕉品种巴西蕉,比较分析不同处理种植基质中病原菌孢子浓度的动态变化及植株发病情况,优选最佳的接种方法。采用Foc4不同孢子浓度菌土接种抗、感种质材料,统计发病情况,比较抗性评价效果;应用菌土接种法对31份香蕉种质进行枯萎病苗期抗性鉴定,考察其评价效果。【结果】采用不同接种方法,巴西蕉杯苗种植基质中Foc4孢子浓度变化、发病率和病情指数存在较大差异,其中,采用菌土接种法,种植基质中Foc4孢子浓度稳定保持在原始接种浓度1.0×10⁶～1.1×10⁶个/g土;采用浸根接种法,种植基质中Foc4孢子浓度呈先升后降的变化趋势,并于21 d达最大值(1.0×10⁶个/g土),28 d降至0.5×10⁶个/...     

芸薹根肿菌侵染过程及影响因子研究

借助水培法,观察芸薹根肿菌侵染结球白菜过程,确定芸薹根肿菌早期侵染部位及侵染时间;以结球白菜根毛被侵染数为指标,比较休眠孢子提取前处理方式、培养液p H值,孢子接种浓度、光照时间对根肿菌早期侵染的影响。结果表明:芸薹根肿菌早期侵染0~3 cm段根毛,1~2 cm段皮层,根毛与皮层均在第5天观察到游动孢子囊,皮层侵染点峰值晚于根毛。肿根腐烂、光照12 h/d、接种孢子浓度1×105个/m L、p H值4.2为芸薹根肿菌最佳侵染条件。     

生姜枯萎病病原菌的分离鉴定及其接种浓度对生姜枯萎病发生程度的影响

从山东平度连作的生姜枯萎病病株中分离得到1株菌株,通过形态学鉴定、rDNA-ITS区序列分析和回接试验确认该菌株为生姜枯萎病病原菌。采用盆栽试验,在健康土壤中接种不同浓度的病原菌孢子悬液研究不同接种浓度对生姜枯萎病发生程度的影响。结果表明:每克土病原菌孢子数量103是导致生姜植株发病的临界浓度,当每克土接种数量不高于105时,病情指数随接种浓度增加而显著增加;当每克土接种数量高于105时,病情指数不再显著增加;随着每克土中接种的病原菌孢子数量的增加,各处理根际土壤中的尖孢镰刀菌数量也增加,且根际土壤中尖孢镰刀菌数量均显著高于土体土壤,根际土壤中尖孢镰刀菌数量是土体土壤的1.19~1.86倍。结论:根际和土体土壤中的尖孢镰刀菌数量共同决定生姜植株是否发生枯萎病,但发病程度的高低受根际土壤中尖孢镰刀菌数量的影响。     

生姜枯萎病病原菌的分离鉴定及其接种浓度对生姜枯萎病发生程度的影响

从山东平度连作的生姜枯萎病病株中分离得到1株菌株,通过形态学鉴定、rDNA-ITS区序列分析和回接试验确认该菌株为生姜枯萎病病原菌。采用盆栽试验,在健康土壤中接种不同浓度的病原菌孢子悬液研究不同接种浓度对生姜枯萎病发生程度的影响。结果表明:每克土病原菌孢子数量103是导致生姜植株发病的临界浓度,当每克土接种数量不高于105时,病情指数随接种浓度增加而显著增加;当每克土接种数量高于105时,病情指数不再显著增加;随着每克土中接种的病原菌孢子数量的增加,各处理根际土壤中的尖孢镰刀菌数量也增加,且根际土壤中尖孢镰刀菌数量均显著高于土体土壤,根际土壤中尖孢镰刀菌数量是土体土壤的1.19~1.86倍。结论:根际和土体土壤中的尖孢镰刀菌数量共同决定生姜植株是否发生枯萎病,但发病程度的高低受根际土壤中尖孢镰刀菌数量的影响。     

温室检测棉花黄萎病抗性的4种接种方法比较

以陆地棉和海岛棉共31个棉花品种为材料,采用了温室棉花抗黄萎病鉴定中常用的4种接种方法,同时与病圃的剖秆病指做比较,分析比较不同接种方法的优缺点。结果表明,切根蘸菌法是相对较好的接种方法;叶片针刺涂抹法发病最快,接种24 h后即可发病,并且发病比较均匀,接种10 d后发病显著;切根蘸菌法发病速度仅次于叶片针刺涂抹法,接种10 d后开始出现症状;定量法发病比切根蘸菌法慢,接种15 d后才发病,而且发病不均匀;菌液浇根法发病速度最慢,发病也比较轻,接种后20 d左右才出现症状,50 d后才达到发病高峰。与病圃品种抗病性鉴定结果相比,切根蘸菌法一致性最高达到93.5%,菌液浇根法最差,只有71.0%的棉花品种抗性与病圃鉴定结果一致。通过4种接种技术得到的鉴定结果,海岛棉的病指都高于病圃鉴定的病指。     

乐都长辣椒疫病接种鉴定技术研究

由试验结果可知,发病率与接种浓度、接种体积等因素有关.在相同浓度下,茎部贴菌片法发病较灌根接种法发病重、病指高;灌根接种法则具有操作方便,也可定株、定量的优点,不同的接种浓度对辣椒疫病发病有显著影响,接种孢子囊浓度7000个/ml、接种体积5ml最佳.     

基于LC-MS技术的代谢组学方法研究根肿菌对拟南芥代谢的影响

为探寻根肿菌侵染拟南芥后期寄主代谢的生物标志物,将罹患根肿病的油菜根切块进行组织培养,获得较为纯化的、单一的根肿菌接种体,与拟南芥种子在1/2MS培养基上共培养,利用液相色谱-质谱联用(LCMS)技术的非靶向代谢组学方法分析根肿菌侵染后期拟南芥根部代谢物差异。组织培养结果表明,根肿菌可以在愈伤组织中生长和繁殖;共培养结果显示45d后拟南芥侧根尖端肿大,显微观察显示根肿菌能完成侵染循环;代谢组数据PCA和PLS-DA分析结果显示试验组(接种根肿菌)和对照组(未接种根肿菌)明显分离;OPLSDA分析和t检验结果表明重要的差异代谢物包括油菜素内酯、类黄酮、木质素、萜类、甾体皂苷和磷脂等物质。提示这些物质可能在根肿菌侵染后期时拟南芥与根肿菌的相互作用中起重要作用。     

河南省大白菜根肿病菌生理小种鉴定

为了明确河南省大白菜根肿病菌的生理小种类型,从新野县十字花科蔬菜种植基地采集2份大白菜根肿病菌样品(XY-1为原始菌,XY-2为新引菌),采用菌液注射接种法,利用Williams和ECD 2套鉴别系统分别对其进行生理小种鉴定。结果显示,采用Williams鉴别系统鉴定的2份大白菜根肿病菌生理小种相同,均为4号生理小种;采用ECD鉴别系统鉴定的大白菜根肿病菌生理小种明显不同,原始菌XY-1为ECD16/15/31,新引菌XY-2为ECD21/31/31,后者较前者的致病性更强。以上结果表明,Willams鉴别系统有一定的局限性,当病原菌致病力强于4号生理小种时无法区分,而ECD鉴别系统由于所用寄主数量及种类较多,可以将4号生理小种进一步区分为不同的类型,鉴定结果更为精确。     

毕节市白菜黑斑病的病害研究及病原鉴定

[目的]对贵州省毕节市的白菜黑斑病进行病害分析和病原鉴定,以提出相应的预防措施。[方法]采用表面组织分离法从病叶中分离得到病原菌,并对病原菌进行培养、镜检、孢子大小测定和鉴定。[结果]显微镜镜检的病原菌特征表明,引起白菜黑斑病的病原菌是链格孢菌（Alternariasp.）,病原菌的孢子大小为（15.0～38.5）μm×（7.5～13.5）μm,结合寄主和病原特征,引起白菜黑斑病的病原菌被鉴定为芸薹生链格孢（Alternaria brassicicola）。[结论]芸薹生链格孢为贵州省毕节市当前白菜黑斑病的病原菌,可以通过农业措施和药剂预防来减少该病的危害。     

Change of 3 Kinds of Enzyme Activity and Soluble Sugar in 3 Chinese Cabbage Varieties with Different Resistance Level During the Process of Plasmodiophora brassicae Infecting Their Roots

There are different levels of resistance in Chinese cabbage varieties against clubroot.The content of catalase(CAT),peroxidase(POD),phenylalanin ammonia-lyase(PAL),Super Oxide Dismutase(SOD)and soluble sugar activities of 3cultivars with different clubroot-resistant levelswere detected after inoculation in this study.The results suggest that the changing rates of CAT,PAL and SOD contents of resistance cultivars after inoculation were higher than those of susceptible cultivars(Baigengbaiye>Zaobaicaitai>Huangjinxiaobaicai);the POD activities of resistance cultivars reached a peak on an earlier day than those of susceptible cultivars;the increasing rate of soluble sugar of susceptible cultivars was higher than that of the resistance cultivars,and ended with two peaks.Therefore,the four enzymes(CAT,POD,PAL and SOD)and soluble sugar may be used as physiological and biochemical reference indexes for the resistance identification to clubroot after inoculation with P.brassicae.     

十字花科蔬菜品种对根肿菌4号和9号小种的抗性

依据江西省内根肿病菌的生理小种类群分布,分别在婺源县4号小种区域和南昌县9号小种区域设立田间病圃,于2016年9—12月对108个十字花科蔬菜(花椰菜、包菜、萝卜、大白菜、小白菜)品种进行抗性鉴定,并随机选取其中29个品种进行人工接种鉴定。结果表明:十字花科不同种间蔬菜对根肿菌不同小种的抗性存在差异,种内品种对同一小种的抗性也存在差异;花椰菜、包菜和萝卜对9号小种均有抗性,上海黑叶五月慢、新奶白、京绿乌塌菜3个小白菜品种和京夏王、北京桔红心、京春娃2号等13个大白菜品种对9号小种有抗性;参试品种对4号小种的抗性不如对9号小种的,但仍筛选到紧花6、紧花16、松花2等10个花椰菜品种和满堂红萝卜品种可在4号小种区域种植。     

湖南栽培油菜品种抗根肿病的鉴定

采用温室人工接种和田间病圃自然诱发鉴定方法,对湖南近年栽培的100个油菜品种进行抗根肿病鉴定。结果表明,100个油菜品种对根肿病的抗性存在差异,即便同一品种对不同地区的根肿病菌的抗性表现也有所不同;温室人工接种时,有57个油菜品种表现抗根肿病;在沅陵和衡阳病圃田间自然诱发抗性鉴定中,分别有45个和8个表现抗病。综合温室和田间病圃抗性鉴定结果,有7个油菜品种表现抗病,即亮景811、中研油1号、华信402、沣油737、宝油150、油研九号和嘉油1427。     

白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae）菌丝生长和毒素产生条件的研究

对白菜黑斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｂｒａｓｓｉｃａｅ）不同菌株的营养生长和产毒条件的研究结果表明，白帮菌系（ＡＢＷ）与青帮菌系（ＡＢＧ）的生物学特性有一定的差异，同一菌系菌株间差异不显著，其中ＡＢＷ菌丝生长的最佳条件是２０～２２℃、ｐＨ４、光照１２ｈ／ｄ、间歇振荡和以蔗糖（浓度为３％）为Ｃ源；而毒素产生的最佳条件是１３～１５℃、ｐＨ６、黑暗、静止和以葡萄糖（浓度为１０％）为Ｃ源。ＡＢＧ菌丝生长的最佳条件是１３～１５℃、ｐＨ４、光照１２ｈ／ｄ、全天振荡和以蔗糖（浓度为３％）为Ｃ源；而毒素产生的最佳条件是１３～１５℃、ｐＨ４、黑暗、静止和以葡萄糖（浓度为５％）为Ｃ源。研究还发现，相同条件下ＡＢＧ的菌丝生长速度均大于ＡＢＷ，而产毒量却较为复杂。青帮品种比白帮品种白菜更易感染白菜黑斑病菌。此外，白菜黑斑病菌生长后的改良Ｆｒｉｅｓ培养基ｐＨ值均有变小的趋势，而且随着菌丝生长量的增加变化幅度逐渐增大。     

甘蓝枯萎病苗期抗病性鉴定方法

以4种田间不同抗枯萎病类型甘蓝品种幼苗为试材,以分离甘蓝枯萎病病原菌悬浮液为接种菌液,筛选苗期抗病性鉴定最适接种浓度、最佳方法和最适苗龄;确定植株感病级别划分指标,判断抗病类型。结果表明,甘蓝枯萎病苗期抗病性鉴定最适接种浓度5×106孢子·mL~(-1);比较灌菌液法、菌土法和浸根法3种接种方法,菌土法接种可更准确反映不同抗病性品种枯萎病发病程度和抗病类型;在子叶期、一叶一心期、二叶一心期、三叶一心期不同幼苗期接种,后两个时期特别是二叶一心期为最佳接种期;依据幼苗植株叶脉黄化程度,植株叶片褪绿、萎蔫甚至枯死等发病主要症状,将甘蓝感病幼苗划分为6个级别。由此确定甘蓝枯萎病苗期抗病性鉴定方法:种子消毒育苗,待幼苗长至二叶一心期时,采用幼苗轻微伤根、菌土法,接种5×10~6孢子·mL~(-1)枯萎病菌液,16 d后调查统计幼苗植株发病程度和感病级别数量。     

根肿病菌核糖体基因ITS区段的克隆测序及其在检测中的应用

 应用真菌核糖体基因ITS区段通用引物ITS1和ITS4,对十字花科蔬菜根肿病菌（Plasmodiophora brassicae）rDNA进行PCR扩增,并将扩增到的目的片段克隆到pGEM-T载体上。对重组克隆进行测序和碱基编码结构特点分析,结果表明:十字花科蔬菜根肿病菌ITS1区长141 bp,5.8 S区长160 bp,ITS2区长187 bp,rDNA总长为488 bp. 根据此序列设计一对根肿病菌特异性寡聚核苷酸引物（前引物:5’AGG TGA ACC TGC GGA AGG AT 3’和后引物:5’TTC AGC GGG TAA TCC TAC CT 3’）,应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）技术,对分离自十字花科蔬菜（白菜、青菜、甘蓝、芥蓝、花椰菜等）根肿病菌全基因组DNA进行特异性扩增试验。试验结果表明,该对引物能从十字花科根肿病菌全基因组DNA中扩增到约500 bp长度的分子片段,而对照菌株和健康对照则无扩增产物。该实验结果对有效追踪根肿病菌在田间的发生动态监测和预测预报提供了重要的信息和手段。     

Effects of different rotation patterns on the occurrence of clubroot disease and diversity of rhizosphere microbes

Clubroot disease, caused by Plasmodiophora brassicae, is one of the most destructive soil-borne diseases in cruciferous crops worldwide. New strategies are urgently needed to control this disease, as no effective disease-resistant varieties or chemical control agents exist. Previously, we found that the incidence rate and disease index of clubroot in oilseed rape decreased by 50 and 40%, respectively, when oilseed rape was planted after soybean. In order to understand how different rotation patterns affect the occurrence of clubroot in oilseed rape, high-throughput sequencing was used to analyze the rhizosphere microbial community of oilseed rape planted after leguminous(soybean, clover), gramineous(rice, maize) and cruciferous(oilseed rape, Chinese cabbage) crops. Results showed that planting soybeans before oilseed rape significantly increased the population density of microbes that could inhibit P. brassicae(e.g., Sphingomonas, Bacillus, Streptomyces and Trichoderma). Conversely, consecutive cultivation of cruciferous crops significantly accumulated plant pathogens, including P. brassicae, Olpidium and Colletotrichum(P0.05). These results will help to develop the most effective rotation pattern for reducing clubroot damage.     

福建地区不结球白菜黑腐病病原菌的分离与初步鉴定

为鉴定福州地区不结球白菜黑腐病致病菌,以感染黑腐病的不结球白菜植株为材料进行了病原菌分离和鉴定。通过观察所分离病原菌的形态及接种试验发现其形态和发病症状与黑腐病的形态和发病症状相一致。以细菌通用引物16S对该病原菌进行16SrDNA的PCR扩增测序分析,发现该病原菌与野油菜黄单胞菌(Genbank:CP017308.1)16SrDNA序列同源性为99.8%。从接种病原菌植株中重新分离病原菌,其16SrDNA序列与之前接种菌株序列一致。以上结果初步证明分离的病原菌为不结球白菜黑腐病病原菌,且该病原菌为十字花科黑腐病野油菜黄单胞菌野油菜致病种。