百合抗尖孢镰刀菌无性系的离体筛选

以百合品种元帅(Acapulco)、卡萨布兰卡(casablanca)的愈伤组织为试验材料,附加不同浓度的枯萎病菌毒素粗提液,用于抗尖孢镰刀菌无性系的离体筛选.结果表明,以体积分数75%的毒索培养基上培养10d作为百合抗尖孢镰刀菌无性系筛选的选择压比较适宜,抗镰刀菌无性系的再生苗生长正常,叶片中过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性均比未经筛选的对照株高,经人工接种枯萎病菌鉴定,2个百合品种抗尖孢镰刀菌无性系的再生植株均表现中抗枯萎病.     

生姜茎尖脱毒培养研究

以生姜茎尖为外植体进行培养,筛选诱导愈伤组织和芽分化的最佳培养基。结果表明,消毒时间对茎尖成活率影响很大,以0.1%HgCl2消毒10 min最为有效。不同的激素配比对生姜试管苗再生诱导有明显影响,诱导茎尖愈伤组织生长及分化的最适培养基为1/2MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,丛生芽继代培养增殖效果较好的培养基为1/2MS+BA2.5mg/L+NAA0.1 mg/L+KT1.0 mg/L。     

中香梨的离体培养研究

[目的]对中香梨的离体培养进行研究。[方法]以中香梨茎尖和嫩叶为外植体,筛选适合中香梨茎尖培养及叶片愈伤组织诱导的最佳培养基。[结果]中香梨茎尖培养的最佳培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂;叶片的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IBA+40 g/L蔗糖+6 g/L琼脂。[结论]通过茎尖培养可很快获得中香梨植株,但从愈伤组织诱导植株较为困难。     

药用植物草麻黄细胞的悬浮培养

[目的]对草麻黄的子叶诱导出的愈伤组织,进行悬浮培养。[方法]采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织继代和悬浮培养研究。[结果]MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA为诱导子叶形成愈伤组织的理想培养基;MS+1.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L6-BA是愈伤组织的适宜继代培养基;2.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+300 mg/L水解酪蛋白(CH)是愈伤组织悬浮培养的适宜培养基,愈伤组织干重增加量为0.80 g。[结论]初步选择出草麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养条件,为麻黄细胞扩大培养及有效成分提取奠定基础。     

野葛(Pueraria lobata)愈伤组织诱导及组织培养

以野葛茎尖分生组织为外植体,通过不同激素与MS培养基配比试验,筛选出野葛茎尖分生组织愈伤组织诱导与植株再生的最适培养基,建立野葛植株再生体系.试验结果表明:茎尖分生组织在MS+2,4-D 0.5 mg/L培养基上启动诱导愈伤组织,再转移到MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L继续诱导,愈伤组织诱导率高,繁殖能力旺盛.在MS+6-BA 1 mg/L培养基上愈伤组织分化率100%,生长能力较强.在MS+NAA 0.1 mg/L培养基上,诱导生根率达到60%.     

小叶女贞愈伤组织培养技术研究

探讨小叶女贞愈伤组织最佳培养条件,为进一步建立悬浮培养体系奠定基础。通过选取小叶女贞幼嫩外植体接种于不同植物生长调节剂的MS培养基中,进行愈伤组织诱导与增殖研究,以纯化的愈伤组织建立悬浮细胞系。结果表明,小叶女贞愈伤组织最适诱导培养基为MS+2,4-D 0.3 mg/L+6-BA 1.5 mg/L,初期增殖培养基为MS+2,4-D 0.3 mg/L+6-BA 1.5 mg/L,长期继代培养基为MS+2,4-D 1.5 mg/L+6-BA0.3 mg/L,可获得疏松的愈伤组织。结果表明,小叶女贞通过外植体诱导与增殖愈伤组织,可建立悬浮细胞系。     

生物工程应用于作物育种的试验研究 第5报 水稻抗稻瘟病细胞突变体的筛选

以稻瘟病病原菌毒素滤液为选择压力,在水稻种胚愈伤组织的诱导.继代和分化过程中,筛选出一批水稻抗病细胞突变体。稻瘟病病原菌毒素滤液可代替孢子悬液直接用于抗病细胞突变体筛选与鉴定。在愈伤组织诱导培养基中加入45％的毒素滤液,或在愈伤组织诱导培养基与分化培养基均加入30％或45％的毒素滤液,效果较好。经毒素处理筛选出的绿苗,其后代有一部分无性系的抗病性是稳定的,可供选择利用;过氧化物酶同工酶与植株和愈伤组织的抗病性有关,可作为选择抗病突变体的指标。本文还对完善这项试验及与水稻育种有关的问题,进行了初步讨论。     

凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织的制备研究

目的 研究凹叶厚朴适用于细胞悬浮培养的愈伤组织。方法 通过对基本培养基（B₅、MS和1/2MS）、外植体（茎段、顶芽和叶片）、激素浓度及组合进行筛选的方法进行厚朴愈伤组织诱导和继代研究。结果 B₅ 为最适合厚朴愈伤组织诱导的基本培养基;顶芽是最佳诱导愈伤组织的材料;最适合厚朴愈伤组织诱导的培养基为B₅+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA;最佳继代培养基为B₅+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,愈伤组织生长倍数达到2.87倍。结论 初步筛选出凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织,为凹叶厚朴细胞培养奠定基础。     

8种杀菌剂对芝麻尖孢镰刀菌的室内毒力测定

[目的]筛选出防治芝麻枯萎病的有效化学药剂.[方法]采用菌丝生长速率法测定8种杀菌剂对芝麻尖孢镰刀菌的抑制作用.[结果]室内毒力测定结果表明,8种杀菌剂在试验浓度下对芝麻尖孢镰刀菌的生长均有一定的抑制作用.氟硅唑对病菌的抑制作用最强,EC50仅为0.232 mg/L;其次是吡唑醚菌酯,EC50为0.759 mg/L,此外多菌灵和苯醚甲环唑对芝麻尖孢镰刀菌也有很强的抑制作用.[结论]为药剂混配和防治芝麻枯萎病提供药剂筛选的理论依据.     

绿萝离体快繁体系的建立及其甲基磺酸乙酯诱变条件

为了探究绿萝离体再生的最适条件和甲基磺酸乙酯(ethyl methane sulphonate,简称EMS)诱变绿萝的合适剂量,首先以绿萝叶柄为材料进行离体培养.结果表明,用叶柄诱导愈伤组织的最适培养基为MS+0.5 mg/L噻苯隆(TDZ)+0.3 mg/L萘乙酸(NAA),不定芽分化最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)+0.5 mg/L NAA,生根最适培养基为1/2MS+0.05 mg/L NAA.然后设置不同剂量的EMS诱变绿萝叶柄愈伤组织,并对其存活率、致死率进行统计,初步获得EMS诱变绿萝愈伤组织的半致死条件:0.6％EMS诱变处理4 h或0.8％EMS诱变处理2 h.研究结果对于今后利用EMS诱变绿萝愈伤组织、筛选性状优良的突变体具有重要意义.     

毒素-MS培养法鉴定百合对尖孢镰刀菌的抗性

为了在我国丰富的百合资源中筛选出高抗尖孢镰刀菌的种质,以宜昌百合(Lilium leucanthum)为材料,通过在培养基中加入不同体积质量浓度的尖孢镰刀菌毒素培养百合组培苗,建立了高效的由尖孢镰刀菌引起的百合抗鳞茎腐烂病的鉴定体系,即在MS附加0.2mg·L-2 6-BA+0.5mg·L-2NAA+蔗糖3%+琼脂6%,p H 5.8的培养基中,加入100 mg·L-2的尖孢镰刀菌毒素,接种百合组培苗,观察发病情况与计算病情指数来确定百合材料的抗病能力。以此鉴定体系对20份百合材料进行抗病性鉴定,结果表明:‘初夏’、药百合、淡黄花百合、岷江百合、‘雨荷’、毛百合等为高抗种质,适合选为抗性育种亲本;南川百合、川百合、通江百合、卷丹为中抗种质;卷丹栽培品种、青岛百合、野百合、渥丹、‘金角’和‘布鲁内罗’为中感种质;野百合(丹东种源)、宜昌百合、细叶百合等为高感种质。此结果为百合抗性育种中亲本的选择提供了重要参考。     

郑麦9023胚性悬浮细胞系的建立和植株再生

为建立高效稳定的小麦遗传转化体系,以小麦郑麦9023的幼胚为外植体诱导愈伤组织,研究了培养基中不同质量浓度2,4-D、KT对愈伤组织诱导和愈伤组织继代培养的影响,进而完成整个植株再生的进程。结果表明:以小麦郑麦9023的幼胚作为外植体来诱导愈伤组织,诱导效果最好的培养基是含有3.0 mg/L 2,4-D的MS培养基,出愈率最高达92.5%;愈伤组织进行继代培养的最佳培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮系继代时间为16 d;悬浮系中的成熟胚在基本培养基上可以发育成正常的植株。所建立的悬浮系可以用来进行小麦基因工程遗传改良和体细胞无性系突变体的筛选。     

木薯叶片愈伤组织对枯萎病病原菌的抗性筛选

以木薯品种"GR911"、"面包木薯"试管苗叶片为材料,研究木薯枯萎病病原菌粗提物对愈伤组织增殖与分化的影响,以期建立枯萎病病原菌粗提物为选择压力的木薯离体抗病筛选体系。结果表明:所用品种幼叶愈伤诱导与增殖的适宜配方为改良的MS培养基+0.5-0.75mg/L2,4-D;愈伤分化适宜配方为的MS培养基+0.75-1.0mg/LZT。"GR911"与"面包木薯"愈伤增殖过程中,愈伤褐化率达到50%所需的细菌液粗提物浓度分别为5.5×106、2.5×106cfu/mL;愈伤组织分化过程中,愈伤褐化率达到50%所需的菌液粗提物浓度分别为7.0×106、4.0×106cfu/mL。通过建立木薯愈伤组织离体抗病筛选体系,为木薯无性系变异育种奠定基础。     

不同因素对淮山茎尖愈伤组织诱导的影响

以3个淮山品种为材料,比较不同培养基及培养条件对淮山茎尖愈伤组织诱导的影响。结果表明,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 2.0mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂4.0 g/L是诱导淮山茎尖愈伤组织较好的培养基,诱导率达88.9%;光照与黑暗两种不同的培养条件对愈伤组织的诱导无显著差异。     

野葛(Pueraria lobata)愈伤组织诱导及组织培养

以野葛茎尖分生组织为外植体,通过不同激素与MS培养基配比试验,筛选出野葛茎尖分生组织愈伤组织诱导与植株再生的最适培养基,建立野葛植株再生体系。试验结果表明:茎尖分生组织在MS 2,4-D 0.5 mg/L培养基上启动诱导愈伤组织,再转移到MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.5 mg/L继续诱导,愈伤组织诱导率高,繁殖能力旺盛。在MS 6-BA 1 mg/L培养基上愈伤组织分化率100%,生长能力较强。在MS NAA 0.1 mg/L培养基上,诱导生根率达到60%。     

叶用芥菜细胞悬浮培养的研究

以叶用芥菜的子叶为外植体,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系进行了研究.结果表明,愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D,愈伤组织最佳增殖培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D.悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养2～10 d达对数生长期.将小细胞团接种于Ms+1.0 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA分化培养基上,继代两次后,分化出芽,分化芽在培养基MS+0.1 mg/L NAA上诱导生根,形成小植株.     

越南紫薯胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎形成

【目的】越南紫薯〔Ipomoea batatas（L.）Lam〕品质优良,薯块均匀,商品性好,但产量偏低,产量性状亟待遗传改良,体细胞胚胎发生是快速繁殖和保持种性稳定的基础,对紫薯的遗传改良有重要意义。采用激素处理越南小紫薯外植体,研究越南紫薯的体细胞胚胎再生途径,为通过体细胞无性系变异筛选紫薯高产优质新材料提供新方法。【方法】以市场销售的越南紫薯为材料,以叶片和茎段作外植体,探讨植物生长调节物质种类（6-BA、NAA、2,4-D、ABA）及配比对越南紫薯培养的影响,建立越南紫薯体细胞胚胎发生及再生植株体系。【结果】叶片和茎段诱导愈伤组织培养基相同,难易程度一致,诱导配方为 MS+6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L;在普通愈伤组织诱导形成胚性愈伤组织过程中,2,4-D 起重要作用,其他激素起辅助作用,较好的诱导配方为 MS+6-BA 0.1 mg/L + 2,4-D 2.0 mg/L;在胚性愈伤组织诱导产生体细胞胚过程中,ABA 起着重要作用,并进一步发育和分化的适宜的培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。【结论】叶片和茎段愈伤组织诱导最佳培养基为 MS+6-BA 1.0 mg/L+0.2 mg/L NAA,愈伤组织转化为胚性愈伤最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L +2,4-D 2.0 mg/L;胚性愈伤形成体细胞胚胎最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。     

冬枣花药愈伤组织的诱导及原生质体分离

[研究目的]研究冬枣花药愈伤组织的诱导,悬浮系的建立和培养及愈伤悬浮系原生质体的分离.[方法]以冬枣花药为试材,通过选择愈伤诱导培养基和原生质体分离所用酶的浓度找到最佳诱导和分离条件.[结论]使用1/2MS基本培养基附加TDZ 0.2 mg/L、NAA 0.5 mg/L和PVP 2.0 g/L,对诱导冬枣花药愈伤组织有较好效果;愈伤组织增殖采用培养基1/2MS+TDZ 0.4mg/L+NAA0.2mg/L;悬浮细胞系培养采用1/2MS+TDZ 0.4 mg/L+NAA0.2 mg/L液体培养基;冬枣花药愈伤组织悬浮系原生质体分离时以0.6M甘露醇+0.1%MES+20～25 g/L纤维素酶.酶解时间为16h时得到的原生质体产量和活力较高.     

草莓试管内诱导匍匐茎和高温处理结合茎尖培养脱毒技术研究

【目的】获得可用于生产的无病毒草莓种苗。【方法】在试管内对深山草莓花瓣愈伤组织分化产生的优良变异新品种的试管苗进行匍匐茎诱导,并采取试管内高温处理结合茎尖培养对该品种进行脱毒研究,应用均匀设计法对各步骤主要影响因子进行优化筛选。【结果】该草莓新品种试管苗匍匐茎诱导的适宜培养基为:LS+6-BA1.00mg/L+GA31.90mg/L+KT1.00mg/L,其诱导率为99.5%以上;将含有匍匐茎的试管苗在试管内于56℃条件下培养85d后,切取1mm的茎尖在培养基MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L中进行茎尖愈伤组织诱导,然后将茎尖愈伤组织转接到培养基MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.05mg/L中进行愈伤组织芽苗再分化培养,对再生芽苗进行病毒检测,脱毒率为100%。【结论】利用试管内高温处理结合茎尖脱毒的方法可以完全脱除草莓病毒,从而建立了草莓脱毒体系。     

云南药用野生稻快繁苗在育种中的利用研究

药用野生稻具有抗虫、抗病、抗旱、分蘖力强等优良特性,但是,药用野生稻结实率低,落粒性强,很难收种和保存繁殖。本研究利用药用野生稻种子离体培养方法获得植株再生苗。组培实验设计了3种不同的愈伤诱导培养基:筛选出MS+2,4-D 5.0 mg/L+植物凝胶2.8 g/L+蔗糖30 g/L,pH值5.8最适合愈伤诱导培养基,也筛选出愈伤继代、增殖培养基;设计了10种分化培养基:筛选出MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+ZT 3.0 mg/L+植物凝胶2.8 g/L+蔗糖30 g/L,pH值5.8最为适合分化的培养基,同时筛选出继代、增殖、壮苗的培养基;设计了10种生根培养基:筛选出MS+NAA 0.8 mg/L+植物凝胶2.8 g/L+蔗糖30 g/L,pH值5.8最适合生根的培养基。在培养技术方面采用磨去种皮,利用种子芽诱导愈伤,弱光培养愈伤,加快形成紧实、绿色颗粒愈伤,进行了有效改进。通过实验,建立了一套完整的药用野生稻快繁体系。以组培苗药用野生稻为父本,3个品系栽培稻为母本,3个杂交组合获得了远缘杂交后代。因此,远缘杂交在杂交育种中是可行的。