赖草属几种植物幼胚离体培养研究

以大赖草、欧滨麦、野麦、窄颖赖草、赖草和羊草为材料,在离体培养条件下对幼胚的发育进行了研究.结果表明,6种赖草属植物的幼胚在不含任何激素的培养基上能够直接发育成完整小植株,幼胚发芽率因物种而异,其中羊草最高,发芽率达到98.8%.当幼胚被培养在减半的N6培养基上时,发芽率普遍降低.在N6培养基或在减半的N6培养基上,幼胚均没有发生脱分化现象.相反,在含有2,4-D的培养基上,91.7%～93.5%的羊草幼胚发生了脱分化,从脱分化的愈伤组织里出现了少量再生芽.这些结果对禾本科牧草幼胚的发育研究具有重要参考价值,对羊草等多年生牧草的杂交育种具有潜在利用价值.     

象草幼穗离体培养植株再生研究

以象草幼穗为外植体材料、改良的MS为基本培养基,研究了不同外源激素组合对不同发育时期幼穗愈伤组织诱导和植株再生能力的影响.结果表明,象草幼穗离体培养最适长度为2～5 cm;愈伤组织诱导培养基中添加4.0 mg/L 2,4-D 0.05 mg/L KT和4.0 mg/L 2,4-D 0.10 mg/L KT时,颗粒状愈伤组织诱导率分别为79.0%和72.6%;转入添加3.0 mg/L 2,4-D 0.2 mg/L 6-BA的继代培养基,分别有40.9%和74.0%的愈伤组织保持颗粒状结构;在添加2.0 mg/L CPPU 0.01 mg/L NAA和0.50 mg/L KT 0.5 mg/L IAA的分化培养基上,经过继代培养后的颗粒状愈伤组织的成苗率分别为36.4%和38.5%,总成苗率达50.2%和43.9%.3片叶大小的幼苗转入附加NAA 0.50 mg/L的1/2 MS壮根培养基,试管苗移栽成活率达95%以上.在继代培养过程中逐代选择外表呈白色、干燥、紧密、颗粒状的愈伤组织,是提高其植株再生能力的有效方法.     

大赖草的组织培养及植株再生的研究

大刺草在成熟胚在含有２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养上形成颗粒状愈伤组织，减少培养基中的２，４－Ｄ浓度，愈伤组织分化出绿色的芽点。生根培养基为不含任何激素的ＭＳ培养基，有分化能力的愈伤组织可以在保持培养基（ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ／ＬＢＡＰ）上长期保存，利用这一培养程序可以快速，大量地繁殖大赖草，文章还对外源激素在植物组织培养中的作用进行了讨论。     

结缕草‘Zenith’离体培养植株再生体系优化研究

以结缕草Zoysia japonica栽培品种‘Zenith’的成熟种子为外植体,通过调整2,4 D浓度和凝固剂种类及其浓度,进行结缕草离体培养植株再生体系优化的研究。结果表明：愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+2,4 D 4.0 mg/L,愈伤组织诱导率为69.97%,其中胚性愈伤组织诱导率达28.78%。胚性愈伤组织包括2种类型：淡黄色、湿润的小颗粒聚集状愈伤组织(27.36%)和黄色、干燥、颗粒状愈伤组织(1.42%)。以结冷胶为凝固剂,有利于提高愈伤组织的诱导率。提高愈伤组织继代培养基中的琼脂浓度,有利于保持胚性愈伤组织的植株再生能力。适宜的愈伤组织分化培养基为MS+KT 4.0 mg/L或MS+6 BA 3.0 mg/L,绿苗分化率达90%以上。适宜的生根培养基为1/2MS ,生根率100%。     

海雀稗幼穗离体培养植株再生

本研究旨在离体培养条件下建立起海雀稗植株再生的技术体系,为开展海雀稗细胞和分子生物学育种工作创造条件。以Adalay海雀稗(Paspalum vaginatum Sw.cv.Adalay)的幼穗为外植体材料,在附加2,4-D 2.0~4.0 mg/L稍作修改的MS培养基上,愈伤组织诱导率达90%以上。不同发育时期的幼穗影响其愈伤组织的诱导发生频率:1.0~2.0 cm长的幼穗,愈伤组织诱导率达80%以上;2. 0 cm以上的幼穗,诱导率降至60%以下。在添加2,4-D2.0 mg/L和BAP 0.05 mg/L的愈伤组织诱导培养基上,诱导产生的颗粒状愈伤组织占愈伤组织总数的40%以上。愈伤组织继代培养基中琼脂的用量提高到16 g/L时,愈伤组织在继代培养过程中保持颗粒状结构。颗粒状愈伤组织经连续继代培养3次后转移到附加BAP 2.0 mg/L的分化培养基上,植株再生频率达98%。通过提高愈伤组织继代培养基的渗透压,海雀稗幼穗诱导产生的颗粒状愈伤组织在继代培养过程中能够保持颗粒状的结构和高频率植株再生的能力。     

羊草与灰色赖草杂种F1再生体系的建立

对羊草(Leymus chinensis)与灰色赖草(Leymus cinereus)杂种F1幼穗进行离体培养,建立了杂种F1植株再生体系.结果表明:不含任何激素的MS培养基是最佳的分化培养基,分化成苗率为66%;2,4-D对愈伤组织的诱导及其质地的改造有重要作用;3.0 mg/L 2,4-D MS培养基愈伤组织诱导率最高,为68%;2.0 mg/L 2、4-D MS诱导的愈伤组织胚性最强;诱导率与分化率没有直线对应关系;再生体系的建立为杂种F1育性恢复的研究奠定了基础.     

诺丹冰草成熟胚离体培养中不定芽的诱导和形态建成

用MS附加NAA、BA、KT等植物激素配制组合培养基,对诺丹冰草成熟胚进行了离体培养.结果表明,MS+NAA0.5mg/L+BA1.0mg/L和MS+NAA0.25mg/L+BA2.0mg/L是诺丹冰草胚诱导不定芽的两个理想组合培养基,对不定芽的形成和幼苗的生长有明显的促进作用,不定芽的诱导率分别达到64.0%和56.0%;显微切片观察到:不定芽起源于胚轴的表皮和皮层细胞,形成过程可分为启动阶段、芽原基形成阶段、叶原基形成阶段和不定芽形态建成阶段.     

小麦成熟胚离体培养及植株再生技术优化

本实验利用冬小麦品种周麦27成熟胚进行了愈伤组织诱导和植株再生技术的优化,以提高小麦成熟胚离体再生频率,为以成熟胚进行遗传转化奠定基础。探讨了外植体不同接种方法、Dicamba浓度和细胞分裂素种类、转分化时间和愈伤组织干燥处理等因素对小麦成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明, 1)小麦成熟胚十字形切割法接种愈伤组织分化率较高,达到66.7%,分别是刮胚法和整胚接种的2.1和4.3倍;2)附加2,4-D 和Dicamba均可以高频率诱导成熟胚愈伤组织的形成,但Dicamba诱导形成的愈伤组织分化率高于2,4-D的达4倍之多,在Dicamba浓度为2.0~4.0 mg/L时愈伤组织诱导和分化效果较好;3)愈伤组织在附加2.0 mg/L 6-BA的分化培养基上分化率最高为45.8%,其次为在不含激素或含KT 2.0 mg/L时分化率分别达到38.5%和37.0%,而在附加TDZ和ZT时分化率较低;4)成熟胚外植体在诱导培养2~3周后进行分化培养,绿苗分化率最高;5)愈伤组织分化前干燥处理6 h愈伤组织分化率略有提高,但与未干燥处理的相比差异不显著,而干燥12 h后分化率却明显降低。     

赖草属三个八倍体和两个十二倍体物种的核型研究

本研究报道了赖草属3个八倍体和2个十二倍体植物的核型.核型公式如下,含糊赖草(Leymus ambiguus),2n=8x=56=42m(6SAT) 12sm(6SAT) 2st(2SAT);大赖草(L. racemosus),2n=8x=56=2M 46m 8sm;毛穗赖草(L.paboanus),2n=8x=56=42m 14sm(2SAT);窄颖赖草(L.angustus),2n=12x=84=62m 22sm;卡瑞赖草(L.karelinii),2n=12x=84=72m 12sm.它们的核型属2A或2B型.其中前2种的八倍体核型和2个十二倍体植物的核型为首次报道.     

2种三叶草杂种F1代胚性愈伤组织筛选

以高加索三叶草(Trifolium ambiguum Bieb.)与白三叶(Trifolium.repens L.)杂交后胚离体培养产生的F₁无菌苗的茎段为外植体,筛选诱导愈伤组织的最适培养基,将F₁茎段产生的愈伤组织经过继代后转移到分化培养基中,研究不同浓度激素组合对体细胞胚胎产生的影响。结果表明:MS+6-BA+NAA是诱导F₁茎段愈伤组织的适宜培养基;MS+2,4-D+6-BA+NAA+KT+CH为F₁茎段愈伤组织的适宜分化培养基;对分化后的胚性愈伤进行组织学观察,可见其表面形成许多瘤状突起,即胚性细胞团,它们可以继续发育形成体细胞胚,为快速得到数量较多的杂种F₁再生苗奠定基础。     

大赖草对不同放牧方式的适应策略

研究不同放牧方式下大赖草对放牧的适应策略。结果表明．大赖草的植株高度、分蘖节节间距地面距离在全天放牧方式下最高,夜间放牧方式下株高和蘖位最低;放牧结束时叶表皮细胞面积、叶肉细胞密度在夜间放牧方式下最大。不同放牧方式下大赖草的叶片内部形态变化规律有所差异,但随着放牧时间的推移,叶表皮角质层厚度、叶肉细胞宽度均呈增加趋势,远轴面叶表皮细胞面积均呈减小趋势。     

高羊茅成熟胚离体培养及高频植株再生

以高羊茅Festuca arundinacea成熟种子为外植体,采用均匀设计研究了不同生长调节剂、基因型和培养基对愈伤组织诱导的影响.结果表明:2,4-D对高羊茅成熟种子萌芽及愈伤组织诱导的影响极大;基因型对愈伤组织诱导有一定影响;培养基对愈伤组织诱导无任何影响;愈伤组织在不添加任何生长调节剂的培养基上即可进行分化.高羊茅最佳愈伤组织诱导培养基组合为N6 18 mg/L 2,4-D,外植体为"王朝"成熟种子的愈伤组织诱导率可达95.6%,且植株分化率达100%.     

2,4-D和BAP对蒙古冰草幼胚愈伤组织诱导及生长的影响

以蒙古冰草为材料。在离体培养条件下对其幼胚的发育进行了研究。结果表明：蒙古冰草的幼胚在不含任何激素的培养基上能直接萌发，幼胚发芽率因培养基而异。N6＋7％蔗糖培养基萌发率最高，达96％；其次为MS＋5％蔗糖培养基。萌发率为90％。当幼胚被培养在减半的N6培养基或减半的MS培养基上时，发芽率均显著降低。以上四种培养基均未发生脱分化现象。相反，在含有2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）的培养基上，蒙古冰草幼胚不同程度地发生了脱分化，并出现了少量再生芽。在继代培养基中，降低2，4D浓度，附加低浓度6-苄氨基嘌呤（BAP）可以改善蒙古冰草幼胚愈伤组织状态，增加胚性愈伤组织诱导率。从而提高分化率。     

草地早熟禾成熟胚离体培养植株再生技术的研究

以大青山草地早熟禾和超级伊克利早熟禾的成熟种子为外植体材料,研究激动素和生长素及其不同配比组成的激素组合对愈伤组织诱导发生与生长状态及其绿苗分化能力的影响。结果表明,在愈伤组织诱导培养基中附加2.0mg/L2,4-D和0.2mg/LBA,诱导频率在30%-43%之间。在其继代培养基中添加1.0mg/L2,4-D和0.5mg/LBA,愈伤组织增殖速度快,且保持胚胎发生能力。在愈伤组织分化培养基中附加2.0mg/LBA或CPPU,经继代培养3代的愈伤组织的绿苗分化率保持在30%左右。在继代培养中,早代选择外表呈干燥、紧密、颗粒状愈伤组织是克服随着继代培养时间的延长愈伤组织再生植株的能力显著下降这一障碍的简易有效方法。     

8个大赖草材料的C-分带和RAPD分析

利用C-分带和RAPD对小麦族赖草属的8个材料进行了比较研究。结果发现,大部分染色体都显示较强的末端带,着丝粒带和中间带则不丰富,除02I-191号材料外,其他几种材料之间变异不大。RAPD结果表明,45条随机引物中的35条(占77.8%)扩增出131条具有多态性的条带,其中22条为特异性条带,可以分别追踪8个大赖草材料。另外,OPC05还可以特异性追踪大赖草添加系中的第7和第14号染色体。     

捻转血矛线虫离体培养的研究

本实验研究了:(1)三种人工合成培养基:M199、NCTC109、F_(12);(2)小牛脱纤维蛋白血(以下简称小牛脱纤血)、Filde’s试剂,Bovine hemin;(3)pH值等几种因素对离体培养中捻转血矛线虫(Haemonchou contortus)L_3发育至L_4的影响。结果表明:(1)在相同条件下,NCTC109和M199培养系中的L_3可发育至L_4晚期,F_(12)中L_3只发育至L_4早期;三种培养系中L_3发育至L_4的虫体数占存活虫体数的90％以上,以NCTC109中的发育率为最高,达100％。(2)小牛脱纤血、Filde’s试剂和Bovine hemin对L_3发育至L_4均有促进作用,虫体的存活率明显提高,晚四期幼虫的存活时间延长;小牛脱纤血和Filde’s试剂可使L_3至晚L_4的时间缩短。(3)pH 5.8～6.2时,L_3发育至L_4;速度明显减慢,发育率不到50％;pH 6.6～6.8时,L_3发育至L_4的同步性及发育率明显提高,以pH6.6为最佳。     

蒙农杂种冰草成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生

以蒙农杂种冰草成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织的诱导进行植株再生,结果表明:在附加甘露醇(0.2mol/L)和2,4-D(2.0mg/L)的MS培养基中,冰草成熟胚可诱导产生愈伤组织,诱导率为87.6%,但质量较差;将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA的继代培养基中继代改造,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤;将筛选改良的愈伤组织置于分化培养基MS+ZT(3.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)中,分化率为82%;分化小苗在1/2MS培养基上可生根并得到完整植株.本研究还建立了一套有效的以成熟胚为外植体的蒙农杂种冰草组织培养再生体系.