巨型艾美耳球虫免疫对其它几种球虫的血清学反应和临诊抗感染交叉保护力的研究

为探讨鸡艾美耳球虫种间交叉免疫这一尚有争议的问题,本文用ELISA方法检测了巨型艾美耳球虫（Eimeriamaxima）免疫血清与其它主要虫种（柔嫩艾美耳E．tenella、毒害艾美耳E．necatrix及堆型艾美耳球虫E．acervulina）抗原的血清学反应,同时观察了E．maxima免疫（1×104个卵囊/只）鸡遭受上述虫种大剂量（1×105个卵囊／只）强毒攻击后的死亡率和肠道病变,对临诊交叉保护力进行了评估。结果表明,E．maxima免疫血清与E．tenellaE．acervulina可溶性抗原有不同程度的交叉反应;E．maxima免疫后用E．tenella,E.acervulina,E.necatrix大剂量强毒攻击,分别有70％、40％、6％的鸡获得了完全保护;25％、60％、27％的鸡获得了部分保护。     

艾美耳球虫双重致弱株与强毒株遗传特性的比较研究

鸡球虫病的免疫预防是目前的研究热点。由于强毒苗的使用有其危险性，各国的研究人员都试图研制弱毒苗[1]。经典的减低球虫毒力的方法有2种：一种由Long[2]提出，做法是使球虫适应鸡胚，并通过鸡胚传代。另一种由Jeffers[3]提出，即早熟株的选育。也有报道将二者结合[4]，通过鸡胚选育早熟株。本实验室则以化学诱变剂环磷酸胺（CP）和物理诱变因素紫外线照射对艾美耳球虫卵囊（E．tenella、E．necatrix、E．maxima）进行双重致弱，以期达到减低毒力的目的。通过对3种艾美耳球虫强毒株与双重致弱株遗传特性包括卵囊的形态特征、内生性发育…     

用柔嫩艾美尔球虫早熟致弱虫株及其毒株对初生鸡雏和幼雏的免疫试验

自Jeffers于1975年首次用挑选早熟卵囊的方法获得柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)致弱虫株以来,人们又用同样的方法相继选育出7种鸡球虫的早熟致弱虫株,一种较为安全的全价抗鸡球虫病虫苗可望在不久的将来问世。现在面临的问题是设法找到一种最     

鸡胚接种柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫活卵囊的免疫保护试验

给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。     

堆型艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫卵囊最短孢子发育时间的测定

将收集到的新排出的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)与柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)卵囊于29℃静态系统中孢化。以30min为间隔，对卵囊孢子发育的4个阶段在显微镜下进行观察。以1h为间隔，用发育中的卵囊连续接种无球虫鸡，以确定最短孢子发育时间(MST)。对影响孢子发育的外部因素进行了初步探讨。用堆型艾美耳球虫比较不同卵囊浓度，不同悬液深度在卵囊孢化过程中第20h时子孢子形成的卵囊百分率。E.acervulina与E.tenella的MST分别为11b与18b。卵囊浓度和悬液深度与孢子发育时间呈明显反比关系。     

33个小型鸡场球虫流行病学调查

对天津、河北、山东等地33个小型养鸡场做了球虫病原学流行调查。根据卵囊形态，最短潜在期．裂殖体部位和大小，病变等具有鉴别意义的特征做综合鉴定。结果显示，33个鸡场都有球虫的感染。共鉴定出7个种．其中有28个鸡场有堆形艾美耳球虫(E．acervulina)，占84．84％．26个场有柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)．占78．78％．25个场有巨型艾美耳球虫(E．maxima)，占75．8％，早熟艾美耳球虫(E．praecox)，和缓艾美耳球虫(E．mitis)，布氏艾美耳球虫(E．brunetti)和毒害艾美耳球虫(E．necatrix)各1个场有．各占3％。只有一个鸡场单独感染一种球虫．其余都是混合感染2种或2种以上球虫，其中有2个鸡场混合感染4种球虫。     

妥曲珠利对柔嫩艾美耳球虫作用峰期的初步研究

E．tenella球虫又称盲肠球虫,主要侵害鸡的盲肠,一般感染15～35日龄的雏鸡。一旦鸡吞食了E．tenella球虫卵囊,由于球虫的高繁殖性能,随之有众多的卵囊排出并污染环境,导致球虫病暴发。E．tenella球虫发育过程包括3个生殖阶段,孢子生殖在外界环境中进行,其它两种生殖阶段在鸡体内完成。随鸡粪便排到外界环境中的球虫卵囊称为未孢子化卵囊,不具有感染力。     

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

重组鸡γ干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响

取AA肉鸡，在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）孢子化卵囊进行首免和二免，并同时肌肉注射5000U重组鸡γ干扰素（rChIFN-γ）后，于21日龄以同源E．tenella攻虫。试验结果表明，rChIFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降，降低OPG值和肠道病变记分，提高抗球虫指数（ACI）；同时还发现，rChIFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度（α=0．05）。由此表明，rChIFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤，促进肠道的吸收功能，进而减轻球虫病所造成的增重损失，对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。     

特异PCR方法用于鸡的3种艾美耳球虫混合感染鉴别的研究

用单卵囊分离法获得的鸡的3种艾美耳球虫（每种各2株）卵囊：柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）、巨型艾美耳球虫（E．maxima）、堆型艾美耳球虫（E．acervulina）。经纯化、提取基因组DNA后，用报道的种特异引物做PCR扩增分析，以确定是否为纯种。结果发现这3种球虫均存在混合感染的情况。该结果为进一步研究这3种球虫奠定了基础，并说明特异PCR方法能够有效地、快速地鉴别球虫虫种。     

EtMIC-2表达产物对鸡三种艾美耳球虫的保护试验

鸡艾美耳球虫病由隶属顶复门7种艾美耳球虫（E.tenella、Enecatrix、E.acervulina、E.naxima、E.brunetti、E.praecox、E.mitis）引起，常混合感染，有很高的发病率和死亡率，轻者则影响鸡的增重和饲料转化率。微线是顶器的结构之一，位于子孢子和裂殖子前端，EtMIC-2是其50kDa左右的酸性蛋白，在虫体入侵时表达，该蛋白可能在虫体入侵时起重要作用。用Pet载体经原核表达该蛋白，7、14日龄经口服、肌注不同剂量工程活菌和菌体裂解蛋白二次免疫鸡，免疫后1周用3种艾美耳球虫（E.tenella、E.acervulina、E.maxima）攻虫，发现相对增重率随菌体蛋白含量增加呈现增加趋势。E.tenella攻虫表现最有效的是口服PBS200ug活菌组为96%，E.ac-ervulina、E.maxima分别为96%、87%。从攻虫后7～14d卵囊排出曲线看，每天排卵囊数和相对卵囊产量均低于红对照；相对卵囊产量,E.tenella攻虫后，口服PBS 200ug活菌组最低，为17%，E.acervulina、E.maxima攻虫后，口服PBS 200ug裂解菌组最高，分别为90%、93%。从增重与卵囊产量来看，EtMIC-2对E.tenella、E.ac-ervulina和E.maxima这3种球虫有一定的免疫保护作用，尤其口服200ugPBS活菌时，对E.tenella保护作用最明显。说明来源于E.tenella子孢子的Etmic-2基因的表达产物对E.tenella、E.acervulina和E.maxima3种球虫有一定的免疫保护作用。     

安徽省部分地区鸡球虫种类及感染情况调查

目的了解安徽省五个县（区）鸡球虫种类及感染情况。方法采用群体采样法分别从个调查点采集新鲜鸡粪，检查粪样。阳性粪样采用饱和盐水漂浮和离心沉淀法进行卵囊分离。显微镜下观察卵囊进行虫种鉴定，并统计各调查点的鸡球虫感染率和感染强度等。结果检查172份鸡的新鲜粪样，得出鸡球虫感染率为100％；共检出7种球虫，经鉴定均隶属于艾美耳属，分别为毒害艾关耳球虫（Eimeria necatrix），堆型艾关耳球虫（E．acervulina），巨型艾关耳球虫（E．maxima），柔嫩艾美耳球虫（E．tenella），和缓艾美耳球虫（E．mitis），哈氏艾美耳球虫（E．hagani）和早熟艾美耳球虫（E．praecox）。结论鸡球虫在安徽省的这5个县（区）普遍存在，且有的调查点感染强度很高。     

鸡柔嫩艾美耳球虫海南株SO7基因表达产物的免疫保护效果观察

为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)海南株SO7基因原核表达产物对E.tenella攻击的免疫保护效力,分别于8和16日龄采用SO7基因可溶性重组蛋白和包涵体重组蛋白经肌肉注射两次免疫文昌鸡公雏,同时设立攻虫对照组和空白对照组;其中,免疫组和攻虫对照组雏鸡于27日龄接种5×10~4个E.tenella卵囊,观察其诱导产生的保护力。结果显示,与攻虫对照组相比,SO7可溶性蛋白组雏鸡的相对卵囊产量降低了82.9%,攻虫至试验结束的增重增加了76.3%,盲肠病变减少了29.8%;SO7包涵体蛋白组雏鸡的相对卵囊产量降低了60.4%,攻虫至试验结束鸡增重增加了42%,盲肠病变减少了18.7%。结果表明,E.tenella海南株SO7基因在大肠杆菌中的表达产物对鸡柔嫩艾美耳球虫的攻击有一定的免疫保护作用,且SO7可溶性蛋白的抗球虫效力优于包涵体蛋白。     

rChIFN-γ对E-tenella卵囊免疫雏鸡肠道分泌型IgA^＋细胞数量的影响

本研究初步探讨了重组鸡-γ干扰素（rChIFN-γ）对柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）卵囊免疫接种鸡肠道粘膜sIgA＋细胞数量的影响。分另1l给7和14日龄雏鸡予以E．tenella孢子化卵囊免疫接种并同时肌注5000urChIFN-γ后,于21日龄用同源E．tenella攻虫。免疫组化检测结果表明rChIFN-γ加强免疫组在21日龄时十二指肠、空肠、盲肠和回肠的绒毛sIgA^＋细胞数量均高于免疫对照组,在28日龄时,均呈现显著性差异（仪=0．05）。结果表明rChIFN-γ可提高球虫卵囊免疫雏鸡肠道内的sIgA^＋细胞数量,增强粘膜免疫水平,具有明显的抗球虫免疫增强效果。     

鸡球虫裂殖子的氨基酸分析

分离 E.tenella、E.necatrix、E.acervulina 三种球虫的裂殖子及 E.tenella 的卵囊,测定其水溶性氨基酸及水解氨基酸的种类及含量,以观察种间及不同阶段虫体的氨基酸差异。结果表明:E.tenella 的第二代裂殖子有11种游离氨基酸及17种水解氨基酸,其孢子化卵囊有6种游离氨基酸和15种水解氨基酸;E.acervulina 第四代裂殖子的游离氨基酸和水解氨基酸均为16种;E.necatrix 第二代裂殖子有15种游离氨基酸和17种水解氨基酸。三种球虫的游离氨基酸种类均少于水解氨基酸。E.tenella 孢子化卵囊的氨基酸种类少于裂殖子。这些生化指标将为球虫的生化特征及体外培养提供科学依据。     

新疆阿拉尔某鸡场球虫种类调查

为了了解阿拉尔市某鸡场鸡球虫种类及感染情况,采用群体采样法分别采集新鲜粪便并检出阳性粪便,对检出的阳性粪便采用饱和盐水漂浮法和离心沉淀法进行卵囊分离;显微镜下观察卵囊、最短孢子化时间、最小潜在期和病理变化,进行虫种鉴定。最后得出该鸡场感染有堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）、巨型艾美耳球虫（E．maxima）和柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）,该鸡场球虫感染严重,且为混合感染。     

用RAPD技术进行鸡球虫不同种株的多态性研究

本文以随机引物成对组合的方式，对和缓艾美耳球虫（Eimeria,mitis)、巨型艾美耳球虫（E.maxima)和柔嫩艾美耳虫（E.tenella)3个种各2个单卵囊感染纯株、E.tenella6个抗药性表型不同的单卵囊感染性株进行了RAPD分析，结果发现，RAPD技术能非常有效地用于上述球虫种、株间的鉴别。     

柔嫩艾美耳球虫早熟株的内生发育及其致病性

为了给鸡球虫早熟弱毒疫苗的开发提供依据,对柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella) 北京株经10 代早熟选育获得的早熟株的内生发育研究发现,其第2 代裂殖生殖发育较快,第2 代裂殖体含裂殖子较少,提前进入配子生殖,从而造成卵囊“早熟”。该早熟株致病性大大下降,经口感染10×104 个/只的致病性仅相当于剂量0.1×104 个/只亲本毒株的致病性。该虫株可作为研制早熟弱毒苗用虫株。     

柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E基因表达产物的初步免疫效果研究

用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella子孢子表面抗原基因原核细胞表达产物免疫雏鸡,观察其对球虫攻击的免疫保护作用.将可溶性重组蛋白和包涵体重组蛋白经肌肉注射分别于7日龄、14日龄两次免疫罗曼小公雏,同时设攻虫对照组和空白对照组,于第2次免疫后1周(28日龄)用1 ×104个E.tenella卵囊进行攻毒,观察其诱导产生的保护力.结果表明,3-1E可溶性蛋白组免疫无论从卵囊计数、盲肠病变计分和相对增重均优于包涵体免疫组.说明3-1E基因在大肠杆菌中的表达产物对鸡柔嫩艾美耳球虫的攻击有一定的免疫保护作用.     

TA4和EtMIC-2表达产物免疫后对感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)鸡增重和盲肠卵囊数的影响

实验用Etmic-2和ta4两种基因的表达产物经口服，肌注免疫鸡，然后用柔嫩艾美耳球虫攻击免疫鸡，以观察重组产物的免疫保护作用。结果表明，免疫鸡的增重均高于红对照，口服两种活菌200μg组最佳，其相对增重为96．54％，其它组为77．07％－90．30％。从盲肠卵囊数看，同样是口服两种活菌200μg组最佳，相对卵囊产量为16．58％，其它均有降低，为17．72％－94．08％，从增重与卵囊产量来看，两种重组表达产物对E.tenella球虫有一定的免疫保护作用。尤其口服活工程菌效果最佳。