白地霉和解淀粉芽孢杆菌对黄瓜枯萎病的防治效果

采用生物测定法,初步研究了解淀粉芽孢杆菌SYX-1和白地霉SYX-2对黄瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌的拮抗作用。结果表明：两种生防菌在菌悬液浓度为106～107cfu/ml时黄瓜种子胚根的伸长拮抗率分别为71.3%和81.2%,而混合菌株菌悬液的胚根伸长拮抗率高达85.3%;盆栽试验表明,SYX-1和SYX-2生防菌菌悬液对黄瓜枯萎病的防效分别为43.3%和46.4%,其混合菌株菌悬液的防效达52.8%,两种生防菌对植株生长均有明显的促进作用。     

生防菌与化肥和杀菌剂混用对棉花枯萎病的防病促生作用

【目的】探索杀菌剂和化肥对生防菌防病、促生作用的影响,为综合利用生防菌防治植物病害、促进植物生长提供依据。【方法】利用平板对峙法,测定生防菌Sc11、153和Fo47对尖镰孢萎蔫专化型的皿内拮抗作用及其发酵液的抑菌作用,通过盆栽试验测定生防菌与杀菌剂、化肥结合对棉花枯萎病的防治效果及对棉株的促生作用。【结果】放线菌Sc11和153的发酵液对尖镰孢萎蔫专化型皿内抑制作用显著,抑制率分别为67.5%和55.0%;盆栽试验结果表明,生防菌与杀菌剂、化肥结合对棉花枯萎病的防效高于单因素处理,菌株Sc11和菌株Fo47分别与多菌灵溶液结合对棉花枯萎病的防治效果最佳,抑制率为64.99%和57.10%。【结论】杀菌剂、化肥与生防菌结合提高了生防菌的防病促生效果,体现了生防菌与杀菌剂、化肥结合应用防治植物病害的优越性,为植物病害有效防治提供新的解决方案。     

复合菌剂防治草莓根腐病的效果研究

为了获得草莓根腐病病原菌新棒状拟盘多毛孢（Neopestalotiopsis clavispora）的拮抗菌,筛选出3株生防效果好的菌株:贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis-17）、解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefacen-27）和枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis-Y1-7）,进行室内目标病原菌的平板对峙试验和生防效果的广谱性验证试验,对抑菌圈边缘菌丝进行10×4倍和10×10倍的显微镜观察,检测3株生防菌的代谢产物中是否含有吲哚乙酸（indoleacetic acid,IAA）和铁载体等促生物质和脂肽活性类抗病物质,并设计盆栽和田间试验检测其防病、促生和增产效果。室内平板对峙试验显示,供试3株生防菌均对目标病原菌及草莓灰霉病等6种病原菌有拮抗效果,抑菌圈边缘菌丝出现变细、扭曲、分支增多等畸形现象。3株生防菌均产生促生物质IAA和铁载体,菌株胞外粗提物具有拮抗拟盘多毛孢的效果,以上结果初步证明3株生防菌均具有促生抗病潜力。盆栽试验表明,同一生防菌的防病效果优于抗病效果,复合菌的防病促生效果优于单一菌株,防治效果高达7368%。田间试验表明,复合菌处理防病增产效果较优,防治效果高达57.18%~66.00%,每公顷增产12.97%~37.99%。盆栽和田间试验印证了3株生防菌分别具有促生防病及增产效果,以3株生防菌复合效果最优。     

生防菌SF1103、SF1104对黄瓜枯萎病菌的拮抗作用

为探明生防菌SF1103、SF1104对黄瓜枯萎病菌的拮抗作用,采用平板对峙法、菌丝混合及凹玻片孢子培养法研究其拮抗能力,采用特异平板培养法分析生防菌的产酶及次生代谢产物,并通过盆栽试验分析其对生防菌的防效。结果表明,经2株生防菌发酵液处理的病原菌的菌丝与孢子形态发生严重畸形并停止发育;2株生防菌均能分泌高活力的蛋白酶与纤维素酶,此外,SF1103具有解磷作用,SF1104能分泌嗜铁素;盆栽试验表明,使用复合菌剂处理的出苗率较对照组提高23.3%,较化学防治组提高29.4%;发病率较无防治组下降25.9%,防效达到77.8%。生防菌SF1103、SF1104对黄瓜枯萎病菌具有较强的拮抗能力,不仅能有效防治黄瓜枯萎病,并且对黄瓜的出苗生长有促进作用,有望进一步开发为生防菌剂产品。     

生防菌BC2000对番茄根结线虫的生防研究

通过灭菌土和非灭菌土盆栽试验，研究了生防菌BC2000对番茄根结线虫的生物防治作用。灭菌土盆栽试验结果表明，在灭菌条件下生防菌BC2000能够在植物根际定殖，并保持较高的活性；接种生防菌BC2000能够降低根结级数，明显抑制根结线虫的生长。非灭菌土试验同样验证了生防菌BC2000对植物根结线虫的生防作用，施用生防菌BC2000的番茄，其根结线虫的根结级数和2龄幼虫数量均显著下降，且效果明显好于其它拮抗菌。通过不同菌剂对比试验表明，BC2000菌剂2为防效最佳的BC2000生防菌剂。     

枯草芽孢杆菌KXZ-33与化学药剂协同防控棉花枯萎病的效果评价

【目的】分析生防细菌与化学杀菌剂复配效果,筛选出有效防治棉花枯萎病的配方组合处理种子,为棉花病害绿色防控提供技术支撑。【方法】以棉花枯萎病主要致病菌尖孢镰刀菌为研究对象,采用室内平板对峙试验筛选拮抗细菌,含毒介质法对化学杀菌剂进行毒力测定,相容性测定筛选出与生防细菌协同使用的化学杀菌剂;评价盆栽试验防病效果。【结果】6种生防细菌对尖孢镰刀菌均有抑制作用,抑制率在56.69%~79.53%,其中枯草芽孢杆菌KXZ-33对其抑制率最好,为79.53%。化学药剂甲基硫菌灵、多菌灵、福美双抑菌效果较好,EC₅₀分别为15.840 1、18.018 0、12.794 0 mg/L。KXZ-33与20 mg/L的甲基硫菌灵的相容性最高为90.46%,活菌数为2.18×10⁷ cfu/mL。KXZ-33与10 mg/L多菌灵在7 d防治效果最高为90.5%,28 d下降为27.0%;KXZ-33与10 mg/L甲基硫菌灵协同防治棉花枯萎病7 d防效为87.7%,28 d防病效果为43.7%。【结论】枯草芽孢杆菌KXZ-33种子处理与喷施50%甲基硫菌灵10 mg/L防治棉花枯萎病可以起到提高防效,弥补生防细菌在农业生产中的防效不稳定的同时可以减少化学农药的使用量。     

SC11生防菌剂及其不同复配对西瓜和茄子防病促生作用

基于时间与空间动态概念探究生防菌SC11不同剂型对茄子防病促生效果,生防菌SC11与Fo47、153粉剂复配对西瓜枯萎病的防治效果。结果表明,菌株SC11不同剂型处理对茄子黄萎病具有明显的防效,其中以种衣剂处理防效最优(69.98%),接近药剂对照多菌灵。同时,SC11不同制剂能显著增加茄子叶面积、株高或鲜质量,与对照相比,SC11种衣剂处理的叶面积、株高分别提高129.64%、100.84%,粉剂处理的株高、鲜质量增幅分别为69.64%、116.29%。SC11施用后30d施用153(C2处理),对西瓜枯萎病的防效达89.47%,远高于其他处理。SC11和Fo47同时施用时,防效最低,低于单独施用的防效。初步确定SC11不同剂型对茄子的促生作用及其对茄子黄萎病的防治效果,明确基于动态时空防治西瓜枯萎病的生防菌复配组合,间隔施用能有效提高复配防效。     

木霉菌多功能生防菌剂对瓜类枯萎病的防效研究

通过对甜瓜枯萎病具有较强拮抗作用的绿色木霉菌T23、哈茨木霉菌Ta22及添加少量营养元素为增效剂的木霉菌多功能生防菌剂对瓜类枯萎病进行防治试验。结果表明:对温室盆栽甜瓜枯萎病防效达67.34%~76.59%;田间大棚甜瓜枯萎病防效达69.67%~88.06%,黄瓜枯萎病的相对防效为66.04%,西瓜枯萎病的防效达70.58%~89.75%。     

常用杀菌剂和寡雄腐霉对多花筋骨草黑胫病的防效研究

研究了14种常用杀菌剂和生防菌寡雄腐霉对多花筋骨草黑胫病菌的防治效果。平板药效试验结果表明,多菌灵、甲基托布津、世高、好力克、保鲜克、福星、阿米西达等药剂对多喙茎点霉有强烈的抑制作用,抑菌效果达100%。盆栽试验结果表明,在供试的6种杀菌剂中,福星、甲基托布津、施佳乐对该病的防效达100%。生防菌寡雄腐霉,在平板上可以有效抑制病原菌的生长,形成溶菌现象,显微镜下可观察到,与生防菌接触的病原菌菌丝体大量干瘪死亡;在盆栽试验中对该病的防效达70.14%,与多菌灵的防效一致。     

球毛壳菌与枯草芽孢杆菌组合对抗黄瓜枯萎病防御酶活性的影响

黄瓜枯萎病是一种毁灭性的土传真菌病害,其病原菌为尖孢镰刀菌黄瓜专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum),在黄瓜整个生长周期均可发生。本试验研究球毛壳菌(Chaetomium globosum)菌株ND35与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株J2组合对黄瓜苗期枯萎病的防治效果,并对生防菌处理条件下黄瓜的根系活力、防御酶活性及防御酶相关基因表达进行初步研究。结果显示,球毛壳菌ND35处理对黄瓜枯萎病的防效为25.36%,枯草芽孢杆菌J2处理对黄瓜枯萎病的防效为54.27%,菌株ND35与菌株J2组合处理对黄瓜枯萎病防效达到70.02%。病原菌胁迫下,生防菌组合处理的黄瓜叶片CAT、SOD、POD、PAL和PPO活性明显提高,峰值分别达91.60、3 239.15、165.80、201.03、256.38 U/gFW;与上述酶活力相关的酶活基因相对表达水平峰值分别为2.94、2.39、5.01、4.49和7.96,分别达到病原菌处理下酶活基因表达量的3.27倍、6.98倍、98%、5.27倍、 2.31倍。组合处理下黄瓜根系活力、平均防御酶活性和相关酶活基因表达水平总体高于单一生防菌处理。综之,生防菌组合对黄瓜枯萎病的防治效果高于单一生防菌防治效果。该结果可为复合微生物防治黄瓜苗期枯萎病提供理论支持。     

黄麻链霉菌NF0919菌株对草莓枯萎病的生防活性初探

采用菌丝生长速率法测定了黄麻链霉菌NF0919发酵液对草莓枯萎病菌的室内毒力,并进行了防治草莓枯萎病的室内盆栽试验。结果表明:NF0919菌株发酵液和申嗪霉素对草莓枯萎病菌菌丝生长抑制的EC50值分别为24.3752和0.4001μg/mL;NF0919菌株发酵上清20倍液和1%申嗪霉素SC 800倍液药后30 d对草莓枯萎病的防效分别为65%和90%。     

一株香蕉枯萎病拮抗菌的筛选、鉴定及生防效果研究

【目的】筛选获得对香蕉枯萎病病原菌具有拮抗作用的菌株,为香蕉枯萎病生物防治提供菌株资源。【方法】以香蕉根际土壤为材料,利用铬天青（Chromeazurol S,CAS）双层平板法和平板对峙法筛选可分泌铁载体且对香蕉枯萎病菌具有拮抗作用的菌株;通过平板对峙法测定拮抗菌株对6种常见植物病原菌的拮抗活性;通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析明确拮抗菌株的分类地位;通过盆栽试验验证拮抗菌株对香蕉枯萎病的防治效果及对香蕉植株的促生作用。【结果】经CAS培养基初筛,从土壤中分离获得60株可分泌铁载体的菌株,平板对峙法复筛得到5株拮抗作用较强的菌株,其中菌株Gxun-2的抑菌效果最强,平均抑菌率达74.45%,且对供试的其他6种植物病原菌均具有较好的抑制效果,具有广谱抗菌性。结合菌落形态、生理生化及16S rDNA进化树分析结果,菌株Gxun-2鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。盆栽试验显示,菌株Gxun-2对香蕉枯萎病具有较好的防病作用,防治效果达84.21%,且对香蕉植株具有一定的促生效果,香蕉苗鲜重较对照增加32.96%。【结论】菌株Gxun-2对香蕉枯萎病具有较好的防治作用,且对香蕉植株具有一定的促生效果,可作为研制香蕉枯萎病生防菌剂的候选菌株资源。     

拮抗细菌KRS022的鉴定及对大丽轮枝菌的抑制效果

【目的】明确拮抗细菌KRS022的分类地位及对多种病原真菌的抑制作用,重点研究对作物黄萎病的防治效果及其对病原大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）的抑制效果,为抗大丽轮枝菌生防制剂的研发提供资源。【方法】通过形态学、生理生化试验及16S rDNA与gyrB基因序列串联分析确定KRS022的分类地位;采用对峙培养法和对扣熏蒸法测试KRS022对多种真菌的抑制作用;采用发酵菌液平板法、涂布法以及对扣熏蒸法明确KRS022对大丽轮枝菌的平板抑制效果;通过无细胞上清共培养法与对扣熏蒸法明确KRS022对大丽轮枝菌孢子萌发及菌丝形态的影响;通过盆栽试验及大丽轮枝菌生物量测定明确KRS022对棉花和烟草黄萎病的防治效果;利用RT-qPCR法检测KRS022激发植物免疫相关基因的表达特性。【结果】拮抗菌株KRS022为革兰氏阴性细菌,鉴定为产碱假单胞菌（Pseudomonas alcaligenes）。该菌株具有解磷、解钾、固氮功能,可产生嗜铁素,具有蛋白酶、淀粉酶、过氧化氢酶活性,属于好氧产碱型细菌,100μg·mL-1氨苄青霉素可作为该菌株的天然抗性筛选条件。KRS022对多种...     

菠菜内生细菌SEB的鉴定及拮抗作用

[目的]从菠菜上筛选内生细菌,防治菠菜主要病害。[方法]用稀释分离法从菠菜植株内分离内生细菌,培养基平板对峙法测定内生细菌的拮抗作用,并依据形态特征和生理生化特性,使用B iolog细菌鉴定系统鉴定。[结果]从菠菜植株根分离到具有生防活性的细菌SEB,对菠菜枯萎病菌等5种病原菌有较强的拮抗作用,鉴定为芽孢杆菌属。[结论]SEB菌株对多种病原真菌有拮抗作用,对菠菜枯萎病菌抑制率最高,具有开发成微生物制剂,防治园艺作物和农作物病害枯萎病的价值。     

保水剂在香蕉枯萎病药剂防治上的运用效果

香蕉枯萎病化学防治的理论和应用研究,是香蕉枯萎病综合防治体系的重要内容之一。试验研究中,采用在香蕉枯萎病杀菌剂掺入农用保水剂,并用于接种了FOC4的香蕉盆栽中,进行保水剂对杀菌剂的药效保持情况的试验研究,通过盆栽试验和田间药效试验得到使用保水剂和不使用保水剂的杀菌剂在香蕉枯萎病防治效果上具有显著的差异。结果表明保水剂能够较好的保持住杀菌剂药效,延长有效期,从而为香蕉枯萎病的防治工作提供了另一有效的防治措施。     

草莓根腐病拮抗真菌筛选鉴定及其防病促生作用

【目的】探索利用植物病、健株根域土壤微生物区系比较法快速筛选高效、广谱且有实际防病促生作用生防真菌的可行性。【方法】根据菌落培养与扫描电镜形态特征及rDNA-ITS序列对拮抗真菌进行鉴定;生长速率法测定菌株无菌发酵滤液的拮抗活性,盖玻片对峙培养法观察拮抗真菌对草莓根腐病原菌菌丝形态的影响;室内发芽试验法测定真菌无菌发酵滤液促种子萌发活性;采用盆栽试验研究拮抗真菌对草莓根腐病的防病促生作用;土壤稀释平皿分离法测定拮抗真菌的定殖能力及对草莓根域微生物区系的影响。【结果】经鉴定,2株拮抗真菌HF3和HF7分别为灰黄青霉（Penicillium griseofulvum）和土曲霉（Aspergillus terreus）,其无菌发酵滤液对7种供试病原真菌有较强的拮抗作用,培养96 h时,HF3对立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）和大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）菌丝生长抑菌率均为100.0%。HF3菌丝对大双孢柱孢（Cylindrocarpon macrodidyma CF9）菌丝具有溶解作用,使病菌菌丝出现扭曲、变细、断裂及原生质浓缩等畸变现象;HF3和HF7 103和104倍稀释无菌发酵滤液可促进甜瓜种子萌发及胚根、胚芽生长。HF7 104倍稀释液对西瓜种子萌发及胚芽、胚根生长具有促进作用;HF3和HF7对盆栽草莓根腐病的防效分别达53.0%和46.9%,同时可促进盆栽草莓植株生长,提高果实产量;菌株HF3和HF7在草莓根表定殖数量分别为2.23×105、1.02×105 CFU•g-1干土,同时减少了大双孢柱孢数量;接种HF3和HF7可有效调整草莓根域微生物区系,促进土壤微生态恢复平衡。【结论】通过植物病、健株根区土壤微生物区系比较可以快速筛选到高效广谱且有实际防病促生作用的生防真菌;HF3和HF7对草莓根腐病防治具有较高的潜在应用价值。     

棉花内生细菌YUPP-10及其分泌蛋白CGTase对棉花枯萎病的防治作用及机理

【目的】棉花枯萎病（Fusarium wilt）是棉花种植中较为严重的土传病害之一,主要采用化学方法进行防治,但对环境和人畜安全造成一定影响。生物防治因其专一性强、安全性高的特点,成为防治棉花枯萎病的重要途径。本研究旨在获得一株高效拮抗细菌,并明确其防治机理,为棉花枯萎病生物防治提供技术支持。【方法】前期获得一株能够破坏β-1,4糖苷键的棉花内生蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）YUPP-10,通过平板对峙培养、共培养法和悬滴法分别测试其对棉花枯萎病菌（尖镰孢,Fusarium oxysporum）菌丝生长、产孢和孢子萌发的影响;利用YUPP-10菌液浸种处理,研究其对棉花生物量的影响;以尖镰孢菌土为基质种植棉花,生长1周后,用LB液体培养基培养的YUPP-10制成不同浓度（分别为1×10⁸、1×10⁷和1×10⁶ cfu/mL）的生防菌剂灌根处理棉苗,于温室中进行棉花枯萎病的防治效果研究;通过Fosmid文库筛选到了YUPP-10关键抑菌物质为环糊精糖基转移酶（CGTase,EC 2.4.1.19）,研究其对尖镰孢菌丝生长、产孢和孢子萌发的影响;利用拟南芥花序侵染法将其转化拟南芥,获得能够稳定表达CGTase的转基因株系,研究转基因拟南芥对枯萎病的抗性,以及在病原胁迫下部分防御基因的转录。【结果】YUPP-10菌株发酵液对尖镰孢菌丝生长、产孢和孢子萌发具有显著的抑制作用,随着发酵液浓度的升高,对尖镰孢产孢量和孢子萌发的抑制率越高,最高抑制率分别为98.41%和51.65%。低浓度的YUPP-10菌液能促进棉花种子发芽、出苗和地上部分的生长。YUPP-10发酵液灌根处理后,棉苗的病情指数和病株率显著降低,其中,1×10⁷ cfu/mL的YUPP-10发酵液对棉花枯萎病的防治效果最高,达到45.11%。YUPP-10菌株的关键抑菌物质CGTase能够水解羧甲基纤维素和葡甘聚糖,表明其具有破坏β-1,4糖苷键的能力,进而检测了其对尖镰孢的抑制效果,结果表明CGTase对尖镰孢的菌丝生长、产孢和孢子萌发具有显著的抑制作用,对产孢和孢子萌发的最高抑制率分别达到62.63%和30.83%。转CGTase的拟南芥提高了对枯萎病的抗性,过表达CGTase的拟南芥在病原胁迫下部分防御基因的转录水平升高。【结论】蜡状芽孢杆菌YUPP-10菌株能抑制尖镰孢的生长、促进棉花部分生物量指标的增长并控制枯萎病的危害,CGTase能够抑制尖镰孢的生长,转CGTase拟南芥对枯萎病的抗性增强。     

植物根围促生细菌（PGPR）的分离筛选及对黄瓜土传病害的防治

为获取防治黄瓜土传病害的植物根围促生菌(PGPR)并明确其防效,采用促生筛选法与大田小区试验法,对黄瓜根围的促生细菌进行了筛选并对其田间防效进行了研究。结果表明,通过盆栽测定结合平皿初筛,筛选到的三株PGPR菌株,CH1,CH2和CH3都能显著地促进黄瓜生长。此外,离体拮抗试验发现,CH1和CH2对黄瓜枯萎病菌都有拮抗作用,而对瓜果腐霉均无拮抗作用,CH3对两种病原菌都有拮抗作用。盆栽防病效果测定,证实了这三株PGPR对黄瓜枯萎病和猝倒病都有较好的防治效果,田间试验进一步验证了其防效,并且发现PGPR间的亲和与非亲和性组合的促生与防病效果都显著好于单株的。这些试验结果为三株PGPRs的进一步研究和产业化奠定了坚实的基础。     

复合微生物肥料对香蕉枯萎病防控作用研究

采用盆栽试验,研究以枯草芽孢杆菌BLG010和淡紫拟青霉E16这2株防控香蕉枯萎病的专利菌株制备的3种复合微生物肥料(CMF1、CMF2和CMF3)对香蕉枯萎病发病率、香蕉生长指标、病原尖孢镰刀菌FOC和生防菌株BLG010和E16在香蕉根际定殖情况的影响。结果表明:(1)施用CMF1、CMF2和CMF3均明显降低香蕉枯萎病的发病率,分别降至60.00%,44.44%,26.67%;(2)与对照相比,CMF1、CMF2和CMF3处理能够显著提高香蕉生物量,株高、茎围、地下部和地上部鲜重,分别提高24.46%~44.80%,40.17%~101.43%,18.78%~47.06%,75.88%~109.11%;FOC数量下降11.57%~49.07%,BLG010和E16在根际中的定殖量分别提高27.55%和32.80%;(3)共聚焦显微镜观察发现根际中尖孢镰刀菌荧光强度减弱,体积缩小;(4)相关性分析表明,香蕉枯萎病发病率与尖孢镰刀菌FOC数量呈正相关,E16菌株数量与BLG010菌株数量呈正相关。施用复合微生物肥料不仅提高了对香蕉枯萎病的防治效果,而且促进香蕉生长和提高根际的生防菌株数量,具有较大生防潜力。     

西瓜枯萎病拮抗细菌的筛选

采用梯度稀释法对23份土样进行筛选,共获得114株不同类型且长势良好的细菌,其中8株细菌对西瓜枯萎病病菌的拮抗性能较好。对此8株细菌进行革兰氏染色,有7株为革兰氏阳性菌;进行芽孢染色,其中6株细菌产生芽孢。