新城疫的诊治

一、病原与流行特点 1．病原 又称禽Ⅰ型副粘病毒，目前只有一个血清型，但新城疫病毒却表现不同毒力，有强毒株、中等毒力株和弱毒株。而弱毒株和中等毒力株常用于做疫苗对鸡只进行免疫。     

crp缺失对猪霍乱沙门氏菌强弱毒株毒力的影响

猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法将强毒株C78-1致弱,用于预防仔猪副伤寒的弱毒疫苗株,虽具有较好的免疫原性,但仍有一定的残余毒力。SC-1是临床分离的猪霍乱沙门氏菌强毒株。为了研制更加安全的弱毒株,利用重组自杀性质粒通过接合转移的方法构建了猪霍乱沙门氏菌C500株、C78-1及SC-1的crp缺失株。C78-1、crp-C78-1、SC-1、crp-SC-1、C500、crp-C500 6个毒株经小鼠毒力试验检测。LD50结果显示,crp缺失对猪霍乱沙门氏菌的毒力影响不大,毒力只是略为降低,其中以crp-C500株毒力最弱。综上所述,可以选用crp-C500株毒株作为猪霍乱沙门氏菌弱毒疫苗株的选择。     

鸡传染性法氏囊病流行毒株的分离与鉴定

对洛阳、焦作、平顶山、南阳四地区鸡传染性法氏囊病的发病鸡群进行了病原分离，经AGP和Dot－ELISA法检测、鸡体回归试验、鸡胚传代及理化特性的测定，证明为IBD强毒，其中南阳株毒力稍弱于其它3株。四种野毒株的毒价分别为10-7．88、10-7．5、10-6．56和10-5．6ELD50／0．2ml。     

IBDV超强毒株和弱毒株VP2基因同义密码子使用偏爱性研究

应用RT-PCR方法扩增并克隆了分离自河南省的30株IBDV超强毒和9株弱毒株VP2基因cDNA序列,研究IBDV超强毒和弱毒株的VP2高变区基因不同位点同义密码子的使用情况。结果表明,超强毒株和弱毒株除特定位点的特征性氨基酸不同外,在同义密码子的使用上也有明显的偏爱性。这预示着同义密码子的使用与VP2基因表达及其表达产物的空间结构有关,进而可能影响到IBDV的毒力。     

鸭副粘病毒弱毒株的选育

应用SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)连续传代培育出鸭副粘病毒弱毒疫苗株,并测定该弱毒株的部分生物学特性.结果显示:该弱毒株已失去对无母源抗体番鸭的致病性,在雏番鸭体内连续肓传5代,未见毒力返强现象;对CEF的TCID50稳定在10-6.0～10-6.5·(0.1 mL)-1;无母源抗体的番鸭免疫不同代次弱毒后7 d攻击鸭副粘病毒强毒,保护率均在90％以上.结果表明该弱毒株安全性好、遗传性稳定、免疫原性强,可用于制备鸭副粘病毒病疫苗.     

免疫鸡群新城疫病毒强毒株感染的实验研究

ＳＰＦ试验鸡在８、２５日龄时接受了２次新城疫基础免疫，６０日龄时分别以标准新城疫病毒强毒株，中等毒力和弱毒疫苗株人工感染攻毒。应用单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒，对所有试验鸡泄殖腔棉拭样品进行了３０ｄ的连续检测。结果表明：从攻毒后第３ｄ起强毒株试验组检测出多例阳性，检出高峰分别在攻毒后第４￣６ｄ和１１￣１５ｄ，与鸡群症状表现的时间相一致；中等毒力和弱毒疫苗株对照组均呈检测阴性。本研究证明单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒     

不同新城疫分离株的毒力测定与单克隆抗体分群研究

采用传统方法对15株新城疫分离毒株进行毒力测定,根据鸡胚平均死亡时间（MDT）与3日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）测定结果,Fw、F48属E8于速发型毒株;ND98、P1、P2,鸽NDV、Ⅰ系、H2、BY属于中发型毒株,Ⅱ系、L2、P3、ND99,ND89 Lasota属于缓发型毒株。同时对这些毒株的表型特征进行观察发现,病毒血凝解脱速率、血凝素对热的稳定性、对不同动物红细胞的血凝谱等表型特征与NDV毒力没有相关性。通过问接酶联免疫吸附试验,采用针对NDVHN基因的单克隆抗体对贵州ND不同分离株进行分群研究,表明A群为速发型强毒株;B群为缓发型弱毒与某些中等毒力株;C群分离物的毒力介于速发型强毒与中等毒力之间。     

免疫鸡群新城疫病毒强毒株感染的实验研究

ＳＰＦ试验鸡在８、２５日龄时接受了２次新城疫（ＮＤ）基础免疫，６０日龄时分别以标准新城疫病毒（ＮＤＶ）强毒株、中等毒力和弱毒疫苗株人工感染攻毒。应用单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒，对所有试验鸡泄殖腔棉拭样品进行了３０ｄ的连续检测。结果表明：从攻毒后第３ｄ起强毒株试验组检测出多例阳性，检出高峰分别在攻毒后第４～６ｄ和１１～１５ｄ，与鸡群症状表现的时间相一致；中等毒力和弱毒疫苗株对照组均呈检测阴性。本研究证明单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒可以检测免疫鸡群中ＮＤＶ强毒感染，为ＮＤ的监测提供了新手段。     

猪喘气病弱毒疫苗的研究 猪肺炎霉形体兔化弱毒株的培育

 用5株猪肺炎霉形体分别人工感染乳兔，仅济南株适应于乳兔。经过长期继代，培育出1株毒力显著减弱并保持良好免疫原性的兔化弱毒株。该株对乳兔的最佳接种部位是胸腔，最小感染量为0.5×10#+（-5）克，在乳兔体内存活14天左右。在成兔体内可产生血凝抗体，其最小感染量为2×10#+（-5）至2×10#+（-6）克。扫描电镜观察表明，兔化弱毒株在乳兔支气管内繁殖，纤毛未见明显损伤。该株对猪的潜伏期的几何平均值为27.9天，对支气管纤毛损伤轻微，不发生同居感染，不影响增重，保护率为70-80%，免疫期6个月以上，最小免疫剂量为5×10#+（-2）克，气管、胸腔、滴鼻、气溶胶接种均可产生免疫力。用兔化弱毒株作种子制造大兔冻干苗15批，先后在北京、广东、福建、浙江、江西、湖南、宁夏、河北等8个省（市）自治区的30个猪场，接种20个不同品种、不同年龄的10363头猪，证明安全有效。兔化弱毒株的培养成功，为今后开展猪喘气病的预防工作创造了有利条件。     

番鸭呼肠孤病毒弱毒株选育研究

应用番鸭胚成纤维细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF)交替传代选育出适应CEF繁殖的番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗株。该弱毒株已失去对1日龄雏番鸭的致病性,对CEF的TCID50稳定在10-5~10-5.5;在雏番鸭体内连续盲传5代,未见毒力返强现象;1日龄雏番鸭免疫不同代次弱毒后7 d攻击番鸭呼肠孤病毒强毒,保护率均在88%以上,且不同代次弱毒的外源病毒检验结果均为阴性。上述结果表明该弱毒株无外源病毒污染、安全性好、遗传性稳定、免疫原性强,可用于制备番鸭呼肠孤病毒病活疫苗。     

烟草花叶病毒弱毒株的筛选及其交互保护作用

采用高温、亚硝酸及两者的复合处理对烟草花叶病毒（TMV）强毒株进行诱变，均可有效提高突变频率，而且复合处理还有较好的协同效应，经生物学接种鉴定及血清学方法筛选，从中获得了TMV-017和TMV-1522个弱毒株，用正交设计法考察病毒接种浓度，接种间隔时间，接种部位以及普通烟生育期等因素对弱毒株交互保护作用的影响，发现以烟株生育期和接种间隔时间两因素影响最大，本试验结果表明，在烟草团棵期，弱毒株和强毒株接种间隔时间为17d时，交互保护作用效果最好。     

非典型性猪瘟的诊断和防制

猪瘟病毒是猪最重要的病原之一 ,中等毒力的猪瘟病毒可导致猪瘟慢性感染 ,其间不断向外界排毒 ,直到死亡。仔猪猪瘟往往是先天感染低毒株猪瘟病毒 ,出生后又受到持续感染 ,免疫反应弱 ,引发非典型性猪瘟 ,给猪场造成较大经济损失 ,值得高度重视     

鸡新城疫病毒强毒株的分离与鉴定

从河北、天津、北京等省市发病鸡群中分离到8株有血凝性的分离物,其血凝作用可被新城疫阳性血清所抑制,而不能被AIV(H9亚型)、EDS76阳性血清所抑制,表明8株分离物均为新城疫病毒。利用鸡胚终点稀释法对这8株NDV进行了克隆。对8株NDV的毒力指数(MDT、ICPI、IVPI)测定结果显示:MDT在42 9～49 5h之间,ICPI在1 95～2 00之间,IVPI在2 68～2 89之间。表明8株NDV均为新城疫病毒强毒株,其毒力与标准强毒株F48E8相近。各分离毒株经2%磷钨酸负染后,电镜下观察,可见丝状、圆形或不规则形态的病毒粒子,表面有纤突样结构。各毒株的大小不尽相同,粒子直径或长轴在100～500nm之间。     

猪瘟病毒新疆南疆野毒株E2基因高变区扩增及序列分析

参考已发表在GenBank中CSFV Alfort毒株的E2蛋白基因序列，选择其抗原编码高变区作为扩增的靶区域，设计了一对特异性引物。用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取猪瘟病料细胞总RNA，对其进行了RT—PCR扩增。结果得到了与设计大小272bp完全相符的核酸带，并对PCR产物直接进行了核苷酸序列测定。将所测序列与中国C株同段序列进行了比较和分析。结果发现与中国C株核苷酸的同源性均为82．8％；推导的氨基酸同源性为88．3％；两野毒株均有33个碱基发生改变。并用此病料对加日龄易感仔猪成功进行了人工感染试验，结果发现能引起比较典型的猪瘟临床症状和病理变化，表明新疆南疆存在着中等或倔强毒力的野毒株。     

禽流感病毒的亚型鉴定及致病力研究

用已知的AIV亚型毒株抗原，采用血清学分型方法和毒力测定试验，鉴定从陕西省不同地区发生AI鸡群中分离的A型AIV的亚型和致病力。结果证明，3株AIV属H9N2（A1，A2，A4）；1株属H11N6（A5）。4株AIV的鸡胚尿囊液分别感染试验鸡后，发病死亡率分别为37.5%、25．0％、37．5％和12．5％，均为中等毒力以下毒株。     

广西地方非典型猪瘟病毒的观察研究

从广西一个发生猪瘟的猪场的１０日龄仔猪中分离到一株猪瘟病毒（ＨＣＶ），人工接种于４５日龄未免疫的断奶仔猪及猪肾传代细胞，观察其病原性，与用猪瘟石门系强毒株进行比较，表明该毒株毒力较弱，临床症状及病理剖检变化均不典型。说明广西存在由这种毒力较弱的毒株引起的非典型猪瘟流行。     

茶毛虫核型多角体病毒毒株分化对病毒增殖和毒效的影响

为明确茶毛虫核型多角体病毒(EpNPV)毒株分化对病毒增殖和毒效的影响,分别采用室内活体增殖和生物测定的方法,测定了4个EpNPV分离株的病毒增殖产量和EpNPV分离株组合的协同作用.结果表明,4个EpNPV分离株的病毒增殖产量没有显著差异,其中浙江毒株的病毒产量较其他3个毒株略高,病毒产量为48.17×108PIB·g-1.浙江毒株与贵州毒株1:1组合后,协同毒力始终为相加作用;与湖北毒株1:1组合后,前期表现为拮抗作用,后期为相加作用.结论认为,EpNPV毒株分化对病毒增殖和毒效没有不利影响,浙江毒株是室内病毒增殖和田间应用的首选毒株.     

烟草花叶病毒弱毒株的筛选及其交互保护作用

采用高温、亚硝酸及两者的复合处理对烟草花叶病毒 (TMV)强毒株进行诱变 ,均可有效提高突变频率 ,而且复合处理还有较好的协同效应 .经生物学接种鉴定及血清学方法筛选 ,从中获得了 TMV- 0 17和TMV- 15 2 2个弱毒株 .用正交设计法考察病毒接种浓度、接种间隔时间、接种部位以及普通烟生育期等因素对弱毒株交互保护作用的影响 ,发现以烟株生育期和接种间隔时间两因素影响最大 .本试验结果表明 ,在烟草团棵期 ,弱毒株和强毒株接种间隔时间为 17d时 ,交互保护作用效果最好     

鸡传染性法氏囊病毒3个毒株VP2高变区的基因扩增与序列分析

以用疫苗株V-hb和V1免疫后又发病的病鸡法氏囊分离毒株HeB-bdI的基因组RNA为模板,利用RT-PCR/Nested-PCR扩增出了cDNA产物.并对其VP2高变区基因序列测定,同时测定了V-hb和V1的基因序列.序列分析表明HeB-bdI毒株与UK661同源性较高为98.4%,而与弱毒株Cu-1、非致病性株PBG98和变异株相差较大;而疫苗株V-hb和V1疫苗株与HeB-bdI毒株的同源性较低仅为93.1%.     

不同毒力新城疫病毒在鸡体内的分布

为研究禽产品携带新城疫病毒的情况，给一日龄雏鸡脑内接种不同毒力新城疫病毒，无菌采取心、肝、脾、肺、肾、脑、骨髓、气管、肌胃和腺胃、肠道、爪、腿部肌肉、翅膀、皮肤、粪便，进行新城疫病毒的分离。结果表明，不同毒力的新城疫毒株在鸡体内的分布是不同的，即从新城疫参考强毒株、中毒株接种雏鸡的组织器官中回收到的病毒比参考弱毒株接种雏鸡回收到的病毒多。对禽产品、粪拭子进行病原分离是口岸检验检疫部门对ND实施监控的二个重要环节和有效手段。