小鼠睾丸组织中转录因子Ets1、Ets2cDNA的克隆与测序

为了研究转录因子Ets1、Ets2在睾丸组织中有无表达,试验采用Trizol法提取了正常小鼠睾丸组织的总RNA,RT - PCR反应后进行序列测定.结果表明:转录因子Ets1、Ets2在正常小鼠睾丸组织中均有表达.     

在缺少SRY基因的男性个体中SOX9的表达上调

在哺乳动物中,正常的性别是由是否存在Y-染色体基因SRY所决定的。SRY基因在未分化的性腺中表达以后,大量与睾丸分化相关的转录因子和生长因子基因开始特异性表达。然而,在XX雄性个体中这些基因一定在缺少SRY基因的情况下得到上调,但是XX雄性个体中缺少SRY基因的原因还不清楚。作者检测了标记的典型性腺基因在缺少SRY基因的XX雄性睾丸中的表达。结果发现,RT-PCR和免疫组化研究结果显示在缺少SRY基因的XX雄性的睾丸组织中SOX9,DAX-1,Ad4BP/SR-1,WT-1,GATA-4和MIS得到了表达。这些病人睾丸组织中SOX9的表达水平是正常XY个体睾丸组织中的1.9倍,而Ad4BP/SF-1,DAX-1和MIS的表达水平SRY缺少的XX个体睾丸低于XY个体的睾丸。所有的XX病人被发现在每个二倍体基因组中带有两个拷贝的SOX9基因,如同正常的XX雌性和XY雄性。XX雄性病人带有两个拷贝的DAX-1基因和正常的XX雌性一样,而正常XY雄性带有1个DAX-1基因。资料表明Lesions影响SOX9的表达是缺少SRY基因的XX雄性性别决定的关键因素,并且Ad4BP/SF-1,DAX-1和MIS表达水平的降低有...     

大肠埃希氏菌诱导小鼠乳腺纤维化模型中瘦素及其受体、MMPs和TIMPs表达的研究

为探究Leptin、Ob-R、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2对小鼠乳腺组织纤维化的作用,用奶牛乳腺炎大肠埃希氏菌感染小鼠乳腺后,分别于感染后1、3、7、14、21 d采集小鼠乳腺组织,应用免疫组化染色检测Leptin、Ob-R、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2在小鼠乳腺组织细胞中的表达与分布,应用qPCR、Western blot方法检测小鼠乳腺组织中Leptin、Ob-R、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2 mRNA转录水平和蛋白表达水平。结果显示,小鼠感染E.coli前期(1～7 d),Leptin、Ob-R、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2主要在上皮细胞,炎性细胞中表达,感染后期(14～21 d)主要在上皮细胞、成纤维细胞和炎性细胞中表达。qPCR检测mRNA转录水平,E.coli感染1～14 d, Leptin、Ob-R、MMP-2和MMP-9的转录水平均显著上升,TIMP-2的mRNA转录水平极显著下降,感染后期(14～21 d)Leptin、Ob-R、MMP-2、TIMP-1和TIMP-2的mRNA转录...     

日粮添加不同水平芦丁对热应激小鼠睾丸组织的影响

本试验旨在探讨日粮添加不同水平芦丁对缓解热应激小鼠睾丸组织损伤的影响。将30只5周龄体重相近（20～22 g）的ICR系雄性小鼠随机分为5组,各组小鼠分别饲喂基础日粮添加0（CON组）、0（HS组）、250（HS+R250）、500（HS+R500）和1 000（HS+R1000） mg·kg^-1芦丁的日粮,饲养10 d后,除对照组（CON）外,所有小鼠在每天10：00至14：00之间置于42℃恒温箱中连续处理8 d后屠宰取样分析。结果显示：1）与CON组相比,HS组小鼠睾丸指数无显著变化（P>0.05）,而日粮添加250 mg·kg^-1芦丁显著提高热应激小鼠睾丸指数（P<0.05）;小鼠睾丸组织切片结果显示,与CON组相比,HS组小鼠生精小管直径和横截面积显著降低（P<0.05）,生精细胞脱落比率显著增加（P<0.05）;与HS组相比,HS+R250组小鼠生精小管横截面积显著增加（P<0.05）,生精细胞脱落比率显著降低（P<0.05）,HS+R500组生精细胞脱落比率也显著降低（P<0.05）,HS+R1000组小鼠生精小管直径显著增加（P<0.05）;小鼠睾丸指数、生精小管直径及生精小管脱落比率在芦丁处理组与CON组之间无显著差异（P>0.05）,但HS+R250组小鼠睾丸生精小管横截面积显著高于CON组（P<0.05）。2）与CON组相比,HS组小鼠睾丸组织丙二醛（MDA）含量显著升高（P<0.05）,总抗氧化能力（T-AOC）与还原型谷胱甘肽（GSH）含量以及血红素酶-1（HO-1） mRNA的表达量均显著降低（P<0.05）;日粮添加250 mg·kg^-1芦丁显著降低热应激小鼠睾丸组织中MDA含量（P<0.05）,提高T-AOC与GSH含量（P<0.05）,并增强核因子E2相关因子2（Nrf2）、HO-1和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px） mRNA的表达量（P<0.05）,而添加500和1 000 mg·kg^-1芦丁也显著提高了GSH含量（P<0.05）;与CON组相比,除HS+R250组Nrf2 mRNA表达量显著高于CON组（P<0.05）外,芦丁组热应激小鼠睾丸组织抗氧化相应基因与酶活指标均无显著性变化（P>0.05）。3）热应激小鼠睾丸中核因子-κB （NF-κB）、TOLL样受体4（TLR-4）和Bax的mRNA表达量显著增加（P<0.05）,而Bcl-2表达量显著降低（P<0.05）;日粮添加250 mg·kg^-1芦丁显著降低NF-κB、TLR-4、髓样分化因子88（MyD88）、白细胞介素-Iβ（IL-1β）和Bax mRNA表达量（P<0.05）,增强Bcl-2的表达水平（P<0.05）;添加500 mg·kg^-1芦丁显著降低NF-κB和TLR-4表达量（P<0.05）,而1 000 mg·kg^-1芦丁能够显著增加Bcl-2的表达（P<0.05）;小鼠睾丸组织中免疫和增值凋亡相关基因的表达量在添加芦丁组及CON组之间无显著性差异（P>0.05）。结果提示,日粮添加适宜剂量芦丁具有改善热应激小鼠睾丸组织形态及功能的效果,其机制可能与芦丁通过Nrf2信号通路缓解氧化应激,通过TLR-4/NF-κB信号通路抑制炎症反应及调控Bax/Bcl-2 mRNA的表达密切相关。本试验条件下日粮添加250 mg·kg^-1芦丁的效果较好。     

牛IRX3基因启动子转录调控分析

旨在探究牛IRX3基因组织表达规律,并鉴定其启动子区关键转录因子,以期阐明其转录调控机制。本研究采集3头成年公牛心、肝、脾、肺、肾、皮下脂肪、背最长肌、大肠、小肠、网胃、瘤胃、皱胃及睾丸组织,利用荧光定量PCR检测IRX3基因在不同组织中相对表达量。同时克隆牛IRX3基因1.8 kb启动子区序列并构建其启动子6个不同缺失片段的双荧光素酶报告载体,分别转染3T3-L1和C2C12细胞系。进一步利用在线软件预测核心启动子区关键转录因子,借助定点突变及siRNA干扰技术在3T3-L1细胞系内初步鉴定关键转录因子对IRX3基因的转录调控作用。结果表明,IRX3基因在牛13个不同组织中均有表达,且在肺、肾、心、皮下脂肪、背最长肌中高表达(P0.05)。利用双荧光素酶报告载体检测到牛IRX3基因核心区域在-372/-42 bp。结合定点突变及siRNA干扰技术初步鉴定NRF1、KLF4、HOXA5和CREB1转录因子对IRX3基因的转录活性有重要的调控作用。综上表明,牛IRX3基因在背最长肌和脂肪组织中表达量相对较高,其启动子1.8 kb区有8个CpG岛,核心区关键转录因子NRF1、KLF4、HOXA5和CREB1位于CpG岛内且调控IRX3基因转录活性。本研究结果为探究IRX3基因在牛脂肪沉积过程中的分子调控机制奠定了重要理论基础。     

德州驴与泌阳驴睾丸组织mRNA与microRNA表达鉴定与分析

试验旨在探究驴睾丸组织中mRNA和microRNA的表达模式，为中国地方驴的转录组研究提供遗传数据。利用RNA-Seq和生物信息学方法分析了中国地方驴睾丸组织表达基因和microRNA，并分析了泌阳驴和德州驴品种间差异表达基因及microRNA。结果表明，mRNA平均clean reads为57837506条，Small RNA平均clean reads为9952015条，分别占原始数据的96.34%和88.86%。在驴睾丸组织中共发现24751个表达基因及1074个表达microRNAs，其中，睾丸组织表达量较高的基因为LOC106836782、XLOC_066401、HSP90AA1、TNP1和COF2，表达量最高的microRNAs为eca-miR-143、eca-miR-21、eca-miR-99a、eca-miR-148a和eca-miR-26a。对泌阳驴与德州驴睾丸组织进行差异表达分析共发现102个差异表达基因及2个差异表达microRNAs，但未富集到功能条目，说明泌阳驴和德州驴品种间差异不明显。本研究提供了驴睾丸组织mRNA及microRNA表达模式和转录组学数据，并鉴定了泌阳驴与德州驴睾丸组织的差异表达mRNA和microRNA，对驴的遗传资源研究具有一定的科学意义。     

德州驴与泌阳驴睾丸组织mRNA与microRNA表达鉴定与分析

试验旨在探究驴睾丸组织中mRNA和microRNA的表达模式,为中国地方驴的转录组研究提供遗传数据。利用RNA-Seq和生物信息学方法分析了中国地方驴睾丸组织表达基因和microRNA,并分析了泌阳驴和德州驴品种间差异表达基因及microRNA。结果表明,mRNA平均clean reads为57 837 506条,Small RNA平均clean reads为9 952 015条,分别占原始数据的96.34%和88.86%。在驴睾丸组织中共发现24 751个表达基因及1 074个表达microRNAs,其中,睾丸组织表达量较高的基因为LOC106836782、XLOC_066401、HSP90AA1、TNP1和COF2,表达量最高的microRNAs为eca-miR-143、eca-miR-21、eca-miR-99a、eca-miR-148a和eca-miR-26a。对泌阳驴与德州驴睾丸组织进行差异表达分析共发现102个差异表达基因及2个差异表达microRNAs,但未富集到功能条目,说明泌阳驴和德州驴品种间差异不明显。本研究提供了驴睾丸组织mRNA及microRNA表达模式和转录组学数据,并鉴定了泌阳驴与德州驴睾丸组织的差异表达mRNA和microRNA,对驴的遗传资源研究具有一定的科学意义。     

睾丸肾上腺素能受体和胆碱能受体的分布及神经递质对睾丸间质细胞增殖的影响

试验旨在研究不同发育时期小鼠睾丸肾上腺素能受体(β1AR、β2AR、β3AR、α1A、α1B和α1D)和胆碱能受体(M1、M2、M3、M4和M5)mRNA的表达,以及神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对发育期小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。RT-PCR结果表明,β1AR和β2AR mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,β3AR、α1A和α1B mRNA在小鼠发育早期的睾丸表达,在成年期睾丸不表达,α1D mRNA在睾丸发育的早期不表达,成年期表达;胆碱能受体M1R、M2R、M3R和M5R mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,而M4R mRNA主要在成年期表达。另外通过NE和Ach处理体外培养的发育期睾丸间质细胞,发现Ach处理组BrdU阳性细胞的数量明显增加(P＜0.01)。结果表明,肾上腺素能受体和胆碱能受体在小鼠睾丸的整个发育时期都表达,Ach可促进发育期小鼠睾丸间质细胞的增殖。     

蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因mRNA在小鼠睾丸发育过程中的表达

为探讨蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2 mRNA在小鼠出生后睾丸发育过程中的表达规律,本试验以16组出生后不同发育阶段的昆明种健康小鼠的睾丸组织为材料,经Real-time PCR检测小鼠出生后睾丸中Shp2基因mRNA的表达变化。结果显示,Shp2基因mRNA在小鼠出生后睾丸发育过程中连续表达,且第20~31天出现明显波动,20 d时Shp2表达量极显著增加(P<0.01),然后下降(P<0.01),在31 d再次极显著增加(P<0.01),31 d后,Shp2的表达量又逐渐恢复平稳(P>0.05)。上述结果表明,Shp2基因的连续性表达及在特定发育阶段表达量的明显波动,预示着Shp2参与小鼠出生后睾丸发育的全过程,但具体作用如何还有待进一步研究。     

性激素受体在子午岭黑山羊隐睾及正常睾丸中的分布比较

旨在研究性激素受体[雄激素受体（androgen receptor,AR）、雌激素受体（estrogen receptor,ER）]在子午岭黑山羊正常睾丸与隐睾组织中的分布与隐睾症的关系,应用免疫组织化学及免疫荧光技术方法结合形态计量学统计软件,比较了正常睾丸与隐睾的组织化学特点。特殊染色结果显示：与正常组相比,隐睾组间质组织疏松,管腔面积明显减小,糖原含量明显减少,胶原纤维及网状纤维含量增多。免疫组化及免疫荧光结果显示：1） AR在正常睾丸组Leydig细胞呈高密度强阳性表达,在各级生精细胞呈中等强度阳性表达,隐睾组中Leydig细胞及各级生精细胞表达明显减弱,且在精原细胞偶见表达;2） ER在正常睾丸Leydig细胞呈高密度强阳性表达,管周肌样细胞呈中等强度阳性表达,Sertoli细胞偶见表达,各级生精细胞无表达;3） ER在隐睾Leydig细胞、初级精母细胞、精原细胞和Sertoli细胞中均呈中等强度阳性表达;4）统计结果显示,隐睾组AR的平均光密度较正常组显著降低（P<0.05）,而ER的平均光密度则显著高于正常组（P<0.01）,且隐睾组AR与ER表达量比值基本接近1：1。子午岭黑山羊隐睾组织胶原纤维和网状纤维分布较正常睾丸多,生精小管基膜主要成分以中性糖蛋白为主,酸性糖蛋白含量明显降低影响精子的正常形成;隐睾组织精原细胞及Sertoli细胞ER与AR表达失常尤为明显,可为哺乳动物隐睾的相关研究提供一定参考。     

Expression and localization of growth factors and their receptors in the mammalian testis. Part I: Fibroblast growth factors and insulin-like growth factors

It is now well established that normal development and function of testis are mediated by endocrine and paracrine pathways including hormones, growth factors and cytokines as well as by direct cell-to-cell contacts depending on tight, adhering and gap junctions. In the last two decades, several growth factors were identified in the testis of various mammalian species. Growth factors are shown to promote cell proliferation, regulate tissue differentiation, and modulate organogenesis. Interestingly, most of these peptides are expressed not only in the adult mammalian testis during spermatogenesis but also during testicular morphogenesis in prenatal and postnatal life. Our study was launched to provide an overview of the expression, localization, and putative physiological roles of growth factors and their receptors in the mammalian testis. The growth factors considered in this part of our review are fibroblast growth factors and insulin-like growth factors. These factors are found in testicular cells in prenatal, postnatal, and adult animals and are implicated in the regulation of important testicular activities including testicular cord morphogenesis, modulation of testicular hormone secretion and control of spermatogenesis.     

Cancer‐testis antigens in canine histiocytic sarcoma and other malignancies

Cancer‐testis antigens (CTAs) are a category of self proteins aberrantly expressed in diverse malignancies, mostly solid tumours, due to epigenetic de‐repression. Normally expressed only in fetal or gametogenic tissues, CTAs are tantalizing immunotherapy targets, since autoimmunity risks appear minimal. Few prevalent CTAs have been identified in human hematologic cancers, and just two in their veterinary counterparts. We sought to discover new CTAs in canine hematologic cancers such as histiocytic sarcoma (HS) and lymphoma to foster immunotherapy development. To accomplish this, the ligandome binding the dog leukocyte antigen (DLA)‐88*508:01 class I allele overexpressed in an HS line was searched by mass spectrometry to identify possible CTA‐derived peptides, which could serve as CD8+ T‐cell epitopes. Twenty‐two peptides mapped to 5 human CTAs and 12 additional proteins with CTA characteristics. Expression of five promising candidates was then evaluated in tumour and normal tissue by quantitative and end‐point RT‐PCR. The ortholog of an established CTA, IGF2BP3, had unexpectedly high expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Four other testis‐enhanced proteins were also assessed. AKR1E2, SPECC1 and TPX2 were expressed variably in HS and T‐cell lymphoma biopsies, but also at high levels in critical tissues, including kidney, brain and marrow, diminishing their utility. A more tissue‐restricted candidate, NT5C1B, was detected in T‐cell lymphomas, but also at low levels in some normal dog tissues. These results illustrate the feasibility of discovering canine CTAs by a reverse approach, proceeding from identification of MHC class I‐presented peptides to a comparative RNA expression survey of tumours and normal tissues.     

FGF22及其受体在庆阳黑山羊正常睾丸与隐睾中的表达比较

试验旨在研究成纤维生长因子22（fibroblast growth factor 22,FGF22）及其受体2（fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2）、硫酸乙酰肝素糖蛋白（heparan sulfate proteoglycans,HSPG）在庆阳黑山羊正常睾丸与隐睾中的分布与表达,探究其在山羊睾丸发育和隐睾形成中的作用。采用HE和特殊染色观察其组织学结构特征,进而以免疫组织化学及免疫荧光法结合形态计量学统计研究FGF22、FGFR2和HSPG在山羊正常睾丸及隐睾中的定位。结果表明,山羊隐睾较正常睾丸生精小管缩窄,腔内各级生精细胞排列紊乱,间质的胶原纤维和网状纤维增多,糖原类物质阳性反应较弱,FGF22在隐睾组织的Leydig、Sertoli细胞、管周肌样细胞及血管内皮细胞整体表达密度相较于正常睾丸显著减弱（P<0.05）。HSPG在正常睾丸表达显著强于隐睾（P<0.05）,间质组织变化尤其明显。FGFR2在隐睾组表达显著增高（P<0.05）,且以Sertoli细胞强阳性表达为主。庆阳黑山羊隐睾较正常睾丸发育异常,间质组织有纤维化趋势,糖原类物质含量减少;FGF22及HSPG表达降低应与隐睾局部环境温度变化密切相关;FGFR2在隐睾组表达增高提示其在发生隐睾时可能通过Sertoli细胞进行适应性调节。     

程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3基因表达的研究

试验旨在研究程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3蛋白的分布及转录水平的差异表达情况,为阐明哺乳动物胚胎在抗冻过程中的相关调控机制提供理论依据。试验选用ICR系雌性小鼠,从妊娠第5天小鼠子宫回收正常孵化囊胚;构建延迟着床模型获取小鼠休眠胚胎,利用激光共聚焦和实时荧光定量PCR技术对各组胚胎进行细胞免疫荧光和C3 mRNA相对表达量的检测。结果发现,程序化冷冻前后的正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3在转录和翻译水平均有表达;正常孵化囊胚经冷冻处理后C3 mRNA相对表达量显著上调（P < 0.05）;休眠胚胎冷冻后C3 mRNA相对表达量与冷冻前相比显著下调（P < 0.05）;冷冻前休眠胚胎C3 mRNA相对表达量显著高于冷冻前正常孵化囊胚（P < 0.05）;冷冻后休眠胚胎C3 mRNA相对表达量显著低于冷冻后正常孵化囊胚（P < 0.05）。结果表明,胚胎中C3基因在转录水平的下调表达对胚胎抗冻具有一定的积极作用,C3基因很可能参与了胚胎抗冻过程的相关调控。