MiR-139进化分析、靶基因功能预测以及在猪睾丸组织中的表达分析

为探究miRNA-139进化进程及其潜在靶基因功能,以及miR-139在猪睾丸发育过程中的表达差异和变化规律,本研究通过miRbase数据库获取全物种miR-139成熟序列,在Ensembl数据库中定位miR-139在多物种基因组中的位置;通过MEGA X软件选用邻近法构建关于miR-139的系统进化树;利用RT-qP...     

差异表达基因克隆技术的研究进展

随着基因组计划的顺利实施,大量的生物信息被解析,分离并克隆差异表达基因已成为生命科学研究的热点.近些年来,国内外学者发展了多种分析差异表达基因的技术.现就目前主要使用的一些技术作一综述.     

利用鸡胚模型进行基因功能研究的技术和方法

鸡胚作为经典的胚胎生物学模型被用来研究发育学现象几十年前就有报道.随着新的技术手段的发明和鸡的基因组序列的完善,鸡胚又重新成为了研究发育过程中重要基因功能的模型.基因功能获得和缺失是研究基因功能的重要手段.本文讨论了可以在胚胎发育早期调整基因功能的转基因技术和方法.     

逆转录病毒载体及其在动物病毒病的研究进展

逆转录病毒系统由于其病毒的高感染效率,在RNA干扰中的应用越来越多,在对基因功能的研究中起了很大的作用.逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统,由逆转录病毒载体、包膜蛋白载体和包装细胞系组成.逆转录病毒载体具有基因组结构简单,便于基因操作、转染效率高、容量较大、宿主范围广、易于分离等优点,在外源基因表达、基因...     

副猪嗜血杆菌血清4型全基因组序列草图测定与分析

本研究应用Illumina Hiseq 2000测序系统对副猪嗜血杆菌(HPS)血清4型gx033株进行全基因组序列测定,经过DNA文库构建、测序、数据过滤和组装,绘制了全基因组草图.全基因组草图显示,HPS血清4型的基因组大小为2 155 493 bp,G+C含量为39.79％,含有编码基因2 189个,基因总长度1 881 801 bp.基因功能注释表明,849个基因功能尚不明确,1 340个基因被分为能量产生和转化、转录和细胞周期调控等19个功能组.该HPS血清4型全基因组草图的绘制为HPS病的致病机制等研究提供依据.     

宏基因组测序分析野生林麝瘤胃、小肠和大肠微生物组成和抗生素抗性基因

本试验旨在研究野生林麝(Moschus berezovskii)瘤胃、小肠和大肠微生物组成和抗生素抗性基因.采集野生林麝消化道3个区段(瘤胃、小肠和大肠)的内容物进行宏基因组测序,并进行常规物种注释和抗生素抗性基因功能注释.结果表明:3个区段共有优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobact...     

斑马鱼成纤维细胞生长因子(FGFs)信号肽的预测分析

斑马鱼(Danio rerio)是鲤科短担尼尔属的一种热带观赏鱼[1].斑马鱼作为一种新型的脊椎模式生物,可以进行大规模的正向基因饱和突变与筛选[2].随着斑马鱼基因组测序工程的完成,接着需要进行的就是斑马鱼的基因功能组、转录组、蛋白质组及代谢组学的研究.较准确地注释斑马鱼基因组以及从整体上了解基因家族的结构特点和功能对积极推动基因功能研究具有重要意义.     

猪传染性胃肠炎病毒反向遗传研究进展

从猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的分子生物学特性、TGEV的反向遗传系统的建立及其在TGEV研究中的应用等角度对国外TGEV反向遗传研究进展作一综述。TGEV全长基因组反向遗传系统的成功建立,极大推动了TGEV的复制机制、基因功能及作为疫苗开发的表达载体的研究。     

抑制消减杂交技术及其在动物繁育研究中的应用

基因是染色体上具有一定座位的遗传单位.基因表型克隆法是以mRNA为起始材料,利用RT-PCR和接头技术,对差异显示的基因条带进行回收后作探针,在cDNA或基因组DNA文库中筛选新基因.这方面发展起来的新技术主要有：cDNA差式分析法（RDA）、标签接头竞争PCR技术（ATAC-PCR）、抑制消减杂交法（SSH）、基因表达连续分析法（SAGE）、cDNA3＇端限制酶切片段显示法（RFD）等,这些技术省去了分子标记定位分析的繁琐程序,并同时能分离多个未知产物的差异表达基因.其中,抑制性消减杂交技术是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术,具有检测的特殊性,在动物和人类的生殖和发育领域广泛应用.     

沟叶结缕草高温胁迫的基因差异表达及其作用机制

为了从基因表达水平研究沟叶结缕草(Zoysia matrella)高温耐热性的分子机制,利用SSH方法构建了沟叶结缕草对高温(40℃)处理响应的正向差减文库.通过reverse northern杂交方法筛选文库,挑选出高温胁迫处理下35个差异表达基因,对这些基因进行测序,并将测序所得结果与基因组数据库(NCBI)进行比对,从而获得了26个基因功能已知的差异表达基因.这些已知基因分别参与信号转导、植物代谢、植物抗逆性反应、基因表达调控和蛋白质合成等过程.     

功能基因组学研究进展

基因组研究计划包括以全基因组测序为目标的结构基因组学和以基因功能鉴定为目标的功能基因组学2方面的内容.作者对功能基因组的主要研究方法:微阵列或DNA芯片、表达序列标签法、基因表达系列分析法、蛋白质组学分析法以及反向遗传学技术等进行了简要介绍,同时综述了上述各种技术的优缺点以及部分生物功能基因组的研究进展.     

差异表达基因分离技术及其在家禽研究中的应用

随着分子生物学技术的发展以及基因组计划的实施,差异表达基因的分离与克隆已成为近年来研究的热点.通过对不同生命活动中各种相关基因进行筛选和研究,能够使我们更好地了解这些生命活动的分子作用机制.本文就近年来比较常用的差异表达基因分离技术及其在家禽研究中应用的进展进行综述.     

逆转座子及其在真核生物基因组进化中的作用

基因组内的转座子,特别是逆转座子以不同的方式推动着基因组的进化.在植物和哺乳动物中,逆转座子不断积聚,已经占了基因组成的一大部分,不仅对基因而且对基因组都有较大的影响.虽然宿主常能够控制它们的数量,但在整个的进化中它们的大量的扩增还是被保留了下来.现在,它们已经成了研究基因进化和基因功能的非常有用的工具.     

猪肺炎支原体基因组学研究进展

一个生物的全部DNA序列称作该生物的基因组(geneome),基因(gene)是基因组中有关蛋白质遗传信息的编码单位.基因组学是关于基因组结构、基因功能以及基因组比较的一门科学.支原体(Mycoplasma)由于基因组比较小,是属于最早被进行基因组测序的微生物物种之一.1995年10月,人类完成了第一个原核生物,即生殖支原体G37株的基因组测序.目前已完成了17株支原体基因组测序.本文主要介绍一下猪肺炎支原体基因组结构特点.     

金黄地鼠Kcnq1基因的分子克隆与鉴定以及在多种器官组织中的表达差异分析

本研究对金黄地鼠Kcnq1基因进行分子克隆与鉴定以及在多种器官组织的表达差异进行分析,旨在研究Kcnq1基因在地鼠各组织器官中的功能.提取金黄地鼠心脏组织总RNA,根据大鼠Kcnq1的保守序列区域设计引物TK1,用RT-PCR化后的cDNA在T4连接酶的作用下与pMD18-T载体特异性连接,转化感受态大肠杆菌DH5a中,筛选重组子并酶切鉴定,将鉴定后的重组子进行DNA测序.提取心、肝、脾、肺、肾各组织总RNA,并反转,将各组织cDNA做荧光定量检测,检测各组织表达量的差异.结果,克隆出金黄地鼠Kcnq1基因477 bp的部分片段长度,推测出编码的159个氨基酸.与大鼠等物种Kcnq1基因比对,核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性.荧光定量结果显示,Kcnq1在金黄地鼠心脏中表达量最高,在肺脏和肾脏中均有较高表达,在脾脏中低度表达,在肾脏中基本不表达.该研究结果为深入研究金黄地鼠KCNQ1基因功能奠定了基础.     

RNA干扰文库研究进展及其应用

RNA干扰是一种在进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,存在于许多不同种属的生物体中,在生物体细胞之间进行传递,具有抵抗病毒入侵和维持基因组稳定的作用.RNA干扰文库是以RNA干扰技术为基础建立的一种简单、高效、大规模、高通量的功能基因组学研究的工具,应用于大规模基因功能的筛选,在基因功能研究、发现新的药物靶基因和疾病相关基因等方面具有广阔的应用前景.     

模式生物及其在分子生物学研究中的意义

模式生物在生命科学的研究中有着重要的意义,特别是随着功能基因组计划的开展,数种生物的基因组序列已获得,这对基因功能的深入研究打下了坚实的基础。文章简要介绍了几种经典模式生物的概况。     

消减cDNA文库差异表达基因检测分析方法的研究进展

同已有的差异表达基因分离方法相比,抑制消减杂交以其快速、高效及假阳性率低等优点被广泛应用,并形成了反向Northern斑点杂交和表达谱基因芯片技术2种差减cDNA文库筛选方法,同时,快速发展的生物信息学为文库中大量阳性差异表达片段的序列分析提供了最有力的技术手段,而RT-PCR和实时荧光定量PCR为进一步在mRNA水平验证基因的表达差异性和初步揭示基因功能奠定了技术基础。作者在简要综述上述各方法的原理、特点及应用基础上指出,先测序后筛库的研究策略可以在成本增加较低的前提下大幅度提高差异表达基因的研究效率。     

猪NAP1L5基因克隆、序列鉴定及在不同妊娠时期胎盘中的差异表达分析

旨在获得猪NAP1L5基因的序列特征、组织表达及生物学功能等相关信息.本试验通过RT-PCR克隆了猪NAP1L5基因,并运用生物信息学方法分析了不同物种序列进化关系,运用荧光定量PCR技术检测了NAP1L5在梅山猪不同妊娠时期胎盘中的表达.序列分析结果表明,猪NAP1 L5基因CDS全长579 bp,编码193个氨基酸.其核苷酸序列与牛的相似性为89％,其中氨基酸序列包含一段保守的核小体组装蛋白(Nucleosome assembly protein,NAP)特征序列.荧光定量结果表明NAP1L5基因随着妊娠时期的增长呈上升表达,在26和50 d之间表达量差异极显著(P＜0.01).以上结果支持了NAP1L5基因可能与猪胎儿营养获取及早期发育有关,为进一步研究猪NAP1 L5基因的功能奠定了基础.     

RNA干扰技术及其应用研究

RNA干涉作用,是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象,是基因转录后沉默作用(PTGS)的重要机制之一.它能定向关闭生物体内某一基因,使其不发挥作用,同时不影响其他基因的功能,便于研究特定基因的功能.在后基因组时代的基因功能研究、基因治疗和药物开发中具有广阔的应用前景.